mdamb231pcdna3.1syk(s)乳腺癌細胞株的建立及對細胞增殖影響的初步探討

1、河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾本學位論文在導師( 或指導小組) 的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專否則，承擔相應法律責任。研究生簽名立榮＼炙導師簽章河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明學所有。月詔日本論文是在導師指導下進行的研究

2、工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名：土芡炎 聊麟數(shù)弘腳年鄉(xiāng)月詔日中文摘要M D A —M B 一2 3 1 p c D N A 3 ．1 ／S y k ( s ) - 孚L 腺癌細胞株的建立及對細胞增殖影響的初步探討摘 要惡性腫瘤是嚴重威脅人類生命健康的一類疾病，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多因素參與的過

3、程，其本質體現(xiàn)在基因水平的變化，如原癌基因的異?；罨? 或) 抑癌基因失活和缺失及其引起相關蛋白產(chǎn)物的變化，相應的引起了細胞出現(xiàn)持續(xù)性分化，自主性增殖，凋亡受限等最終導致腫瘤的發(fā)生及侵襲、轉移的出現(xiàn)。而研究發(fā)現(xiàn)超過5 0 ％的原癌基因及抑癌基因產(chǎn)物均有蛋白酪氨酸激酶( p r o t e i n t y r o s i n ek i n a s e s ，P T K s ) 活性，近些年研究較多的脾酪氨酸激酶( S p l e e n

4、 t y r o s i n ek i n a s e ，S y k ) 是跏堪因的蛋白產(chǎn)物，屬一種非受體型蛋白酪氨酸激酶，其轉錄過程選擇性拼接可出現(xiàn)二種異構體，即全長型S y k ( L ) 矛N 縮短型S y k ( S ) ，二者在D E L 功能域上相差- f 2 3 個氨基酸，故其在功能上也存在差異，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)S y k ( L ) 在乳腺癌、胃癌、肺癌、肝癌等多種腺上皮來源的腫瘤生長和轉移起抑制作用，對于其作用機制及作為

5、治療靶點的體外研究也也越來越清晰。但對于縮短型S y k ( S ) ，有學者認為其可能發(fā)揮癌基因功能，目前對其研究較少，更是缺乏S y k ( S ) 在腫瘤中作用機制研究。目的：本實驗擬通過質粒轉染建立穩(wěn)定表達S y k ( S ) 的乳腺癌細胞株，并初步探討S y k ( S ) 基因對乳腺癌細胞增殖功能的影響。方法：1 S y k ( S ) 基因重組質粒的擴增及質粒穩(wěn)定轉染S y k 陰性表達乳腺癌M D A —M B ．2

6、3 1 細胞株的建立1 ．1 質粒擴增及細胞穩(wěn)定轉染：將攜帶S y k ( S ) 基因的質粒轉化至D H 5 a 大腸桿菌中進行擴增，并使用脂質體法將攜帶S y k ( S ) 基因的質粒轉染至$ 尼陰性表達的乳腺癌M D A —M B ．2 3 l 細胞系，經(jīng)G 4 1 8 篩選獲得基因穩(wěn)定表達的乳腺癌細胞株( M D A —M B ．2 3 l p c D N A 3 ．1 ／S y k ( S 、) ) 。并以S y k 基因陽