黃芩苷在中國對蝦體內(nèi)的代謝及對諾氟沙星殘留消除規(guī)律的影響研究.pdf

1、水產(chǎn)藥物在水產(chǎn)動物病害防治中占有重要的地位,同時可以促進動物生長,提高養(yǎng)殖效益。其中抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用較多,抗生素的使用在一定程度上控制了細(xì)菌性疾病的發(fā)展,卻也給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來了諸多問題,如藥物殘留事件及耐藥性問題頻頻出現(xiàn),引起了人們對水產(chǎn)品安全的高度重視。中草藥因其低毒、低殘留、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點已逐漸開始應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),大力開展中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的應(yīng)用研究以及開發(fā)無公害漁藥,對水產(chǎn)品安全以及人類的健康都有著非常重要

2、的意義,但是中草藥在實際應(yīng)用中也存在一定的缺陷,如用藥量大,發(fā)揮藥效較慢,基礎(chǔ)研究缺乏,多為經(jīng)驗給藥等。鑒于此,人們開始將中西藥聯(lián)合起來應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中,中西藥聯(lián)合使用逐漸成為一種趨勢。然而,中西藥聯(lián)合使用后在水產(chǎn)動物體內(nèi)的作用機理,中草藥與西藥彼此之間的相互影響,聯(lián)合用藥后藥動學(xué)及藥效學(xué)的變化等方面的報道較少,聯(lián)合用藥缺乏有效的指導(dǎo)。本研究以此為切入點,以重要的水產(chǎn)動物中國對蝦(Fenneropenaeuschinensis)為研究對

3、象,研究黃芩苷在中國對蝦體內(nèi)的代謝及對諾氟沙星殘留消除規(guī)律的影響,研究主要分為以下兩部分:
　　 一、黃芩苷在中國對蝦體內(nèi)的代謝消除規(guī)律及對藥物代謝酶的影響
　　 以中草藥黃芩苷作為受試藥物,中國對蝦連續(xù)7d給予100mg/kg黃芩苷藥餌,HPLC法測定對蝦不同組織中的黃芩苷含量,建立適合中國對蝦的黃芩苷含量的測定方法,研究黃芩苷在中國對蝦不同組織中的代謝及殘留消除規(guī)律。用紫外分光光度法及熒光分光光度法分別測定中國對蝦肝

4、胰腺及鰓中APND、GST、ECOD三種藥物代謝酶的活性,探討黃芩苷對三種酶活性的影響,從酶活水平上研究黃芩苷對中國對蝦的作用機理。在此基礎(chǔ)上以藥物代謝規(guī)律作為藥動學(xué)指標(biāo),藥物代謝酶活性作為藥效學(xué)指標(biāo),建立黃芩苷在對蝦體內(nèi)的PKPD模型。結(jié)果表明,HPLC法黃芩苷與雜質(zhì)分離良好,4個濃度水平的黃芩苷在不同組織中的平均回收率在80.57％-96.25％之間,日內(nèi)精密度在3.26％-5.85％之間,日間精密度在3.88％-5.73％之間。與

5、其它給藥方式相比,黃芩苷藥餌給藥吸收較慢,在血液、肝胰腺、肌肉、鰓中的Tmax依次為6h,3h,6h,3h;黃芩苷在不同組織中的分布為肝胰腺＞鰓＞血液＞肌肉。黃芩苷在肝胰腺、鰓、肌肉、血液中的t1/2β分別為29.62h,27.50h,25.20h,23.73h,消除速度從快到慢依次為血液＞肌肉＞鰓＞肝胰腺;與一些水產(chǎn)常用的抗生素相比,黃芩苷殘留較少,在本試驗條件下肌肉和血液中5d已降到檢測限以下,肝胰腺及鰓7d降到檢測限以下。從酶活性

6、試驗結(jié)果可知,中國對蝦連續(xù)7d投喂黃芩苷藥餌(100mg/kg)后,黃芩苷對幾種酶均有不同程度的誘導(dǎo)作用,酶的活性均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢:肝胰腺和鰓中APND活性均在3h左右達(dá)到最高,ECOD活性均在1h左右達(dá)到最高,而GST活性遲于兩種CYP450酶被誘導(dǎo),兩組織GST活性分別在6h、12h達(dá)到最高水平。在此基礎(chǔ)上建立的PKPD模型符合二元三次方程,且回歸系數(shù)較高,黃芩苷在中國對蝦體內(nèi)的藥物含量與酶活性的變化具有較直接的關(guān)系。本試驗

7、為含黃芩苷的藥物的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù),在臨床用藥中應(yīng)考慮到黃芩苷對藥物代謝酶的誘導(dǎo)作用,適當(dāng)用藥,合理配伍。
　　 二、黃芩苷對諾氟沙星殘留消除規(guī)律的影響研究
　　 中國對蝦分為空白對照組、單一用藥組,聯(lián)合用藥組三組:空白對照組連續(xù)15d投喂空白餌料;單一用藥組連續(xù)5d投喂諾氟沙星藥餌,之后投喂空白餌料10d;聯(lián)合用藥組連續(xù)5d投喂諾氟沙星藥餌,之后連續(xù)投喂黃芩苷藥餌10d。用HPLC法測定單一用藥組與聯(lián)合用藥組中國對蝦體

8、內(nèi)諾氟沙星含量的變化,同時用紫外分光光度法及熒光分光光度法測定三組中國對蝦肝胰腺中APND、ECOD、GST三種藥物代謝酶活性的變化。結(jié)果表明:從代謝消除規(guī)律來看,中國對蝦聯(lián)合用藥組不同組織中諾氟沙星含量逐漸低于單一用藥組,代謝消除速度加快。從殘留情況來看,單一用藥組在停止投喂諾氟沙星藥餌后10d肝胰腺中仍有殘留,而聯(lián)合用藥組此時已檢測不到藥物殘留;單一用藥組與聯(lián)合用藥組在停止投喂諾氟沙星10d肌肉中均檢測不到藥物殘留,在7d單一用藥組

9、含量為0.0271μg/ml,而聯(lián)合用藥組己降到0.01μg/ml;單一用藥組在停藥7d血液中藥物含量降到檢測限以下,而聯(lián)合用藥組6d已降到檢測限以下;單一用藥組停止投喂諾氟沙星后10d鰓中藥物含量為0.011μg/ml,而聯(lián)合用藥組在7d已降到檢測限以下。此外,諾氟沙星與黃芩苷合用后在各組織中的t1/2β明顯縮短,聯(lián)合用藥組的理論休藥期比單一用藥組分別減少了19.71％、23.92％、25.92％、27.82％,說明黃芩苷對諾氟沙星在

10、中國對蝦體內(nèi)的消除有一定的促進作用。從酶活實驗可以看出,單一用藥組APND酶活性先降低后逐漸恢復(fù)至對照組水平,在第5d及第6d顯著低于對照組水平(P＜0.05),聯(lián)合用藥組APND活性先降低后逐漸升高,也在第5d與第6d時顯著低于對照組(P＜0.05),在第15d時極顯著高于對照組水平(P＜0.01),在其它時間都與對照組無明顯差異(P＞0.05):對于ECOD酶而言,單一用藥組ECOD酶活性也逐漸降低后逐漸恢復(fù)至對照組水平,第8d、第

11、10d極顯著低于對照組(P＜0.01),第12d仍顯著低于對照組水平(P＜0.05),而聯(lián)合用藥組只在第8d才表現(xiàn)出明顯的抑制作用(P＜0.05),第15d時表現(xiàn)出明顯誘導(dǎo)作用,與對照組差異極顯著(P＜0.01),其它時間都與對照組無明顯差異(P＞0.05);GST酶活性在投喂諾氟沙星后也表現(xiàn)出抑制作用,單一用藥組在第5d、6d、8d時極顯著低于對照組水平(P＜0.05),而聯(lián)合用藥組只第5d、6d時與對照組相比表現(xiàn)出明顯的抑制作用(P