豬源乙腦病毒株csf.xz2d的分離鑒定及細(xì)胞傳代分析

1、分類號(hào)： 墨墨主2 ：2密級(jí)：一．公玨單位代碼： ! Q Q 墨委學(xué) 號(hào)： 2 Q ! Q 鰹Q豬源乙腦病毒株C S F ．X Z ．2 D 的分離鑒定及細(xì)胞傳代分析C h a r a c t e r i z a t i o n a n d A n a l y s i so f t h e P a s s a g e dV i r u s o f t h eF i e l dJ a p a n e s e E n c e p h a l

2、 i t i s V i r u s s t r a i nC S F ．X Z - 2 D I s o l a t e dI a i r o mb W l n e^ ●學(xué)位申請人：梁曉曉指導(dǎo)教師：鐘秀會(huì)教授張改平院士學(xué)科專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二O 一三年五月二十六日㈣㈥0 ㈣㈣l lY 2 3 8 6 8 3 1摘要日本流行性乙型腦炎( J a p a n e s e e n c e p h

3、 a l i t i s ，J E ) 簡稱乙腦，是由乙腦病毒( J a p a n e s ee n c e p h a l i t i sv i r u s ，J E V ) 感染人類及家畜引起的一種主要損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的人獸共患傳染病。該病主要流行于夏秋兩季，蚊子是其主要傳播媒介，而豬為重要的貯存和增殖宿主。不同年齡、品種的豬均易感，J E V 對豬的致死率不高，但感染后可導(dǎo)致種豬繁殖障礙、仔豬和育肥豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，懷孕豬可出現(xiàn)流

4、產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎等，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為了解河南省規(guī)?；B(yǎng)殖場豬群乙腦病毒流行株的特征，本研究對臨床乙腦疑似病例的流產(chǎn)胎兒腦脊液進(jìn)行病毒盲傳分離，經(jīng)R T - P C R 鑒定、基因克隆鑒定、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)及乳鼠感染試驗(yàn)，成功分離鑒定了l 株J E V 毒株，命名為C S F ．X Z ．2 D ?；贘 E V E 基因和M 基因的系統(tǒng)發(fā)生樹分析表明該分離株屬于基因I I I 型。隨后對C S F ．X Z ．2 D

5、在B H K - 2 1 細(xì)胞上進(jìn)行了連續(xù)傳代培養(yǎng)，并對其E 基因的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，經(jīng)連續(xù)傳代2 5 次后病毒E 基因趨于穩(wěn)定，氨基酸位點(diǎn)E 2 7 1( E _ V ) 和E 2 7 8 ( V _ L ) 傳代后發(fā)生穩(wěn)定點(diǎn)突變。與J E V 毒力相關(guān)的部分位點(diǎn)如E 1 0 7 、E 1 3 8 、E 1 7 6 、E 1 7 7 和E 3 1 5 遺傳穩(wěn)定性較高，經(jīng)連續(xù)傳代后均未發(fā)生突變，與S A l 4 ．1 4

6、．2 相應(yīng)位點(diǎn)完全一致。但是，另外一些位點(diǎn)的遺傳穩(wěn)定性較差，如E 2 7 9 和E 3 1 2 分別出現(xiàn)K _ M _ K 和K _ R _ K —R 的反復(fù)突變。這些突變是否與J E V 的宿主細(xì)胞適應(yīng)性及毒力變化相關(guān)有待進(jìn)一步研究。本研究初步揭示了J E V 分離株C S F 。X Z ．2 D 的基因型及部分基因特征，并對其細(xì)胞適應(yīng)過程中的E 基因穩(wěn)定性進(jìn)行了初步研究，這有助于進(jìn)一步深入了解河南省規(guī)模化豬場J E V 流行毒株的特