干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)大鼠乳腺腫瘤的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過觀察干酪乳桿菌（Lactobacillus casei）對(duì)二甲基苯蒽（DMBA）誘發(fā)乳腺癌大鼠的血清中細(xì)胞因子和外周血中自然殺傷(NK)細(xì)胞活性、T淋巴細(xì)胞亞群分布的影響來評(píng)價(jià)干酪乳桿菌對(duì)乳腺癌大鼠免疫功能的調(diào)節(jié)。通過觀察干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)乳腺癌大鼠的腸道菌群和腸道連接蛋白表達(dá)的影響來評(píng)價(jià)干酪乳桿菌對(duì)乳腺癌大鼠腸道屏障功能的調(diào)節(jié)。為進(jìn)一步闡述干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)的大鼠乳腺腫瘤的抑制作用機(jī)制提供實(shí)

2、驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)乳腺腫瘤的抑制作用及其免疫功能的影響。
　　（1）動(dòng)物分組及乳腺癌模型建立：60只雌性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、干酪乳桿菌劑量1組和干酪乳桿菌劑量2組。模型組及干酪乳桿菌劑量1組和2組大鼠右側(cè)臀部皮下一次性注射100 mg/kg DMBA建立乳腺癌模型。干酪乳桿菌劑量1組和2組分別灌胃給予4 mL/(kg·d)和8 mL/(kg

3、·d)干酪乳桿菌（1×108 CFU/mL），正常對(duì)照組和模型組均給予5 mL/(kg·d)大豆油灌胃。每天1次，持續(xù)16周后處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血并留取胸腺，脾臟，小腸組織。（2）計(jì)算各組大鼠乳腺癌發(fā)生率、潛伏期、平均瘤重、抑瘤率及臟器指數(shù)。（3）流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠外周血中NK細(xì)胞活性和T淋巴細(xì)胞亞群分布。（4）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測血清中細(xì)胞因子白介素-4（IL-4）、IL-6、IL-10、IL-12、干擾素-γ（IFN

4、-γ）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平。
　　2.干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘導(dǎo)乳腺癌大鼠腸道菌群和腸道屏障功能的影響。
　?。?）實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測大鼠腸道菌群的變化。（2） HE染色觀察大鼠空腸組織病理學(xué)改變。（3） ELISA檢測大鼠血清中D-乳酸（D-LA）水平。（4） Western Blotting檢測大鼠空腸組織緊密連接蛋白o(hù)ccludin和ZO-1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1

5、.干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘發(fā)乳腺腫瘤的抑制作用及其免疫功能的影響。
　　（1）正常對(duì)照組大鼠無腫瘤發(fā)生，而模型組、干酪乳桿菌劑量1組和2組均有腫瘤發(fā)生。與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組大鼠腫瘤潛伏期延長，腫瘤發(fā)生率和平均瘤質(zhì)量降低（P＜0.05）；抑瘤率達(dá)到41.2%；且該組胸腺指數(shù)顯著升高（P＜0.05）；
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組大鼠TCRαβ+CD161a+NK細(xì)胞百分比、CD3+

6、CD8+T細(xì)胞百分比均顯著升高（P＜0.05）；而血中CD3+Foxp3+細(xì)胞百分比明顯下降（P＜0.05）。
　?。?）與正常對(duì)照組比較，模型組IL-4水平明顯降低，而 IL-6、IL-12和TNF-α水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組血清IL-4、IL-10濃度顯著增高，IL-6、IL-12濃度顯著下降（P＜0.05）；干酪乳桿菌劑量1組和2組TNF-α濃度均顯著下降（P＜0.05）。
　　2

7、.干酪乳桿菌對(duì)二甲基苯蒽誘導(dǎo)乳腺癌大鼠腸道菌群和腸道屏障功能的影響。
　?。?）qPCR結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組雙歧桿菌、乳酸桿菌和糞腸球菌數(shù)量均下降，其中雙歧桿菌和糞腸球菌數(shù)量下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；干酪乳桿菌劑量1組和2組雙歧桿菌數(shù)量均比模型組顯著升高（P＜0.05），而大腸桿菌的數(shù)量有所降低。
　?。?）HE染色結(jié)果顯示，與模型組比較，干酪乳桿菌劑量1組和2組大鼠空腸內(nèi)絨毛和隱窩的形態(tài)明顯完整，結(jié)構(gòu)

8、清晰，絨毛的損傷程度較小。但與正常組比較，干酪乳桿菌劑量1組和2組小腸黏膜厚度減少，絨毛的排列也較為凌亂，絨毛尖端有水腫的現(xiàn)象。
　?。?）ELISA結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組D-LA濃度顯著升高，而與模型組比較，干酪乳桿菌劑量2組D-LA濃度顯著下降（P＜0.05）。
　?。?） Western Blotting結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組緊密連接蛋白o(hù)ccludin和ZO-1的表達(dá)均顯著下降，而干酪乳桿菌劑