結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1對(duì)食管癌細(xì)胞增殖和遷移的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　研究結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(Metastasis Associated In Colon Cancer1，MACC1)對(duì)食管癌細(xì)胞增殖和遷移的作用及可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用RT-PCR及Western blot檢測(cè)不同食管癌細(xì)胞株EC109、EC9706、TE13、EC1和正常食管上皮細(xì)胞株HEEpiC中MACC1的表達(dá)，選取低表達(dá)MACC1的細(xì)胞株TE13和高表達(dá)MACC1的細(xì)胞株EC109進(jìn)

2、行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2.構(gòu)建攜帶MACC1的腺病毒載體Ad-MACC1和MACC1 siRNA，Ad-MACC1感染TE13細(xì)胞，增加MACC1的表達(dá)，MACC1 siRNA轉(zhuǎn)染EC109食管癌細(xì)胞，降低MACC1的表達(dá)，通過Western blot檢測(cè)感染或轉(zhuǎn)染效果。
　　3.Ad-MACC1和MACC1 siRNA分別處理TE13和EC109細(xì)胞后，通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MACC1對(duì)人食管癌細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)MA

3、CC1細(xì)胞周期的影響。采用劃痕實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察感染或轉(zhuǎn)染前后食管癌細(xì)胞侵襲及遷移變化。
　　4.采用Western blot檢測(cè)Ad-MACC1和MACC1 siRNA處理食管癌細(xì)胞TE13和EC109后的增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和c-MET等的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.MACC1在食管癌細(xì)胞株EC9706和Eca109中表達(dá)較正常食管上皮細(xì)胞株HEEpiC中高，而在TE13和EC1中表達(dá)較低。
　　2

4、.成功構(gòu)建Ad-MACC1和MACC1 siRNA，Ad-MACC1感染TE13細(xì)胞后，MACC1基因和蛋白的表達(dá)增加。而MACC1 siRNA轉(zhuǎn)染EC109細(xì)胞后，MACC1基因和蛋白的表達(dá)降低。
　　3.Ad-MACC1感染TE13細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖和遷移明顯的增加。而MACC1 siRNA轉(zhuǎn)染EC109細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖和遷移受到明顯的抑制。
　　4.Ad-MACC1感染TE13細(xì)胞后，PCNA和c-MET基因和蛋白表

5、達(dá)明顯增加，而MACC1siRNA轉(zhuǎn)染EC109細(xì)胞后，PCNA和c-MET基因和蛋白表達(dá)較陰性對(duì)照組降低。
　　結(jié)論:
　　MACC1在EC9706和Eca109中表達(dá)較TE13和EC1高，其高表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移，而表達(dá)下調(diào)后明顯抑制食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移潛能，MACC1高表達(dá)促進(jìn)PCNA和c-MET的表達(dá)，而低表達(dá)抑制其表達(dá)。MACC1促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。其機(jī)制可能通過調(diào)節(jié)下游基因c-MET表