大鯢皮膚分泌液中抗菌肽的鑒定及生物活性研究

1、中國生化藥物雜志 ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2011 年第 32 卷第 4期269大鯢皮膚分泌液中抗菌肽的鑒定及生物活性研究111，2王利鋒，李學(xué)英，王大忠（1．遵義醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室，貴州遵義 563003；2．銅仁學(xué)院，貴州銅仁 554300）摘50、G-要：目的鑒定大鯢皮膚分泌液中抗菌肽，研究其部分生物活性。方法 5%醋酸浸提和 SephadexG-25 凝膠過濾色

2、譜等方法分離純化抗菌肽；采用抑菌圈法檢測抗菌活性，Tricine-SDS-PAGE 電泳和等電聚焦電泳鑒定其抗菌活性成份。結(jié)果大鯢皮膚分泌液中含有抗菌活性物質(zhì)。對革蘭陰性菌、革蘭陽性菌和真菌均具有較強具有較強的堿性。結(jié)論首次從大鯢皮膚分泌的抗菌活性；電泳檢測顯示該小分子多肽相對分子質(zhì)量約為 4300，液中分離純化到一種抗菌肽，此抗菌肽可能是一個具有較強陽離子特征的堿性肽。關(guān)鍵詞：大鯢；皮膚；抗菌肽；分離純化中圖分類號：R282．74；R

3、961文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A1678（2011）04-0269-04 文章編號：1005-CharacterizationandbioactivityofantimicrobialpeptidesfromtheskinsecretionsoftheAndriasdavidianus2WANGLi-feng1，LIXue-ying1，WANGDa-zhong1，（1．DepartmentofCellBiologyandGenetics，Zunyi

4、MedicalCollge，Zunyi563003，China；2．TongrenUniversity，Tongren554300，China）Abstract：PurposeTocharacterizetheantimicrobialpeptidesfromtheskinsecretionsoftheAndriasdavidianusandtostudyitsbioactivity．MethodsThisantimicrobialpe

5、ptidewaspurifiedby5%aceticacidextractionandSephadexG-50，G-25gelfiltrationchromatography．Theantimicrobialabilitywaschar-acterizedbyinhibitingzonedetermination．Theantimicrobialactivesubstancewasidentifiedbytricine-SDS-PAGE

6、electrophoresisandisoelectricfocusing（IEF）石暗示其在地球上曾廣泛分布。目前我國大鯢的人工養(yǎng)殖已經(jīng)實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，為從大鯢皮膚分泌液中提取抗菌肽提供了豐富的資源。作為現(xiàn)存?zhèn)€體最大的兩棲類動物，其皮膚腺發(fā)達(dá)，在試驗中觀察到大鯢皮膚在受到理化刺激時能分泌大量白色狀黏液，最初呈白漿狀，后漸變?yōu)轲こ砭邼鉂瓪馕?。本實驗對大鯢皮膚分泌液中膠狀物，是否含有抗菌活性物質(zhì)進(jìn)行了檢測，并鑒定其部分性質(zhì)，為進(jìn)一步的研究工作

7、奠定基礎(chǔ)。1 材料 1．1動物和菌種成年大鯢雌雄各一尾，購于貴州錦江娃娃魚有限公司。菌種：大腸埃希菌（Escherichiacoli）No．ATCC25922、金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）No．ATCC29213、表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermi-dis）No．ATCC35984、銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）No．ATCC27853、白色念珠菌（can

8、idiaAlbicans）No．ATCC10213、溶血性鏈球菌（Hemolyticstreptococcus）No．CMCC（B）32264，遵義醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室保藏。1．2 試劑50 和 SephadexG-25，GE 葡聚糖凝膠 SephadexG-Healthcare 公司；低相對分子質(zhì)量（Mr）標(biāo)準(zhǔn)蛋白，北 Tris、京經(jīng)科宏達(dá)生物技術(shù)有限公司；TEMED、Tricine、250，丙烯酰胺、過硫酸銨、考馬斯亮藍(lán) R-美國

9、Sigma 公司；BCA 法蛋白定量試劑盒，上海碧云天MH（A）培養(yǎng)基，北京奧生物公司；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。2 方法 2．1皮膚分泌液的粗提采用電刺激法誘導(dǎo)大鯢皮膚分泌黏液。按體積4℃比 1∶1 將收集到的皮膚分泌液用 5%乙酸浸提，下攪拌 24h。12000r/min 離心30min 取上清，用12000r/min 離心 30 磷酸鹽緩沖液調(diào) pH 至 7．2，min，取上清冷凍干燥，2．2抗菌肽分離純化粗提物用