喹唑啉酮和海棠果單寧對酪氨酸酶的抑制機理研究.pdf

1、本文在喹唑啉酮化合物和植物單寧兩類物質(zhì)中尋找有效的酪氨酸酶抑制劑，結(jié)果到篩選出化合物1【2-對氟苯基-4（3H）喹唑啉酮】和海棠果單寧。然后，對這兩個物質(zhì)分別進行化學(xué)結(jié)構(gòu)分析和酪氨酸酶活性抑制測定實驗。結(jié)構(gòu)分析方面，使用1H NMR、13C NMR、FTIR及ESI-MS方法來鑒定化合物1的結(jié)構(gòu)；以及使用13C NMR、ESI-MS及HPLC三種技術(shù)，對海棠果單寧進行結(jié)構(gòu)表征。結(jié)果表明，化合物1的結(jié)構(gòu)準確且純度很高；海棠果單寧是一種混合

2、單寧，由縮合單寧和水解單寧共同組成?？s合單寧成分包括原天竺葵定和原花青定，它們對應(yīng)的基本結(jié)構(gòu)單元分別為阿福豆素和（表）兒茶素。水解單寧成分包括沒食子酰葡萄糖、鞣花酸以及鞣花酸鼠李糖苷，其中沒食子酰葡萄糖的酸解講解產(chǎn)物為沒食子酸，鞣花酸與鞣花酸鼠李糖苷的酸解產(chǎn)物是鞣花酸?；钚苑矫?，本文對化合物1的酪氨酸酶抑制機理作了研究，分別從二酚酶活力抑制、熒光淬滅及分子模擬實驗來探究。酶學(xué)分析結(jié)果表明，化合物1對酪氨酸酶有很強的抑制效果，其IC50值

3、為120±2μM。它對酪氨酸酶的抑制類型屬于可逆抑制中的混合型抑制類型。抑制常數(shù)KI與KIS的值分別為703.2和222.11μM，KI值高于KIS值，表明該化合物對酶-底物復(fù)合物的親和力比對游離酶的親和力強。熒光淬滅結(jié)果表明，該化合物既可與酶結(jié)合又可與底物（酪氨酸和L-DOPA）結(jié)合，并降低它們的熒光強度。分子模擬結(jié)果表明，該化合物通過阻斷酶催化中心影響質(zhì)量傳遞速率。以上結(jié)果證明，化合物1可以通過兩種途徑來影響黑色素的生物合成：一是抑

4、制酪氨酸酶的催化活性，以減緩黑素合成的速率；二是與底物結(jié)合，以截斷黑素合成的來源。本文運用二酚酶抑制活力測定法以及酶的熒光淬滅法，進一步探討海棠果單寧對酪氨酸酶的抑制機制。二酚酶抑制結(jié)果表明，海棠果單寧對酪氨酸酶具有極強的抑制活性，其IC50值為32.0μg/mL。海棠果單寧對酪氨酸酶的抑制類型屬于混合型抑制，抑制常數(shù)KI與KIS分別為41.6μg/mL、148.5μg/mL，其KI值小于KIS值，表明海棠果單寧與游離酶的結(jié)合強度大于與