從植物cDNA表達文庫中篩選鈣調(diào)素結(jié)合蛋白.pdf_第1頁
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1、為了獲得植物Cam結(jié)合蛋白的cDNA克隆,以便進一步研究其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)特征及其與CaM的結(jié)合方式,也為了最終從中鑒別出編碼BP-10cDNA克隆.作者近期制備了生物素標(biāo)記的牛腦鈣調(diào)素(Biotin-CaM),它能夠檢測出100ng的CaM BP-10.以部分純化的CaM BP-10檢測Biotin-CaM的特異性,表明Biotin-CaM只與CaM BP-10特異結(jié)合,說明其具有高度特異性.作者以Biotin-CaM為探針,采取蛋白-

2、蛋白相互作用法篩選擬南芥菜cDNA表達文庫,蕎得了9個陽性克隆.克隆經(jīng)純化后,誘導(dǎo)產(chǎn)生了融合蛋白.融合蛋白的Colloidal Gold-CaM Gel Overlay分析表明,這些陽性克隆確是編碼CaM結(jié)合蛋白的,并進一步檢測了融合蛋白與CaM的結(jié)合,和BP-10一樣,不依賴于鈣離子的存在.現(xiàn)已利用M13輔助噬菌體在XL-1 Blue細胞內(nèi)對Y7、Y9克隆進行體內(nèi)切割,得到含有外源cDNA片段的pBluescript質(zhì)粒,測序工作正在

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