高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)膠原蛋白降解物的分析.pdf

1、膠原蛋白是動(dòng)物細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分，約占哺乳動(dòng)物總蛋白的1/3。大量研究表明許多疾病與膠原蛋白的類型、含量、分布、代謝及其動(dòng)態(tài)變化異常有關(guān)，建立快速、準(zhǔn)確的膠原蛋白檢測(cè)方法不僅有利于疾病的早期診斷，而且有助于認(rèn)識(shí)致病機(jī)理。
　　 本論文在膠原蛋白熱變性、酶法降解的基礎(chǔ)上，利用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)通過(guò)特征多肽研究大鼠皮膚中不同類型膠原蛋白的相對(duì)含量及其動(dòng)態(tài)變化。實(shí)驗(yàn)使用酶法從大鼠尾皮膚中提取了膠原蛋白粗品，柱前衍生化RP-H

2、PLC法分析結(jié)果表明粗品中甘氨酸含量約為31.5％，羥脯氨酸＞10％，脯氨酸＞14％，證明提取物中主要為膠原蛋白；利用紫外分光光度法通過(guò)測(cè)定膠原蛋白溶解度隨溫度的變化，確定了膠原蛋白在1MNaCl，pH8.0的0.05MTris-HCl緩沖液中的最適變性條件為50℃水浴中加熱3小時(shí)；在此基礎(chǔ)上對(duì)不同年齡的大鼠尾皮膚膠原蛋白粗品進(jìn)行了變性，電泳分析結(jié)果熱變性的膠原可溶于水溶液且熱變性導(dǎo)致的隨機(jī)降解較低；實(shí)驗(yàn)使用胰蛋白酶對(duì)變性膠原蛋白進(jìn)行了