腦梗死后免疫抑制的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：感染是腦卒中患者最常見的并發(fā)癥之一，發(fā)生率大約為21％～65％，嚴(yán)重影響腦卒中患者的預(yù)后。盡管臨床上采取了各種積極的防治措施，腦卒中相關(guān)性感染的發(fā)生率仍然居高不下。實驗研究提示腦卒中后機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，抗菌防御功能降低，感染的危險性增加。正常情況下，促炎反應(yīng)與抗炎反應(yīng)保持微妙的平衡。促炎/抗炎的失衡以及由此引發(fā)的全身免疫狀態(tài)異常在腦卒中相關(guān)性感染的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。因此，檢測大腦中動脈阻塞（middle ce

2、rebral artery occlusion，MCAO）大鼠血清促炎/抗炎細(xì)胞因子的濃度變化，探討其動態(tài)變化規(guī)律，對闡明腦卒中后機(jī)體免疫狀態(tài)演變機(jī)制和指導(dǎo)臨床治療有重要意義。
　　 目的：探討腦梗死大鼠外周血促炎/抗炎細(xì)胞因子的動態(tài)變化規(guī)律。
　　 方法：建立成年雄性SD大鼠大腦中動脈阻塞（MCAO）模型，模擬大腦中動脈供血區(qū)腦梗死，依術(shù)后不同時間點分為MCAO后6h，12h，24h，48h，72h，1w，2w組和假手

3、術(shù)組（sham operation group）。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）測定MCAO大鼠和假手術(shù)大鼠血清促炎細(xì)胞因子IL-1β、INF-γ和抗炎細(xì)胞因子IL-10的水平，以評估機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。
　　 結(jié)論：MCAO大鼠外周血促炎細(xì)胞因子降低和抗炎細(xì)胞因子升高，表明腦梗死后機(jī)體處于免疫抑制狀

4、態(tài)。
　　研究背景：越來越多的證據(jù)表明中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷導(dǎo)致機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，這種免疫抑制狀態(tài)使腦卒中后感染并發(fā)癥的發(fā)生率增高。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷打破了原本存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)之間的平衡。有學(xué)者稱之為腦卒中誘導(dǎo)的免疫抑制綜合征（stroke-induced immunodepression syndrome，SIDS）。研究證實兒茶酚胺可介導(dǎo)外周免疫細(xì)胞功能的變化，使機(jī)體防御功能降低，感染的危險性增加。脾臟作為最大的外周

5、免疫器官在機(jī)體抗菌防御中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。交感神經(jīng)系統(tǒng)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)緊密聯(lián)系的橋梁。本研究關(guān)注腦卒中后機(jī)體外周免疫狀態(tài)的改變，以及交感神經(jīng)系統(tǒng)和脾臟的變化，以進(jìn)一步探討腦梗死后免疫抑制發(fā)生的具體機(jī)制。
　　 目的：探討腦梗死大鼠交感神經(jīng)系統(tǒng)和脾臟的變化與腦梗死后外周免疫抑制的關(guān)系。
　　 方法：建立成年雄性SD大鼠大腦中動脈阻塞（MCAO）模型，模擬大腦中動脈供血區(qū)腦梗死，依術(shù)后不同時間點分為MCAO后6h

6、，12h，24h，48h，72h，1w，2w組和假手術(shù)組（sham operation group）。MCAO大鼠側(cè)腦室注射IL-1ra和腹腔注射普萘洛爾，假手術(shù)大鼠腦室注射IL-1β干預(yù)后分為MCAO+IL-1ra組、MCAO+普萘洛爾組、MCAO+_ACSF組、sham+IL-1β組和sham+ACSF組。采用雙抗體央心酶聯(lián)免疫吸附法（double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorb

7、entassam，ELISA）測定大鼠血清促炎細(xì)胞因子IL-1β、INF-γ和抗炎細(xì)胞因予IL-10的水平，以評估機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。應(yīng)用競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定法（competitiveenzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）測定大鼠血清3-甲基腎上腺素（metanephrine，MN）和去甲-3-0-甲基腎上腺素（normetanephrine，NMN）的水平，以評估交感神經(jīng)的活性狀態(tài)。計算大鼠

8、脾臟的臟器系數(shù)（organ-body weight ratio，O/B ratio），了解脾臟體積的變化。通過脾臟HE染色（hematoxylin eosin staining）明確腦卒中后脾臟組織學(xué)變化。通過假手術(shù)組大鼠側(cè)腦室注射IL-1β，觀察交感神經(jīng)活性改變、促炎/抗炎細(xì)胞因子變化和脾臟的變化。通過側(cè)腦室注射IL-1ra和腹腔注射普萘洛爾阻斷交感神經(jīng)后再次觀察交感神經(jīng)活性改變、促炎/抗炎細(xì)胞因子變化和脾臟的變化，以進(jìn)一步探討腦卒中

9、后外周免疫抑制可能的原因。
　　 結(jié)論：MCAO后大鼠外周血促炎細(xì)胞因子降低和抗炎細(xì)胞因子升高，表明腦卒中后機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)；血清MN和NMN水平升高，表明腦卒中后交感神經(jīng)處于過度激活狀態(tài)。脾臟生發(fā)中心的變化表明外周免疫功能降低。交感神經(jīng)過度激活和脾臟生發(fā)中心的變化可能在腦卒中誘導(dǎo)的免疫抑制綜合征（SIDS）發(fā)生的過程中發(fā)揮主要作用。推測腦梗死后腦內(nèi)IL-1β水平升高導(dǎo)致交感神經(jīng)過度激活，繼而引起脾臟生發(fā)中心的變化和淋巴細(xì)胞