黃芩苷在中國對(duì)蝦體內(nèi)的代謝及對(duì)諾氟沙星殘留消除規(guī)律的影響研究.pdf

1、水產(chǎn)藥物在水產(chǎn)動(dòng)物病害防治中占有重要的地位,同時(shí)可以促進(jìn)動(dòng)物生長,提高養(yǎng)殖效益。其中抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用較多,抗生素的使用在一定程度上控制了細(xì)菌性疾病的發(fā)展,卻也給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來了諸多問題,如藥物殘留事件及耐藥性問題頻頻出現(xiàn),引起了人們對(duì)水產(chǎn)品安全的高度重視。中草藥因其低毒、低殘留、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)已逐漸開始應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),大力開展中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的應(yīng)用研究以及開發(fā)無公害漁藥,對(duì)水產(chǎn)品安全以及人類的健康都有著非常重要

2、的意義,但是中草藥在實(shí)際應(yīng)用中也存在一定的缺陷,如用藥量大,發(fā)揮藥效較慢,基礎(chǔ)研究缺乏,多為經(jīng)驗(yàn)給藥等。鑒于此,人們開始將中西藥聯(lián)合起來應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中,中西藥聯(lián)合使用逐漸成為一種趨勢(shì)。然而,中西藥聯(lián)合使用后在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的作用機(jī)理,中草藥與西藥彼此之間的相互影響,聯(lián)合用藥后藥動(dòng)學(xué)及藥效學(xué)的變化等方面的報(bào)道較少,聯(lián)合用藥缺乏有效的指導(dǎo)。本研究以此為切入點(diǎn),以重要的水產(chǎn)動(dòng)物中國對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)為研究對(duì)

3、象,研究黃芩苷在中國對(duì)蝦體內(nèi)的代謝及對(duì)諾氟沙星殘留消除規(guī)律的影響,研究主要分為以下兩部分:
　　 一、黃芩苷在中國對(duì)蝦體內(nèi)的代謝消除規(guī)律及對(duì)藥物代謝酶的影響
　　 以中草藥黃芩苷作為受試藥物,中國對(duì)蝦連續(xù)7d給予100mg/kg黃芩苷藥餌,HPLC法測定對(duì)蝦不同組織中的黃芩苷含量,建立適合中國對(duì)蝦的黃芩苷含量的測定方法,研究黃芩苷在中國對(duì)蝦不同組織中的代謝及殘留消除規(guī)律。用紫外分光光度法及熒光分光光度法分別測定中國對(duì)蝦肝

4、胰腺及鰓中APND、GST、ECOD三種藥物代謝酶的活性,探討黃芩苷對(duì)三種酶活性的影響,從酶活水平上研究黃芩苷對(duì)中國對(duì)蝦的作用機(jī)理。在此基礎(chǔ)上以藥物代謝規(guī)律作為藥動(dòng)學(xué)指標(biāo),藥物代謝酶活性作為藥效學(xué)指標(biāo),建立黃芩苷在對(duì)蝦體內(nèi)的PKPD模型。結(jié)果表明,HPLC法黃芩苷與雜質(zhì)分離良好,4個(gè)濃度水平的黃芩苷在不同組織中的平均回收率在80.57％-96.25％之間,日內(nèi)精密度在3.26％-5.85％之間,日間精密度在3.88％-5.73％之間。與

5、其它給藥方式相比,黃芩苷藥餌給藥吸收較慢,在血液、肝胰腺、肌肉、鰓中的Tmax依次為6h,3h,6h,3h;黃芩苷在不同組織中的分布為肝胰腺＞鰓＞血液＞肌肉。黃芩苷在肝胰腺、鰓、肌肉、血液中的t1/2β分別為29.62h,27.50h,25.20h,23.73h,消除速度從快到慢依次為血液＞肌肉＞鰓＞肝胰腺;與一些水產(chǎn)常用的抗生素相比,黃芩苷殘留較少,在本試驗(yàn)條件下肌肉和血液中5d已降到檢測限以下,肝胰腺及鰓7d降到檢測限以下。從酶活性

6、試驗(yàn)結(jié)果可知,中國對(duì)蝦連續(xù)7d投喂黃芩苷藥餌(100mg/kg)后,黃芩苷對(duì)幾種酶均有不同程度的誘導(dǎo)作用,酶的活性均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì):肝胰腺和鰓中APND活性均在3h左右達(dá)到最高,ECOD活性均在1h左右達(dá)到最高,而GST活性遲于兩種CYP450酶被誘導(dǎo),兩組織GST活性分別在6h、12h達(dá)到最高水平。在此基礎(chǔ)上建立的PKPD模型符合二元三次方程,且回歸系數(shù)較高,黃芩苷在中國對(duì)蝦體內(nèi)的藥物含量與酶活性的變化具有較直接的關(guān)系。本試驗(yàn)

7、為含黃芩苷的藥物的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù),在臨床用藥中應(yīng)考慮到黃芩苷對(duì)藥物代謝酶的誘導(dǎo)作用,適當(dāng)用藥,合理配伍。
　　 二、黃芩苷對(duì)諾氟沙星殘留消除規(guī)律的影響研究
　　 中國對(duì)蝦分為空白對(duì)照組、單一用藥組,聯(lián)合用藥組三組:空白對(duì)照組連續(xù)15d投喂空白餌料;單一用藥組連續(xù)5d投喂諾氟沙星藥餌,之后投喂空白餌料10d;聯(lián)合用藥組連續(xù)5d投喂諾氟沙星藥餌,之后連續(xù)投喂黃芩苷藥餌10d。用HPLC法測定單一用藥組與聯(lián)合用藥組中國對(duì)蝦體

8、內(nèi)諾氟沙星含量的變化,同時(shí)用紫外分光光度法及熒光分光光度法測定三組中國對(duì)蝦肝胰腺中APND、ECOD、GST三種藥物代謝酶活性的變化。結(jié)果表明:從代謝消除規(guī)律來看,中國對(duì)蝦聯(lián)合用藥組不同組織中諾氟沙星含量逐漸低于單一用藥組,代謝消除速度加快。從殘留情況來看,單一用藥組在停止投喂諾氟沙星藥餌后10d肝胰腺中仍有殘留,而聯(lián)合用藥組此時(shí)已檢測不到藥物殘留;單一用藥組與聯(lián)合用藥組在停止投喂諾氟沙星10d肌肉中均檢測不到藥物殘留,在7d單一用藥組

9、含量為0.0271μg/ml,而聯(lián)合用藥組己降到0.01μg/ml;單一用藥組在停藥7d血液中藥物含量降到檢測限以下,而聯(lián)合用藥組6d已降到檢測限以下;單一用藥組停止投喂諾氟沙星后10d鰓中藥物含量為0.011μg/ml,而聯(lián)合用藥組在7d已降到檢測限以下。此外,諾氟沙星與黃芩苷合用后在各組織中的t1/2β明顯縮短,聯(lián)合用藥組的理論休藥期比單一用藥組分別減少了19.71％、23.92％、25.92％、27.82％,說明黃芩苷對(duì)諾氟沙星在

10、中國對(duì)蝦體內(nèi)的消除有一定的促進(jìn)作用。從酶活實(shí)驗(yàn)可以看出,單一用藥組APND酶活性先降低后逐漸恢復(fù)至對(duì)照組水平,在第5d及第6d顯著低于對(duì)照組水平(P＜0.05),聯(lián)合用藥組APND活性先降低后逐漸升高,也在第5d與第6d時(shí)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05),在第15d時(shí)極顯著高于對(duì)照組水平(P＜0.01),在其它時(shí)間都與對(duì)照組無明顯差異(P＞0.05):對(duì)于ECOD酶而言,單一用藥組ECOD酶活性也逐漸降低后逐漸恢復(fù)至對(duì)照組水平,第8d、第

11、10d極顯著低于對(duì)照組(P＜0.01),第12d仍顯著低于對(duì)照組水平(P＜0.05),而聯(lián)合用藥組只在第8d才表現(xiàn)出明顯的抑制作用(P＜0.05),第15d時(shí)表現(xiàn)出明顯誘導(dǎo)作用,與對(duì)照組差異極顯著(P＜0.01),其它時(shí)間都與對(duì)照組無明顯差異(P＞0.05);GST酶活性在投喂諾氟沙星后也表現(xiàn)出抑制作用,單一用藥組在第5d、6d、8d時(shí)極顯著低于對(duì)照組水平(P＜0.05),而聯(lián)合用藥組只第5d、6d時(shí)與對(duì)照組相比表現(xiàn)出明顯的抑制作用(P