β-乳球蛋白致敏表位的適配體定位、酶解及脫敏研究.pdf

1、牛乳過敏是一種常見的食物過敏反應(yīng)，牛乳中β-乳球蛋白（β-Lg）被認(rèn)為最主要的過敏原蛋白之一。本論文利用β-Lg靶向結(jié)合適配體，以此對β-Lg過敏原表位進(jìn)行定位掩蓋處理，利用不同蛋白酶對特定位點(diǎn)進(jìn)行水解，從而達(dá)到降低β-Lg致敏性的效果。研究結(jié)論如下：
　　1β-乳球蛋白過敏原表位適配體的計(jì)算機(jī)輔助分子設(shè)計(jì)與篩選
　　試驗(yàn)以β-乳球蛋白為模板，針對不同過敏原表位，基于正義鏈和反義鏈互補(bǔ)的原則，利用計(jì)算機(jī)輔助分子設(shè)計(jì)篩選出與β

2、-乳球蛋白過敏原表位很好結(jié)合的適配體。根據(jù)能量最低原則篩選出QWVW，RRSL，GWGLP，RDGY和WVDL這五組適配體。
　　2中性蛋白酶與胰蛋白酶水解β-乳球蛋白的條件的優(yōu)化
　　試驗(yàn)選用中性蛋白酶、胰蛋白酶分別水解β-乳球蛋白，通過單因素與正交實(shí)驗(yàn)，篩選出兩種酶水解β-乳球蛋白的最佳條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中性蛋白酶水解最佳底物質(zhì)量濃度為1mg/mL，酶解溫度50℃、pH7.2、酶與蛋白濃度比3％、酶解時(shí)間6 h；胰蛋白

3、酶水解最佳底物質(zhì)量濃度為1mg/mL，酶解溫度45℃、pH8.0、酶與蛋白濃度比2%、酶解時(shí)間4h。
　　3β-乳球蛋白水解物的分離純化及致敏位點(diǎn)的定位水解
　　試驗(yàn)選用Sephadex G-15為分離介質(zhì)，用以分離β-乳球蛋白、中性蛋白酶水解β-乳球蛋白產(chǎn)物、胰蛋白酶水解β-乳球蛋白產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最佳分離條件為磷酸鹽緩沖液離子強(qiáng)度為0.03mol/L的pH8.0，恒定流速為0.7ml/min。通過游離氨基酸的測定發(fā)現(xiàn)

4、，適配體QWVW對接β-乳球蛋白后用蛋白酶水解，游離氨基酸的含量均有所下降，說明β-乳球蛋白水解度下降。
　　4β-乳球蛋白的水解產(chǎn)物對小鼠致敏性的影響
　　通過小鼠耳速發(fā)型主動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)和口服致敏小鼠腸腔通透性測定試驗(yàn)表明，β-乳球蛋白致敏小鼠以后，與空白組相比伊文思藍(lán)滲出率和小腸指數(shù)均顯著的升高。適配體QWVW、WVDL對接β-乳球蛋白降低致敏性的效果較好。通過小白鼠血清中IgG的測定試驗(yàn)表明，QWVW和WVDL這兩組