基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的蚯蚓纖溶酶分析方法研究.pdf

1、蚯蚓纖溶酶(EFE)是從蚯蚓中提取的一組絲氨酸蛋白酶。EFE具有降低血液黏稠度、減少血小板聚集、改善微循環(huán)、副作用小的特點，已大量應(yīng)用于臨床，治療多種血栓性疾病，并取得較好的療效。中科院生物物理所以赤子愛勝蚓為原料已制成用于預(yù)防和治療血栓的口服膠囊。實際上，該膠囊（蚓激酶粗品）含有多種活性組分。為了便于對蚯蚓纖溶酶藥物的生產(chǎn)過程進行質(zhì)量控制，急需建立一套完整的質(zhì)控標準方法，為這種藥物的生產(chǎn)及開發(fā)提供質(zhì)量保證。通過對EFE的研究現(xiàn)狀調(diào)查表

2、明，由于各種纖溶酶組分的理化性質(zhì)比較接近，使分離純化工作具有很大的挑戰(zhàn)性。
　　本研究利用不同分離方法對蚯蚓纖溶酶粗品中全蛋白組分進行分離，建立了基于強陰離子交換色譜和SDS-PAGE的最佳分析、分離方法。在最佳凝膠電泳分離條件下分離出多達20個蛋白質(zhì)條帶，分別通過MALDI-TOF-MS和2D-LC-MS/MS質(zhì)譜對各蛋白質(zhì)條帶進行了鑒定。在最佳色譜條件分離出了約35個峰，將其分為26個組分，分別用MALDI-TOF-MS和Q-

3、TOF-MS對各組分中蛋白的分子量進行了準確測定?；凇癝hotgun”研究策略的蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，采用了蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫和EST（表達序列標簽）數(shù)據(jù)庫兩種對蚯蚓纖溶酶進行了鑒定:使用蛋白數(shù)據(jù)庫(Lumbricidaesequence)得到20種不同的蛋白;而使用EST形式數(shù)據(jù)庫(Lumbricidae sequence)得到了57種不同的mRNA序列。本文應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法對蚯蚓纖溶酶粗品進行分析及鑒定，建立了蚯蚓纖溶酶藥物質(zhì)量控