簡(jiǎn)介：LIII111IIUILLIIIIILLLLLLIIILLIIILY3336735學(xué)校代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮茑峀大孚專業(yè)博士學(xué)位論文MICRORNA125B對(duì)人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞生物學(xué)作用及分子機(jī)制作者姓名導(dǎo)師姓名專業(yè)學(xué)位名稱培養(yǎng)院系完成時(shí)間王琰孫玲教授內(nèi)科學(xué)血液內(nèi)科鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2017年8月原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文J是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者多嘏日期上田7年P(guān)月F日學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者主嵌日期加7年，工月J’日

簡(jiǎn)介：小電導(dǎo)CA2激活K通道SMALLCONDUCTANCECA2ACTIVATEDKCHANNELS，SK，KCA2幾乎存在于所有可興奮細(xì)胞的胞漿膜上，依賴于細(xì)胞內(nèi)的CA2進(jìn)行激活。SK通道家族由SK1、SK2、SK3以及一個(gè)在結(jié)構(gòu)和功能上與SK通道相似的中電導(dǎo)CA2激活K通道INTERMEDIATECONDUCTANCECA2ACTIVATEDKCHANNELS，IK或稱SK4組成。SK1、SK2和SK3三個(gè)亞型在人類、小鼠和大鼠心肌細(xì)胞中均有表達(dá)，參與心肌細(xì)胞動(dòng)作電位復(fù)極化的構(gòu)成。研究顯示SK1和SK2主要表達(dá)在心房，而敲除SK2通道的動(dòng)物出現(xiàn)心房細(xì)胞復(fù)極化延長(zhǎng)，增加房顫和房撲等快速性心律失常的易感性。因此，SK2通道可能與室上性快速性心律失常有關(guān)，可作為室上性快速性心律失常的治療靶點(diǎn)，但它的調(diào)控機(jī)制目前還不明確。引起SK2通道開放的細(xì)胞內(nèi)CA2信號(hào)來源有兩條途徑位于細(xì)胞膜上的電壓門控CA2通道VOLTAGEGATEDCA2CHANNELS，VGCCS及內(nèi)肌質(zhì)網(wǎng)ENDOSARCOPLASMICRETICULUM，ERSR膜上RYRSRYANODINERECEPTS敏感的CA2釋放通道。已有研究報(bào)道指出心肌細(xì)胞膜的CAV13L型CA2通道通過ΑACTININ與SK2通道進(jìn)行耦聯(lián)，實(shí)現(xiàn)對(duì)SK2通道的調(diào)控，這提示SK2通道可能不是直接和調(diào)控性的CA2通道有生理性相互作用。我們實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)證據(jù)已顯示心肌細(xì)胞膜表面的SK2通道與SRRYR2受體通道有功能性耦聯(lián)，但它們二者之間耦聯(lián)的中間分子并不清楚。本研究通過質(zhì)譜分析和生物信息學(xué)的方法篩選心肌組織中與JP2相互作用的蛋白質(zhì)，采用心肌組織和轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞進(jìn)行免疫共沉淀和GSTPULLDOWN實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證JP2與SK2通道、JP2與RYR2之間的相互作用，進(jìn)一步制備不同片段GSTJP2原核表達(dá)質(zhì)粒來驗(yàn)證JP2與SK2通道和RYR2發(fā)生相互作用的結(jié)構(gòu)域，并通過功能性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)JP2敲減后對(duì)鈣瞬變CALCIUMTRANSIENTS的影響，以及JP2敲減后心肌鈣相關(guān)蛋白的表達(dá)。研究方法1采用健康成年C57BL6小鼠，體重2025G，雌雄不拘。2心肌肌質(zhì)網(wǎng)小泡膜蛋白的分離和檢測(cè)用差速離心的方法提取成年C57BL6小鼠心臟肌質(zhì)網(wǎng)小泡的膜蛋白。并用WESTERNBLOT方法檢測(cè)膜蛋白中SK2、JP2和RYR2的蛋白，用心肌組織蛋白做陽(yáng)性對(duì)照。3質(zhì)譜分析心肌肌質(zhì)網(wǎng)小泡膜蛋白裂解液中加入JP2抗體或鼠源無關(guān)的抗IGG抗體，再用PROTEINGSEPHAROSE捕獲制備免疫共沉淀復(fù)合物，進(jìn)行電泳后，考馬斯亮藍(lán)染色，選擇有差異的目標(biāo)蛋白條帶作為質(zhì)譜分析樣品，送北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部進(jìn)行質(zhì)譜分析。4生物信息學(xué)根據(jù)文獻(xiàn)將蛋白質(zhì)篩選，用GENEONTOLOGY網(wǎng)站進(jìn)行分類，并在STRING網(wǎng)站上查出它們之間的相互作用。5WESTERNBLOT鑒定將制備的免疫共沉淀復(fù)合物進(jìn)一步用特異性SK2和RYR2抗體進(jìn)行檢測(cè)。6構(gòu)建原核表達(dá)載體使用BAMHⅠ和NOTⅠ雙酶切原核表達(dá)載體PGEX4T1，將JP2全長(zhǎng)、氨基端片段JP2N11253和JP2N2216350、羧基端片段JP2C340696插入，構(gòu)建融合基因PGEX4T1GSTJP2、PGEX4T1GSTJP2N1AA1253、PGEX4T1GSTJP2N2AA216350和PGEX4T1GSTJP2CAA340696。并用雙酶切和測(cè)序方法鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒。7GST融合蛋白的原核表達(dá)和純化將已鑒定的GST、GSTJP2以及GSTJP2不同片段重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化宿主菌ECOLIBL21，用IPTG26℃過夜誘導(dǎo)表達(dá)靶蛋白，并用GSTBINDTM樹脂層析柱純化融合蛋白。8構(gòu)建PSK2IRESEGFP和PJP2PCDNAEGFP質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞以PCMV6ENTRYSK2和PCDNA31JP2為模板，制備PSK2IRESEGFP和PJP2PCDNAEGFP質(zhì)粒，用雙酶切和測(cè)序方法鑒定構(gòu)建的質(zhì)粒。按照LIPOFECTAMIM2000說明書轉(zhuǎn)染質(zhì)粒。9GSTPULLDOWN分析將結(jié)合了GST融合蛋白的層析柱中加入心臟裂解液或HEK293細(xì)胞裂解液，過夜孵育后用谷胱甘肽ELUTIONBUFFER洗脫，并用SK2或RYR2抗體進(jìn)行檢測(cè)。10COIP法檢測(cè)體外JP2和SK2相互作用將共轉(zhuǎn)染SK2和JP質(zhì)粒的HEK293細(xì)胞裂解液與抗體過夜孵育，再用PROTEINGSEPHAROSE制備免疫共沉淀復(fù)合物再分別用抗SK2和抗JP2抗體進(jìn)行檢測(cè)。11尾靜脈注射腺病毒給健康成年C57BL6小鼠尾靜脈注射總量為1109PFU的攜帶陰性對(duì)照SIRNAADNC或JP2SIRNAADSIJP2的腺病毒。注射后7天分離成年小鼠心肌細(xì)胞。12WESTERNBLOT的方法測(cè)定注射腺病毒成年小鼠心臟JP2蛋白表達(dá)，并檢測(cè)對(duì)SK2通道蛋白表達(dá)的影響。13鈣瞬變的測(cè)定將ADNC和ADSIJP2組成年小鼠心肌細(xì)胞懸液進(jìn)行梯度復(fù)鈣，并加入終濃度為2ΜM的FURA2AM，用1HZ場(chǎng)刺激誘發(fā)鈣瞬變，采用IONOPTIX心肌細(xì)胞收縮及離子濃度同步測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量鈣瞬變，數(shù)據(jù)采用美國(guó)IONOPTIX公司的IONWIZARD66軟件進(jìn)行分析。14WESTERNBLOT的方法測(cè)定RYR2、CAV12、NCX、SERCA2鈣處理相關(guān)蛋白的表達(dá)。15統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，用SPSS110統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。以配對(duì)T檢驗(yàn)或單因素方差分析ONEWAYANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。統(tǒng)計(jì)分析以P＜005為有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1WESTERNBLOT檢測(cè)顯示肌質(zhì)網(wǎng)小泡膜蛋白中有SK2、JP2和RYR2三種蛋白的表達(dá)。2在心肌肌質(zhì)網(wǎng)小泡膜蛋白中加入JP2抗體（免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)組）或鼠源無關(guān)的抗IGG抗體（陰性對(duì)照組）制備質(zhì)譜分析樣品，電泳后考馬斯亮藍(lán)染色，觀察對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的蛋白質(zhì)泳帶，選出13條差異目標(biāo)條帶。質(zhì)譜分析后得到35013個(gè)與JP2可能有相互作用的蛋白質(zhì)，最終篩選出90個(gè)相關(guān)的蛋白質(zhì)，其中包括SK2和RYR2蛋白。通過信息分析學(xué)進(jìn)一步對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分類，并測(cè)定它們之間的相互作用。3STRING網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果顯示JP2和RYR2兩者的直系同源蛋白可以在其他物種中共表達(dá)，可以預(yù)測(cè)它們之間可能存在相互作用由于目前只能同源模建出小鼠SK2的CAM區(qū)（序列為655785），不能預(yù)測(cè)SK2和JP2之間是否有相互作用但通過WESTERNBLOT的方法用特異性SK2和RYR2抗體檢測(cè)到肌質(zhì)網(wǎng)小泡裂解液中JP2可以沉淀SK2和RYR2蛋白。4GSTJP2融合蛋白可以PULLDOWN心肌組織裂解液中的SK2，提示GSTJP2與心肌中SK2有相互作用，并且這種相互作用主要發(fā)生在JP2氨基末端的MN區(qū)，尤其是GSTJP2N1AA1253片段作用明顯，而GSTJP2的羧基末端GSTJP2C片段AA340696可以和心肌組織裂解液中的RYR2結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GSTJP2的MN1區(qū)1253片段可以和HEK293細(xì)胞裂解液中的SK2蛋白結(jié)合。5將HEK293細(xì)胞共轉(zhuǎn)染SK2和JP2質(zhì)粒，用特異性JP2或SK2抗體孵育細(xì)胞蛋白裂解液進(jìn)行COIP實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示SK2可以共沉淀JP2，JP2可以和SK2結(jié)合，提示體外JP2和SK2之間可能有相互作用。6成年小鼠尾靜脈注射陰性對(duì)照SIRNA或JP2SIRNA的腺病毒，WESTERNBLOT結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組CTRLNT和陰性對(duì)照組ADNC相比，ADSIJP2組JP2表達(dá)減少到了47％和48％，而SK2通道蛋白表達(dá)無明顯變化。7成年小鼠心肌細(xì)胞JP2敲減后，用IONOPTIX心肌細(xì)胞收縮及離子濃度同步測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量鈣瞬變，與ADNC相比，ADSIJP2組鈣瞬變的幅度顯著減少，鈣瞬變到達(dá)峰值50％的時(shí)間卻顯著增加，而細(xì)胞內(nèi)靜息CA2水平和鈣瞬變衰減50％的時(shí)間沒有顯著變化。使用CAFFINE測(cè)量RYR2依賴性肌質(zhì)網(wǎng)CA2儲(chǔ)存水平，與陰性對(duì)照組相比，鈣瞬變的幅度亦顯著減少。因此，敲減成年小鼠心肌JP2的表達(dá)，會(huì)減少心肌肌質(zhì)網(wǎng)CA2的釋放。8用WESTERNBLOT的方法檢測(cè)成年小鼠心肌鈣處理相關(guān)蛋白的表達(dá)，與陰性對(duì)照組相比，ADSIJP2組心肌組織RYR2、CAV12、NCX、SERCA2的表達(dá)無顯著變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)論小鼠心肌組織JP2與SK2、JP2和RYR2蛋白有相互作用，JP2分別通過羧基末端連接RYR2，而通過氨基末端的MN結(jié)構(gòu)域連接SK2，從而實(shí)現(xiàn)三者的功能聯(lián)系。

簡(jiǎn)介：LIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIY3336102努類垮I密級(jí)R656。5凳開單位代碼10422學(xué)號(hào)XF∽FW年秭0二繁IJJ九。一夏SHANDONGU，NLVEF婚ITY博士學(xué)位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE專業(yè)學(xué)位論文題昏CXCR7一CXCLL2生物學(xué)軸在胃癌血管生成及侵襲轉(zhuǎn)移中的分子機(jī)制研究作者姓名李遭諾培養(yǎng)。單，位山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院專業(yè)名稱臨床醫(yī)學(xué)普外指導(dǎo)教師孫宏治教授合作導(dǎo)師ONL，紅N，嗣N詹茬J螢V，牛掣，’‘”BI東大學(xué)博士學(xué)位論文目錄中文摘要5英文摘要14符號(hào)說明26綜述28第一部分CXCRT／CXCLL2在不同胃癌組織中的表達(dá)及與臨床病理因素的關(guān)系47前言47材判與方法49結(jié)果55討論61小結(jié)64參考文獻(xiàn)64第二部分慢病毒載體介導(dǎo)的RNAI沉默CXCR7后對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC7901靶向抑制的實(shí)驗(yàn)研究69前言69捌料與方法70結(jié)果78討論82小結(jié)85參考文獻(xiàn)85第J部分CXCR7一SHRNA調(diào)控ID一1對(duì)胃癌移植瘤及血管生成的影響9】前言91材料與方法92結(jié)果95討論104小結(jié)106參考義獻(xiàn)】06致謝11I7

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名蚴ET期201L，OS、2O學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部?jī)?nèi)容，可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)校可以向國(guó)家有關(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。保密論文在解密后遵守此規(guī)定保密論文注釋本學(xué)位論文屬于保密論文，保密期限為年。學(xué)位論文作者簽名琊湮B指導(dǎo)教師簽名VN孥目錄目錄摘要IABSTRACTIII第1章緒論111研究背景112研究意義2121經(jīng)濟(jì)地理學(xué)理論發(fā)展的新趨勢(shì)2122我國(guó)生物技術(shù)研究活躍的領(lǐng)域2123本文研究的實(shí)踐意義。313研究方法414研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線5141研究?jī)?nèi)容5142研究難點(diǎn)一6143可能的創(chuàng)新點(diǎn)7144技術(shù)線路圖。7第2章研究綜述921相關(guān)概念界定9211科學(xué)合作。9221地理鄰近與社會(huì)、制度鄰近。922國(guó)內(nèi)對(duì)科學(xué)合作的相關(guān)研究綜述9221管理學(xué)領(lǐng)域?qū)τ诳茖W(xué)合作的研究綜述10222管理學(xué)對(duì)科學(xué)合作的空問特性地域性研究1023國(guó)外對(duì)科學(xué)合作的相關(guān)研究綜述11231地理鄰近對(duì)科學(xué)合作作用機(jī)制研究1L232制度鄰近、社會(huì)鄰近對(duì)科學(xué)合作作用機(jī)制研究14233認(rèn)知鄰近對(duì)于科學(xué)合作作剛綜述14234地理鄰近因子與制度、社會(huì)鄰近因子相互作用機(jī)制研究1524國(guó)內(nèi)外研究評(píng)述15第3章基礎(chǔ)數(shù)據(jù)獲取及處理1731數(shù)據(jù)獲取方法選擇1732數(shù)據(jù)獲取17

簡(jiǎn)介：華中師范大學(xué)碩士學(xué)位論文室內(nèi)空氣甲醛誘發(fā)氣道高反應(yīng)的神經(jīng)分子生物學(xué)機(jī)制的研究姓名童志前申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生化與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師楊旭20031201⑧碩士學(xué)位論文MAS’RER’S’IHESIS后測(cè)量呼吸器官中P物質(zhì)含量變化，對(duì)比分析。結(jié)果1_吸入242MG／M3甲醛的小鼠呼吸器官中P物質(zhì)含量較空氣灌流組顯著上升PO05。腹部皮下預(yù)注射MGS04O2M，O5ML，再用242MG／MS甲醛灌流的小鼠呼吸器官中P物質(zhì)含量，較242MG／M3甲醛灌流組顯著下降PO，05。尾靜脈預(yù)注射CAPSAZEPINE510～M，O5ML，再242MG／M3甲醛灌流的小鼠呼吸器官中P物質(zhì)的含量，較242MG／M3甲醛灌流組顯著下降P001。結(jié)論甲醛誘發(fā)的氣道神經(jīng)源性炎癥的受體機(jī)制可能是通過激活感覺神經(jīng)末梢CFIBER上的類香草素受體VKL或，和NMDARECEPTOR，觸發(fā)神經(jīng)末梢軸索反射，釋放大量的速激肽例如SP，誘發(fā)氣道神經(jīng)源性炎癥。關(guān)鍵詞甲醛FM；氣道神經(jīng)源性炎癥多重化學(xué)物敏感癥MCS不良建筑綜合征SBS；P物質(zhì)SP；類香草素受體亞型LVRL；N甲基一D一天冬氨酸受體NMETHYLDASPARTATERECEPTORNMDARECEPTOR；CAPSAZEPINECPZ第二章類香草素受體CDNA體外擴(kuò)增、克隆和鑒定摘要有關(guān)類香草素受體VANILLOIDRECEPTOR，VR的研究受到著名國(guó)外雜志科學(xué)、自然的報(bào)道，麗目前相關(guān)的論述在國(guó)內(nèi)極少見之于報(bào)刊。本研究利用本實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)的用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞技術(shù)、堿裂解法小量制備質(zhì)粒DNA的技術(shù)，成功地將含有類香草素受體的亞克隆體VRL的PCDNA3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到T61大腸桿菌中并擴(kuò)增得到大量具有目標(biāo)基因的PCDNA3質(zhì)粒。這項(xiàng)研究為構(gòu)建類香草索受體模型細(xì)胞在非洲爪蟾卵母細(xì)胞體外表達(dá)、類香草素受體的電生理特征甲醛刺激反應(yīng)的研究、呼吸道疾病的新

簡(jiǎn)介：一JI『犬弊一JII犬學(xué)博士學(xué)位論文題目擔(dān)查掛茴姿堡盟生焦壘盆王皇塹生壁杰作者董焦里完成日期蘭墜年衛(wèi)月一日培養(yǎng)單位生全盟堂芏墮指導(dǎo)教師墼墨垂蕉撞專業(yè)堡籃塋研究方向坌量堡盟堂盈垂旦蘭垂授予學(xué)位日期年月日四川大學(xué)博士學(xué)位論文G一100凝膠過濾層析和改進(jìn)的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳1N．PAGE等方法，從粗毛栓菌RGALLICA分泌的胞外蛋白中分離了14種漆酶同工酶依次命名為L(zhǎng)AEL至LAEL4，純化產(chǎn)物通過SDSPAGE電泳檢查，均已經(jīng)達(dá)到了電泳純。生物物理性質(zhì)測(cè)定表明，純化的漆酶同工酶分子量都是60，000DASDSPAGE，并且為單體多糖含量為10～13．5％每個(gè)蛋白質(zhì)分子含有4個(gè)銅離子；具有610AM典型I型銅離子的的藍(lán)色吸收，以及330NM弱的II型銅離子的特征吸收；等電點(diǎn)在2．8～5．3之間；它們的非變性凝膠遷移率卻各不相同。生化性質(zhì)測(cè)定顯示，在PH6～10的范圍內(nèi)，漆酶是比較穩(wěn)定的；最適反應(yīng)溫度為70。C，但PH值可嚴(yán)重影響其熱穩(wěn)定性；金屬離子對(duì)漆酶活性有一定程度的抑制，其中FE2的作用最強(qiáng)。在試驗(yàn)的幾種抑制劑中，NAN3抑制作用最強(qiáng)；對(duì)ABTS、DMP和愈創(chuàng)木酚最適反應(yīng)PH值依次為2．2，3．0和4．O；K．M值測(cè)定表明ABTS是最適底物，但純化的14種漆酶的KM值存在很大差異。漆酶能夠有效氧化多種芳香、非芳香化合物以及偶氮染料和生物活性染料對(duì)20種有機(jī)化合物最適反應(yīng)PH值為2．2～5．4之間；通過測(cè)定耗氧速率，ABTS仍是漆酶最適反應(yīng)底物。漆酶LAEL0和LACLL的N．末端的氨基酸序列測(cè)定結(jié)果分別為A．I．GPV．AD．L．T．I．SN和S／A．I．GP．V詛．DLOI．SN。同源性分析顯示，2種漆酶N端氨基酸序列與栓菌屬的其它菌株的漆酶N一端序列有較高的同源性。根據(jù)漆酶基因序列的保守性設(shè)計(jì)了多對(duì)簡(jiǎn)并引物，通過PCR方法從粗毛栓菌基因組DNA中克隆到3個(gè)DNA片段LAC9147，LAC9201和K9450；采用RTPCR方法克隆到2個(gè)333BP的EDNA片段LACE333A和LACC333B以及1個(gè)長(zhǎng)1488BP的EDNA片段LACA。對(duì)6個(gè)漆酶基因片段的核苷酸及其編碼的氨基酸序列進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明LAC9147與LAC9450完全相同，它們應(yīng)是來自同一個(gè)基因；該基因與LACC333A同源性很高，達(dá)98．9％。此外，LACA和LACE333B之間也有較高同源性達(dá)99．3％；LAC9201與其它5個(gè)DNA序列同源性相對(duì)較低。因此推測(cè)6個(gè)DNA片段可能來自5個(gè)不同的漆酶基因。LACA序歹4編碼由496個(gè)氨基酸殘基組成的漆酶，結(jié)構(gòu)中含有漆酶特有的3種類型的C一結(jié)合位點(diǎn)，4個(gè)N．糖基化位點(diǎn)以及2個(gè)二硫鍵位點(diǎn)。同源性分析XL

簡(jiǎn)介：山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文用于細(xì)胞內(nèi)具有重要生物學(xué)意義的活性小分子物種的高選擇性識(shí)別的新型熒光探針的合成研究及其在生物體系中的應(yīng)用姓名于法標(biāo)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)分析化學(xué)指導(dǎo)教師唐波20090405近紅外熒光活性物種檢測(cè)成的機(jī)理常見的有光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移、電荷轉(zhuǎn)移激發(fā)態(tài)、單體一激基締合、熒光共振能量轉(zhuǎn)移、電子能量轉(zhuǎn)移。為了實(shí)現(xiàn)高選擇性、高靈敏度快速識(shí)別和檢測(cè)生物體內(nèi)的礦、C1’和FE2，并使之達(dá)到可視化的目的，本論文開展了以下兩方面的工作一設(shè)計(jì)合成了一種近紅外中性PH值熒光探針。探針結(jié)構(gòu)采用“熒光團(tuán)一橋體一受體’’設(shè)計(jì)模式，通過光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移機(jī)理來操控?zé)晒鈴?qiáng)度的增減。在結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)策略基礎(chǔ)上，我們選擇了具備有高吸光系數(shù)的七甲川花菁CY染料作為熒光團(tuán)，4’一芐胺基2，2’67，2_三聯(lián)吡啶TPY為質(zhì)子受體。通過PH滴定實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)此探針可用于監(jiān)測(cè)生理PH值微小的波動(dòng)。經(jīng)測(cè)定，探針的P‰約為710。在PH值670790范圍內(nèi)，熒光強(qiáng)度對(duì)H濃度變化有強(qiáng)的依賴性和迅速響應(yīng)靈敏性，并且在此范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度和PH值之間有著良好的線性關(guān)系。此探針可以在生化體系中有效地避開生物自發(fā)熒光和生物內(nèi)源性物種的干擾。同時(shí)探針也展現(xiàn)出高靈敏性、良好的光穩(wěn)定性和優(yōu)異的胞膜穿透性等優(yōu)點(diǎn)。本文成功地實(shí)現(xiàn)了對(duì)HEPG2細(xì)胞和HL7702細(xì)胞內(nèi)H原位監(jiān)測(cè)成像。二設(shè)計(jì)合成了一種連有三聯(lián)毗啶基團(tuán)的磺酸花菁結(jié)構(gòu)的熒光分子探針用于選擇性檢測(cè)生物體內(nèi)的FE2和C1。。探針的工作原理是基于探針金屬離子陰離子絡(luò)合配位和重原子的三重態(tài)熒光淬滅效應(yīng)。探針本身有強(qiáng)的熒光，在氯離子存在下與FE2絡(luò)合后，導(dǎo)致磺酸花菁的熒光猝滅，而且熒光強(qiáng)度的猝滅程度分別與FE2的濃度和CL。的濃度成一定的比例關(guān)系。探針在與FE2和CL’反應(yīng)前后的顏色由藍(lán)色變?yōu)樽仙?，?shí)驗(yàn)結(jié)果顯示探針對(duì)FE2和CL。有高度的選擇性。據(jù)此，我們分別固定了FE2和CL‘濃度，成功地實(shí)現(xiàn)了對(duì)FE2和C1。的分別檢測(cè)，探針的熒光強(qiáng)度變化分別與亞鐵離子和氯離子的濃度呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。探針對(duì)介質(zhì)的酸堿度不敏感，熒光性質(zhì)穩(wěn)定。該探針成功用于血漿和血清中FE2和CL’的選擇性檢測(cè)。選擇性實(shí)驗(yàn)表明該探針是檢測(cè)生物體內(nèi)FE2和CL’的理想近紅外熒光探針。關(guān)鍵詞氫離子氯離子亞鐵離子近紅外熒光探針共聚焦顯微成像比色法II

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文納米硒對(duì)AVIAN肉雞的生物學(xué)效應(yīng)及其分子機(jī)理的研究姓名胥保華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師許梓榮陳盛祿20030501醛MDA含量顯著升高仄0O；；而納米硒組無明顯變化。4、肉雞胸肌肌肉品質(zhì)的分析可見，在添加050MG／KG硒時(shí)高劑量，納米硒與硒代蛋氨酸和亞硒酸鈉相比，顯著降低了肌肉滴水損失仄O05、提高了肌肉紅色色度仄005、增加了肌肉中肌紅蛋白含量P005。本研究結(jié)果提示1納米硒作為硒源在抗氧化能力、提高肉雞生長(zhǎng)性能、體液免疫效能和改善肌肉品質(zhì)等方面表現(xiàn)出更強(qiáng)的營(yíng)養(yǎng)生物學(xué)作用2納米硒調(diào)控肉雞肝臟組織CGPXMRNA穩(wěn)定性的能力更強(qiáng)；3納米硒的WEINBERG劑量一效應(yīng)的最適劑量范圍寬于硒代蛋氨酸和亞硒酸鈉，顯示出對(duì)動(dòng)物的安全性更高，這對(duì)于飼料新硒源的開發(fā)利用具有實(shí)踐意義。關(guān)鍵詞納米硒，AVIAN肉雞，生物學(xué)效應(yīng)，谷胱甘肽過氧化物酶，細(xì)胞培養(yǎng)

簡(jiǎn)介：越橘（VACCINIUMVITISIDAEALINN），俗稱藍(lán)莓，為杜鵑花科ERICACEAE越橘屬（VACCINIUMLINN）灌木或小喬木。全世界越橘屬植物約有450個(gè)種，我國(guó)已知有91個(gè)種，28個(gè)變種，主要分布在我國(guó)東北和西南地區(qū)。北美地區(qū)既是越橘原產(chǎn)地也是主要產(chǎn)區(qū)。越橘果實(shí)為藍(lán)色小漿果，富含多種維生素、黃酮、花青素，具有顯著提高視力和抗癌保健功效，近年來世界各地需求量不斷增加。南高叢越橘品種V3及LEGACY引種西南地區(qū)多年，V3長(zhǎng)勢(shì)旺盛，但果實(shí)很小；LEGACY果實(shí)中等，長(zhǎng)勢(shì)較為旺盛，但在重慶每年春夏梅雨季節(jié)，葉片易出現(xiàn)大量褐色病斑，抗病性較差。由于多倍體植株具有器官巨大性、抗性增強(qiáng)及營(yíng)養(yǎng)成分增加等特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)室連續(xù)若干年采用秋水仙堿對(duì)北高叢、南高叢越橘不同品種進(jìn)行加倍，陸續(xù)得到了不同表型的變異植株。在誘變初期雖已經(jīng)對(duì)變異株的形態(tài)學(xué)及細(xì)胞學(xué)進(jìn)行了分析鑒定，但在田間栽培過程中，變異株還陸續(xù)有新的表型特征出現(xiàn)。加倍后的多倍體回復(fù)突變問題一直是研究中的空白領(lǐng)域，植株在回復(fù)突變中的生物學(xué)特性及分子水平的變化等指標(biāo)的記錄是進(jìn)行基礎(chǔ)研究的重要數(shù)據(jù)。因此，本研究運(yùn)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)在DNA水平對(duì)變異株進(jìn)行分析，并結(jié)合形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方法對(duì)變異植株與正常植株的解剖結(jié)構(gòu)、生理指標(biāo)、染色體數(shù)目進(jìn)行分析研究和差異顯著性比較，進(jìn)一步確認(rèn)變異株在回復(fù)突變過程中的各方面指標(biāo)的變化，旨在為越橘的多倍體育種提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。主要研究結(jié)果如下1V3變異株移栽田間生長(zhǎng)三年后，形態(tài)學(xué)鑒定顯示平均高度為對(duì)照的110％，莖直徑為對(duì)照的132，葉長(zhǎng)、葉寬為對(duì)照的144、137。與對(duì)照相比，變異株長(zhǎng)勢(shì)更好但果實(shí)較小，三棵變異株之間無顯著差異。LEGACY經(jīng)秋水仙素誘變后，根據(jù)表型特征分為L(zhǎng)1、L2兩種類型。L1變異株表現(xiàn)多倍體的特性，經(jīng)鑒定莖粗，葉長(zhǎng)、葉寬與對(duì)照相比分別增加了40、56、52，為顯著差異；L2變異株為分枝量增大類型，移栽田間后株高相比對(duì)照下降325，分枝量增加1944，為極顯著差異，葉長(zhǎng)寬分別增加34、38，與對(duì)照相比差異顯著。2經(jīng)葉表皮氣孔觀察，氣孔密度方面V3變異株下降205；L1變異株下降116，與對(duì)照相比差異顯著；保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)目V3變異株增加146，L1變異株增加356，L2變異株增加246，與對(duì)照相比均為顯著差異。氣孔保衛(wèi)細(xì)胞平均長(zhǎng)度、寬度L1變異株分別增加167、184，與對(duì)照差異顯著；V3、L2與對(duì)照相比差異不顯著。兩個(gè)品種的變異株葉片橫切結(jié)構(gòu)顯示葉片主脈直徑、上表皮厚度、柵欄組織及海綿組織厚度均顯著增加，LEGACY變異株的葉片結(jié)構(gòu)緊密度（CTR）與對(duì)照在5水平上存在差異，柵海比明顯高于對(duì)照，表明LEGACY變異株抗旱能力較對(duì)照有增強(qiáng)。3去壁低滲火焰干燥法對(duì)變異株莖尖染色體鑒定結(jié)果表明越橘V3及L1變異株均為二倍體細(xì)胞和四倍體細(xì)胞共存的嵌合體，多倍體細(xì)胞比率分別為4552、3862，較其誘導(dǎo)初期鑒定結(jié)果（70、4906）相比呈下降趨勢(shì)，表明在越橘異倍型嵌合體中，二倍體細(xì)胞分裂增殖速度較四倍體細(xì)胞快，加倍后有回復(fù)突變傾向。4V3變異株的葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量均較對(duì)照顯著增加，丙二醛含量顯著下降；LEGACY變異株的葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量均較對(duì)照增加，丙二醛含量下降，呈極顯著差異。表明變異株具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，抗逆性更強(qiáng)。5采用改良CTAB法獲取高質(zhì)量越橘DNA。通過直觀分析和方差分析結(jié)合建立了越橘ISSRPCR（20ΜL）最佳反應(yīng)體系，各組分的濃度為10BUFFER2ΜL；TAQ酶075U；MG21875MMOLL1；DNA80NG；DNTP01MMOLL1；引物02ΜMOLL1。在此基礎(chǔ)上探討了引物UBC835的最佳退火溫度、循環(huán)次數(shù)和延伸時(shí)間，結(jié)果分別為542℃、35次、60S。電泳結(jié)果顯示優(yōu)化體系穩(wěn)定性較高。6對(duì)V3、LEGACY變異株及在田間栽培中出現(xiàn)表型變異的南高叢品種南好變異株（B1、B2、B3）及10個(gè)由本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期栽培保存的北高叢和南高叢越橘品種共21個(gè)樣品進(jìn)行ISSR多態(tài)性擴(kuò)增。從70個(gè)ISSR引物中篩選出10個(gè)多態(tài)性高且較穩(wěn)定的引物，共擴(kuò)增出95個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)90個(gè)，多態(tài)比率為9470。UPGMA聚類顯示21個(gè)樣品的遺傳距離介于057083，均值07，在系數(shù)057處材料被分為南北高叢兩大分支。3個(gè)品種的變異株均表現(xiàn)出很高的多態(tài)性。與對(duì)照株相比，變異株在ISSRPCR擴(kuò)增中的條帶差異為缺失、新增、既缺失又新增三種類型。A1、A2、A3變異株與對(duì)照V3之間遺傳相似系數(shù)為0800、0711、0722；L1、L2變異株與對(duì)照LEGACY之間遺傳相似系數(shù)為0800、0767；B1、B2、B3與對(duì)照南好之間遺傳相似系數(shù)為0633、0589、0578。結(jié)合變異株生物學(xué)差異和ISSR多態(tài)性分析，表明V3、LEGACY及南好的變異植株在DNA分子水平上發(fā)生改變。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)S8553授予學(xué)位單位代碼授予學(xué)位單位代碼10434學(xué)號(hào)2015120238山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)全日制碩士專業(yè)學(xué)位論文毛皮動(dòng)物犬瘟熱病毒分離鑒定及分子生物學(xué)特性研究毛皮動(dòng)物犬瘟熱病毒分離鑒定及分子生物學(xué)特性研究BIOLOGICALACTERISTICSISOLATEDOFCANINEDISTEMPERVIRUSOFFURBEARINGANIMALS20172017年66月66日姓名劉傳毅劉傳毅學(xué)位類別學(xué)位類別獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士專業(yè)獸醫(yī)研究方向研究方向獸醫(yī)傳染病學(xué)獸醫(yī)傳染病學(xué)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師謝之景教授謝之景教授關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)密級(jí)研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學(xué)研究沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學(xué)研究論文題目（外文）論文題目（外文）STUDYONMOLECULARBIOLOGYOFEMBELLISIAASTRAGALI研究生姓名研究生姓名劉建利劉建利學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)草學(xué)草學(xué)草地保護(hù)學(xué)草地保護(hù)學(xué)研究方向研究方向牧草病理學(xué)牧草病理學(xué)學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別博士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱李彥忠李彥忠教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2012年9月至月至2016年5月論文提交日期論文提交日期2016年5月論文答辯日期論文答辯日期2016年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2016年6月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市I沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學(xué)研究中文摘要沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學(xué)研究中文摘要沙打旺（ASTRAGALUSADSURGENS）是我國(guó)特有豆科牧草，適宜于干旱、半干旱和半荒漠地區(qū)，具有治理水土流失等生態(tài)作用。沙打旺黃矮根腐病是由沙打旺埃里磚格孢（EMBELLISIAASTRAGALI）引致的沙打旺上最重要的病害之一，為系統(tǒng)性病害、氣傳病害和種傳病害。此前研究表明該病菌的形態(tài)特征及在寄主體內(nèi)的生活特性與瘋草內(nèi)生真菌ALTERNARIASPPUNDIFILUMSPPEMBELLISASPP相似，但由于尚未見其分子生物學(xué)方面的報(bào)道，故二者相似的論斷尚缺少分子生物學(xué)的佐證。為減少種子傳播途徑和分子育種，減少病害的發(fā)生，有必要研制出種帶該病菌的快速檢測(cè)技術(shù)，以及挖掘出其致病基因。為此，本論文開展了相關(guān)研究，得到如下主要結(jié)果。1基于3磷酸甘油醛脫氫酶（GPD）、RNA聚合酶II第二大亞基（RPB2）和轉(zhuǎn)錄延伸因子1Α（TEF1）的聯(lián)合多基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，確定該病菌與鏈格孢屬波浪芽管孢組GENUSALTERNARIASECTIONUNDIFILUM的模式種ABNMUELLERIDAOM231361均屬于同一組；基于核糖體編碼基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）和GPD多基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，顯示該病菌與6種瘋草中的4種瘋草內(nèi)生真菌不同，屬另一物種，兩個(gè)系統(tǒng)樹中上述兩個(gè)分支的MP自展支持率和貝葉斯后檢支持率都分別為100和100；再加上此菌也具有鏈格孢屬波浪芽管孢組典型形態(tài)特征“波浪芽管”，鑒于種加詞“ASTRAGALI”已被其他真菌占用。故將其更名為甘肅鏈格孢ALTERNARIAGANSUENSECOMBNOV，厘清了沙打旺黃矮根腐病菌與瘋草內(nèi)生真菌之間的關(guān)系。2根據(jù)細(xì)胞質(zhì)膜三磷酸腺苷水解酶基因片段（ATPASE）設(shè)計(jì)出此菌的特異性檢測(cè)引物AATPFGTCGAGAGTTTTTTCTT和AATPRGGTGGAGCTGGGTTGTTTTA，利用此特異引物進(jìn)行普通PCR，可檢測(cè)出沙打旺種子中5PGΜL以上的此病菌DNA，帶菌率15的種子；熒光定量PCR擬合方程為CT3226LOGDNA29055，相關(guān)系數(shù)為09987，最低可以檢測(cè)05PGΜL沙打旺黃矮根腐病菌DNA。運(yùn)用本方法可以準(zhǔn)確快速檢驗(yàn)檢疫沙打旺種帶黃矮根腐病菌，預(yù)防該病在新建植人工栽培沙打旺草地致病成災(zāi)。3根據(jù)線粒體內(nèi)核糖體小亞基編碼基因（MTSSU）基因設(shè)計(jì)出瘋草內(nèi)生真菌特異性檢測(cè)引物OMTSSUF（CATAGAAAAAAAAATAAACAAACTG）和OMTSSUR

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬白細(xì)胞介素一34PIL34的分子克隆、表達(dá)和生物學(xué)活性驗(yàn)證MOLECULARCLONING，EXPRESSIONANDBIOACTIVITYVERIFICATIONOFPORCINEINTERLEUKIN一34PIL一34研究生胡彝指導(dǎo)教師陳煥春院士指導(dǎo)小組陳煥春院士方六榮教授肖少波副教授江云波副教授專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向動(dòng)物病原分子生物學(xué)和基因工程獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士獲得學(xué)位時(shí)間2010年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二OO年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)能論文否如需保密，解密時(shí)間年月日是否保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定與我一同工作的同態(tài)對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。研究生簽名塌斯時(shí)間。。，D年占月，7日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存。使用學(xué)位論文的規(guī)定”，印學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電予版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容J‰。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書學(xué)夠謄名塌畸導(dǎo)師麟膳蝣。簽名日期■DLO年‘月I，日簽名日期≯矽年多月，，日

簡(jiǎn)介：福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文花生抗青枯病的分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究姓名張沖申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師莊偉建20100601花生抗青枯病分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究3根據(jù)已經(jīng)登錄的RRSIR基因序列設(shè)計(jì)引物，通過RTPCR從擬南芥ND1中克隆得到4137BP的抗青枯病基因RRSLR，與GENBANK上登錄的原序列同源性達(dá)99％，將該基因片斷連入植物表達(dá)載體PSCL301，構(gòu)建帶抗青枯病基因的植物表達(dá)載體PSCL301RRSL，轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHAL05。然后準(zhǔn)備對(duì)煙草進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)而進(jìn)行功能驗(yàn)證，后續(xù)工作正在進(jìn)行中。本項(xiàng)日還同時(shí)開展了花生對(duì)青枯病的抗性遺傳和抗性基因克隆研究。上述研究為克隆和深入研究花生抗青枯病的分子機(jī)理，提供了前期的工作基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞G花生；青枯?。豢剐澡b定；全長(zhǎng)CDNA文庫(kù)；RRSLR2

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)級(jí)學(xué)號(hào)號(hào)20091030452009103045單位代碼單位代碼1075910759石河子大學(xué)石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛新孢子蟲病分子生物學(xué)檢測(cè)方法的研究奶牛新孢子蟲病分子生物學(xué)檢測(cè)方法的研究研究生唐慧芬指導(dǎo)教師季新成季新成副研究員副研究員申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別理學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向免疫與育種所在學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院中國(guó)〃新疆〃石河子2012年6月RESEARCHOFMOLECULARBIOLOGYDETECTIONMETHODFNEOSPOSISADISSERTATIONSUBMITTEDTOSHIHEZIUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFNATURALSCIENCEBYTANGHUIFENIMMUNIZATIONBREEDINGDISSERTATIONSUPERVISASSOCIATERESEARCHERJIXINCHENGSHIHEZIXINJIANGCHINAJUNE2012

簡(jiǎn)介：福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文煙草花葉病毒弱毒疫苗的研制及其分子生物學(xué)姓名邵碧英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)植物病理學(xué)指導(dǎo)教師林奇英謝聯(lián)輝200151福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文接收號(hào)分別為AF395127、AF395128、AF395129，結(jié)果表明，強(qiáng)、弱毒株基因組均為6395個(gè)核苷酸，具有4個(gè)開放閱讀框ORF，分別編碼126KDA蛋I芻693419NT1116AA和183KDA通讀蛋白694919NT，1616AA、運(yùn)動(dòng)蛋白49035709NT269AA、外殼蛋白5712619INT，159AA。5’端非編碼區(qū)NR為68NT168M，通讀蛋白和運(yùn)動(dòng)蛋白基因有17個(gè)堿基重疊，運(yùn)動(dòng)蛋白和外殼蛋白基因間隔區(qū)為2NT5710571INT，3’端NR區(qū)為204NT61926395NT。TMVW和TMVU1相比，基因組同源率達(dá)到98％，TMVW為普通株系。TMV017、TLVLV152基因組核苷酸發(fā)生變異的部位主要在126／183KDA蛋白ORF。和1NⅣW相比，TMV017僅在126KDA蛋白ORF中有18個(gè)堿基發(fā)生變異，10個(gè)引起氨基酸的變異；而TMV一152在126／183KD蛋白ORF中有16個(gè)堿基發(fā)生變異，其中有11個(gè)引起氨基酸的變異。TMV017和TMV152有11個(gè)共同變異的堿基，其中8個(gè)引起氨基酸的變異。TMV152在MPORF中有1個(gè)堿基引起氨基酸的變異。其它區(qū)域，三者完全相同。首次嘗試將弱毒株的缺失復(fù)制酶基因轉(zhuǎn)化煙草。構(gòu)建了含TMVW、TMV017各2個(gè)126KDA蛋白ORF的部分片段，E1E28732813NT、R1E2692813NT的植物表達(dá)載體。經(jīng)農(nóng)桿菌TI質(zhì)粒介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草。再生植株總DNA的SOUTHERN點(diǎn)雜交檢測(cè)結(jié)果初步表明，4個(gè)片段均己整合到煙草基因組中。再生植株總RNA的RTPCRSOUTHERN點(diǎn)雜交檢測(cè)結(jié)果初步表明，4個(gè)片段均有轉(zhuǎn)錄。用含NDVWE1E2的重組克隆和載體PGEX2T，構(gòu)建了重組原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)表達(dá)出融合蛋11194KDA，制各了抗血清。免疫斑點(diǎn)雜交檢測(cè)抗血清的適宜工作濃度為1100。轉(zhuǎn)化植株能延遲、減輕攻擊病毒ND砩，的癥狀表現(xiàn)，含TMVWE1E2片段的轉(zhuǎn)化植株中有1株抗性水平高。J關(guān)鍵詞煙草花葉病毒，弱毒株，交互保護(hù)作用，基因組RNA，序列分析，繃腿臆脯嗲舡程