mba論文牛乳過敏原β乳球蛋白制備、中試生產設計及其致敏性的細胞學評估pdf

1、 分類號： 密級： UDC： 學號： 417214914120 南 昌 大 學 專 業(yè) 學 位 碩 士 研 究 生 學 位 論 文 牛乳過敏原 β-乳球蛋白制備、中試生產設計及其致敏性的細胞學評估 Purification, pilot-scale production desig

2、n of bovine allergen β-lactoglobulin and cytological evaluation of allergenicity in vitro 鄒麗 培養(yǎng)單位（院、系） ：南昌大學食品學院 指導教師姓名、職稱：李欣 副教授 指導教師姓名、職稱：許春蘭 教授級高工 專業(yè)學位種類：工程碩士 專業(yè)領域名稱：食品工程 論文答辯日期：2016 年 5 月 答辯委員會主席： 評閱人

3、： 2016 年 5 月 30 日 摘要 IV 摘 要 食物過敏是食物中某種成分 （變應原或過敏原） 刺激人體免疫系統(tǒng)產生一種異常的病理性免疫應答。 八大類食物過敏原中牛乳過敏較為普遍， 而 β-乳球蛋白是牛乳主要的過敏原之一， 由反芻動物乳腺上皮細胞合成，含量約占乳清蛋白總量的 55%，人乳中則不含有。 本文采用制備型反相高效液相色譜獲得高純度的牛乳過敏原 β-乳球蛋白， 對其進行輻照協(xié)同超聲非熱加工處理

4、。 通過光譜學方法表征不同加工處理后過敏原的結構特征，在此基礎上，利用人外周血嗜堿性粒細胞 KU812，建立體外細胞模型評估蛋白致敏性變化。文章關鍵的實驗方法、現(xiàn)象結果及結論表述如下。 1.建立制備型反相高效液相色譜儀（C18）分離純化牛乳過敏原 β-乳球蛋白的方法，小試實驗僅用 25 min，經 SDS-PAGE 鑒定，得到的 β-乳球蛋白純度達到 98.2%，得率為 32.25%?；谛≡噮颠M行十倍放大的中試工藝設計，選取C18

5、色譜柱（直徑 25 mm，長度 250 mm） ，上樣量 100 mL，體積 10 mg/mL，并完成設備的選型，繪制工藝流程圖和設備流程圖。 2.牛乳過敏原 β-乳球蛋白經超聲（40KHz，300W，30min）和輻照（5 kGy）協(xié)同處理，分為四組：原蛋白組，輻照組；先超聲后輻照組，先輻照后超聲組。加工后蛋白發(fā)生不同程度的聚合， 一級和空間結構均發(fā)生不同程度的改變。 在蛋白聚合過程中，二級結構從無序轉為有序狀態(tài)，Trp19 基團向

6、Arg124 運動，熒光強度被部分猝滅，疏水基團包埋，熒光強度降低。并且，加工蛋白三級結構也發(fā)生改變，二硫鍵 Cys106-Cys119 可能發(fā)生斷裂，既增強了巰基含量又有利于蛋白聚合。間接競爭 ELISA 法測定加工 β-乳球蛋白與 IgG 的結合，結果顯示結合能力明顯降低，蛋白的部分抗原決定簇被破壞，降低了蛋白抗原性。 3.選取對數生長期 KU812 細胞（l.0× l06 個/mL）進行體外細胞學評估實驗，檢測 KU81

7、2 細胞脫顆粒釋放的生物活性介質：β-HEX、組胺、TNF-α、IL-6 以及胞內 Ca2+濃度變化。 結果發(fā)現(xiàn)原蛋白組檢測到的活性物質含量最高， 外鈣內流現(xiàn)象最明顯。 Western Blot 法檢測 KU812 細胞激發(fā)后信號通路的 Lyn、 Syk、 NF-κB以及 MAPK 家族蛋白的表達情況，原蛋白組信號通路上游和下游的磷酸化蛋白含量都最高， 而加工蛋白的磷酸化程度較低。 上游信號通路的源頭激酶 Lyn、 Syk被抑制可以進一