幽門螺桿菌h.pylori尿素通道蛋白u(yù)rei基因疫苗的初步研究

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文幽門螺桿菌H.pylori尿素通道蛋白UreI基因疫苗的初步研究姓名：楊麗娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：消化內(nèi)科指導(dǎo)教師：姜政20080501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文目的：構(gòu)建H ．p y l o r iU r e I 編碼基因的重組載體，并在E ．c o l i B L 2 1中表達(dá)。方法：利用分子克隆技術(shù)以H ．p y l o r iD N A 染色體為模板，擴(kuò)增H ．p y l o r iU r e I

2、編碼基因片段，將目的基因U r e I 與載體p E T 3 2 a ( + ) 分別經(jīng)k p n I 和H i n d I l l 雙酶切，純化，連接。篩選陽性重組載體，轉(zhuǎn)化E ．c o l iB L 2 1 ，以I P T G 誘導(dǎo)B L 2 1 ／p E T 3 2 a ( + ) ／U r e I 融合蛋白表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)N i ．N T A 瓊脂糖樹脂純化后，用S D S —P A G E 及W e s t e r n b l

3、 o t 進(jìn)行分析。結(jié)果：經(jīng)酶切、測序分析表明，插入的基因片段為H ．p y l o r iU r e I編碼基因，由5 8 5 b p 組成，與G e n B a n k 相應(yīng)菌株腫A M 4 1 7 6 0 9 序列完全一致，無堿基突變。經(jīng)S D S ．P A G E 分析顯示重組質(zhì)粒p E T 3 2 a ( + ) ／U r e I 在原核細(xì)胞中得到了高效融合表達(dá)，其重組融合蛋白經(jīng)N i ．N T A 瓊脂糖樹脂純化后，其純度達(dá)

4、9 5 ％以上；W e s t e m b l o t 分析顯示，該重組融合蛋白能夠被6 H i s 鼠抗單克隆抗體所識別，具有良好的反應(yīng)原性。2 ．p Q E 3 0 ／U r e I 原核重組載體的構(gòu)建及其在B L 2 1 中表達(dá)目的：將H ．p y l o r iU r e I 編碼基因，與質(zhì)粒p Q E 3 0 連接，并在B L 2 1中表達(dá)。方法：從原核表達(dá)質(zhì)粒p E T 3 2 a ( + ) ／U r e I 中，酶切并膠