干擾素-γ預(yù)處理增強(qiáng)hUC-MSC免疫調(diào)節(jié)活性及其移植治療小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡的實驗研究.pdf

1、目的：探討干擾素-γ預(yù)處理對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的影響，及其對系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的治療作用。
　　方法：hUC-MSC經(jīng)過IFN-γ(20ng/ml)預(yù)處理或者單獨培養(yǎng)24小時，實時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)和蛋白質(zhì)印跡法檢測細(xì)胞吲哚2，3雙加氧酶的表達(dá)水平。24只20周左右大的雌性Fas-/-敲除的SLE模型小鼠被隨機(jī)分為3組：PBS組、IFN-γ未處理hUC-MSC組、IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC組。分別通過尾靜脈注

2、射等劑量（0.2ml）的PBS，IFN-γ未處理hUC-MSC（1x106)懸液以及IFN-γ（20ng/ml）預(yù)處理24h的hUC-MSC（1x106)的細(xì)胞懸液。收集Fas-/-小鼠24h尿液，送檢驗科檢測尿蛋白水平。Fas-/-小鼠眼眶靜脈取血，利用Elisa試劑盒測定Fas-/-小鼠血清抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）水平以及血清肌酐酸(IMP)水平；免疫組織化學(xué)檢測腎臟是否有免疫復(fù)合物IgG及C3沉積。采用流式細(xì)胞儀檢測小鼠血

3、液中CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞、CD4+CD25+T細(xì)胞水平。
　　結(jié)果：IFN-γ未處理hUC-MSC在RNA水平和蛋白水平均不表達(dá)IDO，而IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC表達(dá)IDO。細(xì)胞移植后連續(xù)觀察8周，發(fā)現(xiàn)IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC組和IFN-γ未處理hUC-MSC組Fas-/-小鼠尿蛋白、血清IMP和血清ds-DNA水平均明顯低于PBS組（P＜0.05或P＜0.01)。與移植治療之前比，PBS組F

4、as-/-小鼠尿蛋白、血清IMP和血清ds-DNA水平顯著提高（P＜0.05或P＜0.01)；IFN-γ未處理hUC-MSC組Fas-/-小鼠尿蛋白、血清IMP和血清ds-DNA水平并沒有發(fā)生顯著性改變（P＞0.05）；而IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC組Fas-/-小鼠尿蛋白、血清IMP和血清ds-DNA水平則顯著下降的趨勢（P＜0.05或P＜0.01)。PBS組Fas-/-小鼠腎小球系膜區(qū)域呈現(xiàn)大量IgG、C3免疫復(fù)合物，IFN-γ未

5、處理hUC-MSC組Fas-/-小鼠腎小球系膜區(qū)域呈現(xiàn)少量IgG、C3免疫復(fù)合物，IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC組Fas-/-小鼠腎小球系膜區(qū)域沒有IgG、C3免疫復(fù)合物。IFN-γ未處理hUC-MSC組Fas-/-小鼠CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞水平與PBS組Fas-/-小鼠相比沒有顯著性變化（P＞0.05)，IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC顯著地降低了Fas-/-小鼠CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞（P

6、＜0.01）。與PBS組Fas-/-小鼠相比，IFN-γ未處理hUC-MSC升高了Fas-/-小鼠CD4+CD25+T水平（P＜0.01）， 同時IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC組 Fas-/-小鼠CD4+CD25+T水平明顯高于IFN-γ未處理hUC-MSC組（P＜0.01）。
　　結(jié)論：IFN-γ預(yù)處理hUC-MSC可顯著提高h(yuǎn)UC-MSC的抗炎活性，及其對SLE小鼠的治療療效，對系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病的治療具有更好的前景