茯磚茶中“金花”菌產(chǎn)孢機(jī)制及其功能性研究.pdf

1、茯磚茶是經(jīng)獨(dú)特“發(fā)花”工藝形成的一種后發(fā)酵茶，其“發(fā)花”過(guò)程是優(yōu)勢(shì)菌“金花”菌大量繁殖的過(guò)程，多數(shù)研究表明“金花”菌是冠突散囊菌。冠突散囊菌獨(dú)特的生長(zhǎng)、繁殖和代謝過(guò)程，使茯磚茶具有消食健胃、調(diào)脂降壓和降脂減肥等保健功能，不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和培養(yǎng)條件對(duì)冠突散囊菌的生長(zhǎng)及茯磚茶的“發(fā)花”過(guò)程產(chǎn)生影響，從而引起功能性成分和茯磚茶品質(zhì)的變化。
　　本研究以冠突散囊菌為菌種，研究了冠突散囊菌在不同營(yíng)養(yǎng)及培養(yǎng)條件下的產(chǎn)孢規(guī)律、黃色素變化規(guī)律，以及孢

2、子產(chǎn)生與黃色素之間的關(guān)系；采用薄層層析(TLC)、高效液相色譜(HPLC)以及紅外光譜(IR)分析法對(duì)冠突散囊菌所產(chǎn)生的黃色素和降脂類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行了初步分析研究。得出以下結(jié)果：
　　1.以冠突散囊菌的菌落形態(tài)、菌落直徑、有性孢子和無(wú)性孢子的數(shù)量、黃色素的吸光度為指標(biāo)，通過(guò)改變CZG培養(yǎng)基的碳源(蔗糖、葡萄糖)和碳源的濃度(1％、3%、5%、7%、10%-90%)、氮源(硝酸鈉、硝酸銨、硫酸銨)和氮源的濃度(0.1%、0.3%、0.5%

3、、0.7%、1%、3%-11%)、無(wú)機(jī)鹽(氯化鈉、氯化鉀)和無(wú)機(jī)鹽的濃度(1%-17%)、培養(yǎng)溫度(15℃、20℃、25℃、28℃、32℃、35℃、40℃)以及培養(yǎng)基的pH(3-9)，探尋不同營(yíng)養(yǎng)條件下冠突散囊菌的產(chǎn)孢規(guī)律和黃色素變化規(guī)律。單因素和正交試驗(yàn)表明：冠突散囊菌產(chǎn)有性孢子和黃色素的最佳條件：蔗糖3%、硝酸銨0.7%、氯化鉀3%、培養(yǎng)溫度28℃、pH為7，冠突散囊菌黃色素的含量與有性孢子數(shù)量成正相關(guān)系，與無(wú)性孢子數(shù)量成反相關(guān)系。

4、當(dāng)碳源濃度為1%-20%、氮源濃度為0.1%-0.7%、鹽離子為1%-5%、溫度為15℃-28℃、pH為6-7時(shí)，冠突散囊菌以有性繁殖為主，幾乎不產(chǎn)生無(wú)性孢子，當(dāng)碳源濃度為20%-90%、氮源濃度為0.7%-11%、鹽離子為5%-15%、溫度為28℃-40℃、pH為3-6和7-9時(shí)，冠突散囊菌以無(wú)性繁殖為主，無(wú)性孢子數(shù)量遠(yuǎn)大于有性孢子。
　　2.利用液體發(fā)酵技術(shù)對(duì)冠突散囊菌產(chǎn)降脂類(lèi)物質(zhì)-洛伐他汀進(jìn)行試驗(yàn)研究，以洛伐他?。ㄉV純）為

5、對(duì)照，通過(guò)薄層層析和高效液相色譜分析，結(jié)果顯示：冠突散囊菌液體發(fā)酵液中含有洛伐他汀，其含量為6.199mg/L。表明冠突散囊菌具有產(chǎn)生洛伐他汀的能力。
　　3.對(duì)冠突散囊菌所產(chǎn)黃色素的研究
　　(1)用石油醚對(duì)黃色素進(jìn)行提取、過(guò)濾、減壓濃縮和揮發(fā)溶劑后得到黃色素粗品，其得率為1.25%。黃色素抑菌試驗(yàn)顯示：黃色素對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為(10.57?0.35)mm，對(duì)金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度小于0.5%；對(duì)大腸桿菌

6、的抑菌圈直徑為(0.70?0.31)mm，對(duì)大腸桿菌抑菌的最低抑菌濃度大于3%。
　　(2)通過(guò)薄層層析對(duì)黃色素粗品進(jìn)行分離純化，結(jié)果表明：薄層最佳展開(kāi)劑為石油醚:丙酮:甲醇(10:1:2)，展開(kāi)結(jié)果為6條色帶，各色帶的Rf值分別為0.84、0.48、0.40、0.38、0.30、0.24；在相同展開(kāi)劑下對(duì)一次展開(kāi)中黃色素含量最高的兩條色帶進(jìn)行二次展開(kāi)，其中Rf為0.40的條帶又被展開(kāi)為2條色帶，Rf分別為0.64和0.34；Rf

7、為0.38的條帶被展開(kāi)為3條色帶，Rf分別為0.74、0.45、0.31。
　　(3)對(duì)二次分離的5條色帶進(jìn)行紫外掃描和紅外掃描，紫外掃描結(jié)果顯示：5種色素在213nm附近都有吸收峰，Rf為0.64的色素在250-300nm內(nèi)含有3個(gè)吸收峰，其余4種色素在250-300nm內(nèi)含有2個(gè)吸收峰，在300nm以上，除Rf為0.34的色素?zé)o吸收峰外其它4種色素都含有吸收峰；紅外結(jié)果表明4-1號(hào)色素含有官能團(tuán)O–H、–CH3或–CH2、C=