離子對高效液相色譜法同時(shí)測定人體尿液中復(fù)方α-酮酸片的5種有效成分.pdf

1、慢性腎臟病(CKD)現(xiàn)在已經(jīng)成為全球主要的健康問題，合理食用低蛋白飲食加服用復(fù)方α-酮酸片是治療CKD的重要方法之一。由于復(fù)方α-酮酸片為復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，而且以鈣鹽形式存在，很難用普通反相高效液相色譜法進(jìn)行定量測定。
　　另外，由于生物樣品的基質(zhì)復(fù)雜，容易對目標(biāo)分析物的分離造成干擾，并且目標(biāo)分析物的含量一般較低，所以通常需要結(jié)合有效的樣品前處理技術(shù)。中空纖維液相微萃?。℉F-LPME）因其操作簡便、富集倍數(shù)大、成本低，且易與高

2、效液相色譜(HPLC)、氣相色譜法(GC)聯(lián)用等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于尿液、血液等生物樣品的分析。本課題擬通過開發(fā)一種反相離子對高效液相色譜并結(jié)合中空纖維液相微萃取的方法，對人體尿液中復(fù)方α-酮酸片的五種有效成分進(jìn)行檢測，從而為CKD的治療提供檢測依據(jù)。本論文的主要工作和成果如下：
　　1.建立了一種同時(shí)測定復(fù)方α-酮酸片中五種有效成分的反相離子對高效液相色譜法。以消旋羥蛋氨酸鈣（HMACa）、酮纈氨酸鈣（KVCa）、消旋酮異亮氨酸

3、鈣（KILCa）、酮亮氨酸鈣（KLCa）和酮苯丙氨酸鈣（KPACa）五種標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液為對象，對離子對試劑濃度、流動(dòng)相pH值等進(jìn)行了優(yōu)化。最終確定流動(dòng)相：乙腈-20 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液（含15 mmol/L TBAH，pH7.0），25/75(V/V)。研究結(jié)果表明，五種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在線性范圍（10~150 mg/L）內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于0.9993，RSD小于3.63％。檢出限（LOD）為3.3～5.2 mg/L，加標(biāo)回收率在85.2

4、8%~105.77%之間。本方法簡單、快速，靈敏度高，適用于復(fù)方α-酮酸片中五種有效成分的質(zhì)量控制。
　　2.建立了一種同時(shí)測定人體尿液中HMACa、KVCa、KILCa、KLCa和KPACa的反相離子對高效液相色譜法。以乙腈-20 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液（含15 mmol/L TBAH，pH7.0）進(jìn)行梯度洗脫。研究結(jié)果表明，五種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在線性范圍（20~200 mg/L）內(nèi)線性關(guān)系良好（r均大于0.9990），RSD小于6

5、.61%。檢出限為2.5~5.7 mg/L，加標(biāo)回收率為86.79%~111.12%。該方法樣品預(yù)處理簡單，內(nèi)源性基質(zhì)干擾小，對于觀察患者服用復(fù)方α-酮酸片后的吸收、代謝情況具有重要意義。
　　3.采用中空纖維液相微萃取對尿液中的HMACa、KVCa、KILCa、KLCa和KPACa進(jìn)行純化、富集，并用建立好的反相離子對高效液相色譜法進(jìn)行檢測。在該條件下，五種物質(zhì)的富集倍數(shù)分別為11，110，198，202和50，線性范圍分別為0