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1、分子診斷學(xué)試卷分子診斷學(xué)試卷A二、填空二、填空(每空0.5分,共15分。請(qǐng)將答案填寫(xiě)在答題紙上)1.從高溫嗜熱細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)高溫DNApolymerase后,使得PCR技術(shù)得以廣泛應(yīng)用,在高溫下有活性的DNApolymerase有?????????????、??????????????、?????????????、??????????????。其中具有3’5’外切活性的高溫DNApolymerase有?????????????和??????
2、????????。2.黏粒(cos)是質(zhì)粒-噬菌體雜合載體,它的復(fù)制子來(lái)自、cos位點(diǎn)序列來(lái)自,最大的克隆片段達(dá)到45kb。3.感受態(tài)細(xì)胞(Competentcells)是一種處于_________________________狀態(tài)的細(xì)胞。一般通過(guò)__________來(lái)誘導(dǎo)大腸桿菌感受態(tài)的形成。4.PCR反應(yīng)過(guò)程分為三個(gè)步驟,即,和。5.細(xì)菌的移動(dòng)基因存在著三種類型的轉(zhuǎn)位因子包括、、。6.Klenow酶在情況下,呈現(xiàn)DNA聚合酶活性,
3、在情況下呈現(xiàn)外切酶活性。7.外源基因在原核細(xì)胞中表達(dá),常用的啟動(dòng)子有、、、和。8.在LacZ標(biāo)記基因插入外源基因,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),在Xgal培養(yǎng)基中顯色,為性克隆,未插入基因的克隆顯色,為性克隆。9.基因序列經(jīng)堿基替代,缺失或插入后,可使遺傳信息產(chǎn)生三種不同的后果,分別為、、。10.由一個(gè)細(xì)胞或者組織的基因組所表達(dá)的全部相應(yīng)的蛋白質(zhì),稱為。三、判斷題三、判斷題(錯(cuò)的打“”,對(duì)的打“√”,每題1分,共10分。請(qǐng)將答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下
4、)1.MaxamGilbert化學(xué)降解法測(cè)序時(shí),從測(cè)序膠上直接讀出的序列是用于測(cè)序的模板的互補(bǔ)序列。2.蛋白酶K可有效地降解內(nèi)源蛋白,能快速水解細(xì)胞裂解物中的DNA酶和RNA酶,以利于完整DNA和RNA的分離。3.電泳時(shí)EB加在瓊脂糖凝膠中一般會(huì)降低DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率。4.提取DNA時(shí),若用酚除蛋白質(zhì),需要用TrisHCl對(duì)酚進(jìn)行平衡pH達(dá)7.8。5.基因組研究可以歸納成為構(gòu)建4張相互關(guān)聯(lián)的基因組圖譜:遺傳圖、物理圖、序列
5、圖和功能圖。6.DNA連接酶是一種能催化二條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶,因此該酶既可修復(fù)基因序列中的缺口,也可修復(fù)裂口。7.質(zhì)粒提取后,在瓊脂糖電泳出現(xiàn)一條帶時(shí)說(shuō)明質(zhì)粒提取純度高,當(dāng)為三條帶時(shí)為純度不高。8.COS位點(diǎn),COS質(zhì)粒,COS細(xì)胞它們均含有用于自身環(huán)化的12個(gè)堿基的互補(bǔ)粘性末端。9.入噬菌體的插入型載體只有一個(gè)單一限制酶切點(diǎn),替換型載體有2個(gè)成對(duì)的限制性酶切點(diǎn)。10.原核細(xì)胞和真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的mRNA均具有與rRNA結(jié)合的
6、SD序列,以利于進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)錄。四、選擇題四、選擇題(每題1分,共15分。請(qǐng)將最佳答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下)1.用于核酸分子雜交的探針不能是放射性標(biāo)記的()。ADNABRNAC抗體D寡核苷酸2.cDNA文庫(kù)包括該種生物的()。A某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因B所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因C所有結(jié)構(gòu)基因D內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)3.關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒DNA,下面哪一種說(shuō)法不正確()A溶液I的作用是懸浮菌體B溶液Ⅱ的作用是使DNA變性C溶液Ⅲ的作用是使DNA復(fù)性D質(zhì)
7、粒DNA分子小,所以沒(méi)有變性,染色體變性后不能復(fù)性4.有關(guān)DNA序列自動(dòng)化測(cè)定的不正確敘述是()。A不再需要引物B激光掃描分析代替人工讀序C基本原理與手工測(cè)序相同D用熒光代替了同位素標(biāo)記5.在重組DNA技術(shù)中,不常用到的酶是()。A限制性核酸內(nèi)切酶BDNA聚合酶CDNA連接酶DDNA解鏈酶片(又稱DNA芯片、生物芯片)。8.蛋白質(zhì)組學(xué):指應(yīng)用各種技術(shù)手段來(lái)研究蛋白質(zhì)組的一門(mén)新興學(xué)科,即研究細(xì)胞在不同生理或病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)的異同,對(duì)相
8、關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行分類和鑒定。更重要的是蛋白質(zhì)組學(xué)的研究要分析蛋白質(zhì)間相互作用和蛋白質(zhì)的功能.二、填空二、填空(每空0.5分,共15分。請(qǐng)將答案填寫(xiě)在答題紙上)1.TaqDNA聚合酶TthDNA聚合酶VentDNA聚合酶PwoDNA聚合酶PfuDNA聚合酶PwoDNA聚合酶PfuDNA聚合酶2.質(zhì)粒噬菌體3.容易接受外源DNA片段CaCl2法4.變性退火延伸5.插入序列轉(zhuǎn)位子噬菌體Mu和D1086.有dNTP沒(méi)有dNTP7.乳糖啟動(dòng)子Trp啟
9、動(dòng)子Tac啟動(dòng)子噬菌體的PL和PR啟動(dòng)子脂蛋白啟動(dòng)子8.白陽(yáng)性藍(lán)陰9.同義突變錯(cuò)義突變無(wú)義突變10.蛋白質(zhì)組三、判斷題三、判斷題(錯(cuò)的打“”,對(duì)的打“√”,每題1分,共10分。請(qǐng)將答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下)題號(hào)12345678910答案√√√√√四、選擇題四、選擇題(每題1分,共15分。請(qǐng)將最佳答案填在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下)題號(hào)123456789101112131415答案CADADACBBDDBCAC五、問(wèn)答題五、問(wèn)答題(共36分,請(qǐng)
10、將答案填寫(xiě)在答題紙對(duì)應(yīng)的題號(hào)下)1.真核細(xì)胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在,能否在原核細(xì)胞中表達(dá)?為什么?(5分)答:不能,因?yàn)樵思?xì)胞缺乏對(duì)真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。原核生物必須有相應(yīng)的原核RNA聚合酶可識(shí)別原核細(xì)胞的啟動(dòng)子以催化RNA的合成?;虮磉_(dá)是以操縱子為單位,操縱子由數(shù)個(gè)相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。因此在構(gòu)建原核表達(dá)載體時(shí)必須有1個(gè)強(qiáng)的原核啟動(dòng)子及其兩側(cè)的調(diào)控序列。2.質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如何降低
11、本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率?(6分)答:目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶(如EcI)消化酶切后兩者的兩端均具有相同的粘性末端稱為單酶切點(diǎn)的粘性末端又稱全同源性粘性末端⑴高背景載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后載體分子易于自我環(huán)化既不利于目的基因的重組連接大大降低陽(yáng)性克隆效率又可使非重組性載體造成高背景。為了防止載體的自我環(huán)化,通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的5’P以抑制DNA的自我環(huán)化。在連接反應(yīng)中具有5’P,的目的
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