簡介：分類號分類號R73371學(xué)校代碼學(xué)校代碼10392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100201學(xué)號號200901218福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文慢病毒介導(dǎo)的慢病毒介導(dǎo)的BMI1基因沉默對骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)基因沉默對骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)特性及硼替佐米敏感性特性及硼替佐米敏感性影響的研究影響的研究STUDYONSILENCEOFBMI1MEDIATEDBYLENTIVIRUSSHRNAONBIOLOGICALACTERSSENSITIVITYTOBTEZOMIBINMULTIPLEMYELOMACELLS學(xué)位類型學(xué)位類型醫(yī)學(xué)碩士所在學(xué)院院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院研究生生徐珍珍徐珍珍學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)內(nèi)科學(xué)內(nèi)科學(xué)血液血液導(dǎo)師師戰(zhàn)榕戰(zhàn)榕教授教授研究起止日期研究起止日期2010年12月至月至2012年3月答辯日期答辯日期2012年6月6日二〇一二年一二年六月目錄英文略縮詞英文略縮詞2中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要5前言前言7第一部分第一部分BMI1SHRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及穩(wěn)轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞株的建立慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及穩(wěn)轉(zhuǎn)骨髓瘤細(xì)胞株的建立引言9材料和方法10結(jié)果19討論21結(jié)論24第二部分第二部分BMI1基因沉默對基因沉默對骨髓瘤骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)特性及增強(qiáng)細(xì)胞生物學(xué)特性及增強(qiáng)骨髓瘤骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞對硼替佐米敏感性替佐米敏感性的機(jī)制機(jī)制研究研究引言25材料和方法26結(jié)果29討論39結(jié)論42全文總結(jié)全文總結(jié)43參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)44致謝致謝50綜述綜述BMI1基因在多發(fā)性骨髓瘤中的研究進(jìn)展基因在多發(fā)性骨髓瘤中的研究進(jìn)展51

簡介：目錄中文摘要1英文摘要2前言4材料與方法41、HIF2ASHRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選42、HIF2A在NCIH226細(xì)胞株中的表達(dá)93、HIF2A對NCIH226細(xì)胞生物學(xué)行為的影響14實(shí)驗(yàn)結(jié)果17討論24結(jié)論26參考文獻(xiàn)26文獻(xiàn)綜述29參考文獻(xiàn)38英文縮寫注釋43攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況44個人簡歷45致謝46

簡介：本文主要分兩部分展開研究第一部分UCMSC和的生物學(xué)特性鑒別目的比較人臍帶和脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性。方法分離及體外培養(yǎng)人脂肪和臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞。通過連續(xù)9天的CCK8的檢測結(jié)果繪制兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的生長曲線。為了解和UCMSC的免疫表型，流式細(xì)胞儀檢測CD13、CD14、CD44、CD45、CD71、CD90、CD105和CD34在兩種MSC上的表達(dá)。利用地塞米松誘導(dǎo)和UCMSC后，流式檢測ANNEXINV的表達(dá)，分析MSCS的抗凋亡能力。通過成脂、成骨、成神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基對兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，鑒定其多向分化的潛能。分別采用油紅O、茜素紅、GFAP染色鑒定是否分化成功。通過蛋白芯片分析和UCMSC的培養(yǎng)液上清的分泌的蛋白和細(xì)胞因子。結(jié)果脂肪來源和臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞都能成功從相關(guān)組織中分離培養(yǎng)。和UCMSC形態(tài)上相似，2天左右時呈現(xiàn)纖維狀或梭形，當(dāng)610天后細(xì)胞密度增大時，呈現(xiàn)在平行排列生長或旋渦狀生長。和UCMSC均表達(dá)CD13、CD44、CD71、CD90、CD105，不表達(dá)CD14、CD34和CD45。生長曲線顯示1218H，細(xì)胞增殖較慢，2D后進(jìn)入對數(shù)生長期，持續(xù)56D，在78D后進(jìn)入細(xì)胞生長平臺期。在高濃度的地塞米松的誘導(dǎo)下，和UCMSC都具有良好的抗凋亡能力。脂肪來源和臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞都具有很好的成脂、成骨、成神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化能力。在培養(yǎng)過臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的上清中，兩種干細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子水平不盡相同。UCMSC上清中的MIP2、IL6和GRO的表達(dá)顯著高于，而上清中的CD27和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白含量則高于UCMSC。結(jié)論脂肪來源和臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞均具有類似的生物學(xué)特性，但在誘導(dǎo)分化、增殖能力方面各有優(yōu)勢，所分泌的細(xì)胞因子水平也不盡相同，因此應(yīng)根據(jù)不同的需要選擇合適來源的干細(xì)胞。第二部分UCMSC和條件培養(yǎng)基對U251細(xì)胞的分化、凋亡的影響目的了解兩種間充質(zhì)干細(xì)胞，和UCMSC的培養(yǎng)上清的抗膠質(zhì)瘤特性。方法通過CCK8檢測UCMSC和的培養(yǎng)上清抑制U251的增殖能力。利用流式細(xì)胞儀檢測ANNEXINV的表達(dá)分析UCMSC和的培養(yǎng)上清誘導(dǎo)U251后的凋亡程度。實(shí)時熒光定量PCR檢測U251在誘導(dǎo)前后的凋亡相關(guān)基因的MRNA的表達(dá)量。通過高通量篩選系統(tǒng)評估膠質(zhì)細(xì)胞在分化后的形態(tài)改變。劃痕試驗(yàn)、MATRIGEL侵襲試驗(yàn)檢測腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。通過蛋白芯片分析U251細(xì)胞在CM和UCMSCCM誘導(dǎo)前后蛋白表達(dá)。結(jié)果兩種類型的間充質(zhì)干細(xì)胞都能抑制U251細(xì)胞的增殖，特別是UCMSC的抑制能力更強(qiáng)。ANNXINV和PI的凋亡檢測表明CM和UCMSCCM都能誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡。實(shí)時熒光定量PCR檢測表明誘導(dǎo)后U251的凋亡基因CASPASE3和CASPASE9表達(dá)顯著上調(diào)，而抗凋亡基因SURVIVIN和XIAP的表達(dá)下調(diào)。MSCCM都能誘導(dǎo)U251細(xì)胞很快分化成為相對正常形態(tài)，并能減弱腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)論間充質(zhì)干細(xì)胞均能有效誘導(dǎo)U251細(xì)胞的凋亡和分化。UCMSC的誘導(dǎo)凋亡能力較更強(qiáng)。兩種干細(xì)胞對U251的誘導(dǎo)分化的能力沒有明顯差異。我們的發(fā)現(xiàn)提示MSC細(xì)胞本身有良好的抗腫瘤的特性，并可能用于未來的膠質(zhì)瘤的治療。

簡介：獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，不包含本人或他人已申請學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名日期保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)聲明本人完全了解第四軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位為第四軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文等使用本論文工作成果時第一署名單位仍然為第四軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容（含電子版，保密內(nèi)容除外），可以采用影印，縮印或其他復(fù)制手段保存論文；學(xué)校有權(quán)允許論文被查閱和借閱，并在校園網(wǎng)上提供論文內(nèi)容的瀏覽和下載服務(wù)。同意學(xué)校將論文加入中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和編入中國知識資源總庫等，并可瀏覽和下載，同時享受中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程規(guī)定的相關(guān)權(quán)益。論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文個人簡歷和研究成果67致謝68

簡介：分類號分類號R7337R7337學(xué)校代碼學(xué)校代碼103910392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100208100208學(xué)號學(xué)號21210032292121003229碩士碩士學(xué)位學(xué)位論文論文論文題目論文題目慢病毒介導(dǎo)慢病毒介導(dǎo)HSAMIR223過表達(dá)對過表達(dá)對K562細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究EFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDHSAMIR223OVEREXPRESSIONONBIOLOGICALPROPERTIESOFK562學(xué)位類別別醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)碩士碩士所在學(xué)院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院申請人姓名莫慧玲姓名莫慧玲學(xué)科、?？啤I(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)導(dǎo)師曹穎平師曹穎平教授教授答辯委員會主席伍嚴(yán)安答辯委員會主席伍嚴(yán)安教授教授研究起研究起止時間止時間20142014年1111月至月至20152015年5月答辯日期期20152015年5月2929日二○一五○一五年五月目錄中文摘要中文摘要1ABSTRACT3前言5第一部分第一部分MIRMIR223223慢病毒過表達(dá)重組載體質(zhì)粒的構(gòu)建慢病毒過表達(dá)重組載體質(zhì)粒的構(gòu)建及在及在K562K562細(xì)胞細(xì)胞中的表達(dá)情況中的表達(dá)情況81材料811細(xì)胞株812慢病毒載體系統(tǒng)813慢病毒載體構(gòu)建及表達(dá)的主要試劑814慢病毒載體構(gòu)建及表達(dá)的主要儀器915其他實(shí)驗(yàn)所需的主要試劑和主要儀器916主要試劑的配置102實(shí)驗(yàn)方法1221PCR擴(kuò)增目的基因片段1222割膠回收1323大腸桿菌感受態(tài)的制備1424目的基因同源重組入表達(dá)載體1425重組質(zhì)粒鑒定1626陽性重組質(zhì)粒的大量抽提163慢病毒的包裝1731包裝病毒293T細(xì)胞的復(fù)蘇1732293T細(xì)胞的傳代1733陽性重組質(zhì)粒的細(xì)胞轉(zhuǎn)染1834慢病毒的收獲和濃縮1835慢病毒滴度測定194K562細(xì)胞的培養(yǎng)1941培養(yǎng)基成份19

簡介：分類號R73725密級科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位團(tuán)學(xué)校代碼10062學(xué)號2011602459學(xué)科門類醫(yī)學(xué)又坪眚科鼻等TLAJIH麓毫OLEAILIULV薯LTS●1F，Y碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目HSPCILL異常表達(dá)對前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響TITLEIMPACTOFHSPCILLABNORMALEXPRESSIONONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFPROSTATECANCERCELL一級學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科外科學(xué)泌尿外論文作者孫鳳亮指導(dǎo)教師徐勇教授導(dǎo)師組成員張昌文天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的明確HSPCILL在前列腺癌中的表達(dá)情況及其對前列腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響，探討HSPCILL在前列腺癌進(jìn)展中的作用。方法運(yùn)用RTQPCR方法檢測HSPCILL在前列腺癌和前列腺增生組織中的表達(dá)量；利用RTQPCR及WESTERNBLOT檢測HSPCI11在正常前列腺細(xì)胞系RWPE1以及前列腺癌細(xì)胞系LNCAP和PC3中的表達(dá)量；構(gòu)建含HSPCI1L短發(fā)卡RNASHRNA的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選及挑選單克隆后獲得穩(wěn)定低表達(dá)HSPCILL的PC3細(xì)胞株，并利用RTQPCR及WESTEMBLOT驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HSPCI11的表達(dá)量；運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法和MTT法檢測HSPCI11低表達(dá)PC3細(xì)胞的增殖能力，利用TRANSWELL法檢測HSPCI11低表達(dá)PC3細(xì)胞侵襲能力，磷脂酰絲氨酸外翻分析ANNEXINV檢測HSPCILL低表達(dá)PC3細(xì)胞的凋亡情況；通過測定細(xì)胞內(nèi)蛋白含量檢測HSPCILL異常表達(dá)對細(xì)胞蛋白合成的影響。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS180軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果與前列腺增生組織相比，HSPCILL在前列腺癌組織中高表達(dá)；與正常前列腺細(xì)胞系RWPE1相比，HSPCILL在前列腺癌細(xì)胞系LNCAP及PC3中高表達(dá)，而LNCAP與PC3之間無明顯差異；利用含HSPCILL特異性SHRNA的慢病毒載體轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞可建立HSPCILL穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞；降低內(nèi)源性HSPCILL表達(dá)可抑制細(xì)胞體外增殖；降低內(nèi)源性HSPCI11表達(dá)可抑制細(xì)胞侵襲能力；降低內(nèi)源性HSPCILL表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞凋亡；降低內(nèi)源性HSPCILL表達(dá)可抑制細(xì)胞蛋白合成。結(jié)論HSPCI11異常表達(dá)可改變前列腺癌細(xì)胞的體外生物學(xué)行為，且與前列腺癌進(jìn)展密切相關(guān)。我們認(rèn)為抑制HSPCI11表達(dá)對控制前列腺癌增殖進(jìn)展是一個可行的治療策略。關(guān)鍵詞前列腺癌HSPCILL核仁蛋白RNA干擾生物學(xué)行為

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文LRIG3對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL15生物學(xué)特性影響的分子生物學(xué)機(jī)制研究姓名席桂發(fā)申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師雷霆20070501華華中中科科技技大大學(xué)學(xué)博博士士學(xué)學(xué)位位論論文物學(xué)特性的影響。方法方法甲基四唑蘭MTT和TRANSWELL分別檢測表皮生長因子EGFAG1478對GL15細(xì)胞增殖和侵襲力的影響，逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR和WESTERNBLOT分別檢測EGF和AG1478作用后GL15細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAPMRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果結(jié)果外源性的EGF雙向調(diào)節(jié)GL15細(xì)胞增生和生長，小劑量（50NGML，100NGML）EGF能促進(jìn)細(xì)胞增生和提高細(xì)胞侵襲能力以及GFAMINRNA和蛋白表達(dá)，而大劑量（200NGML）則能降低其增殖和侵襲能力，AG1478則能明顯拮抗EGFR活性。結(jié)論結(jié)論GL15膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的生物學(xué)特性與EGFR所在的7號染色體過度擴(kuò)增密切相關(guān)。EGF可雙向調(diào)節(jié)GL15細(xì)胞系的生長，AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的理想靶點(diǎn)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞表皮生長因子受體；GL15細(xì)胞；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；膠質(zhì)纖維酸性蛋白第三部分第三部分LRIG3調(diào)控調(diào)控GL15細(xì)胞生物學(xué)活性的分子機(jī)制的研究細(xì)胞生物學(xué)活性的分子機(jī)制的研究目的目的探討LRIG3調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL15生物學(xué)行為的分子機(jī)制。方法方法用LRIG3EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染GL15細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期的變化，MTT法和TRANSWELL分析檢測EGF和AG1478對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖和侵襲的影響，逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR和WESTERNBLOT分別檢測EGF作用于轉(zhuǎn)染后的GL15細(xì)胞EGFR和LRIG3蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果結(jié)果將質(zhì)粒LRIG3EGFP轉(zhuǎn)染GL15細(xì)胞后，LRIG3主要在胞漿表達(dá)，轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞其細(xì)胞周期多阻滯在S期，細(xì)胞侵襲性明顯下降。用100NGMLEGF分別作用于各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞后，不同的時間點(diǎn)其EGFR和LRIG3表達(dá)不同，隨時間延長，EGFR的表達(dá)下降，LRIG3表達(dá)增加。結(jié)論結(jié)論過表達(dá)LRIG3EGFP可以抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長并使其侵襲性下降，這種抑制作用與EGFR的活性密切相關(guān)。LRIG3可能是基因治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤重要的靶基因。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞LRIG3；表皮生長因子；GL15細(xì)胞；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤4

簡介：銀屑病是一種以紅斑、鱗屑為主要表現(xiàn)的慢性炎癥性皮膚病，在我國和全世界都是常見病、多發(fā)病。當(dāng)前銀屑病的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全得以闡明，治療仍然存在療效不滿意和易于復(fù)發(fā)的問題?，F(xiàn)代研究表明，銀屑病的基本病理表現(xiàn)為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增生和分化不全，以及真皮毛細(xì)血管的增生。我院內(nèi)制劑消銀解毒飲在我科臨床應(yīng)用二十余年，取得了良好的療效。我科近期完成國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)科研課題臨床研究顯示，其治療銀屑病的總有效率為918％，顯著優(yōu)于復(fù)方青黛膠囊對照組；用藥治療4周后，患者鱗屑中IL8含量較治療前明顯下降。在動物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，其對SEB誘導(dǎo)的小鼠血清IL8的升高有拮抗作用，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)功能。為探討消銀解毒飲除通過免疫調(diào)節(jié)而發(fā)揮其治療作用外，是否尚具有對角質(zhì)形成細(xì)胞的直接作用；對真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞有何影響；以及消銀解毒飲中涼血、解毒、祛風(fēng)除濕等三組主要成分在治療銀屑病時所起的作用。我們運(yùn)用藥理血清的研究方法，以角質(zhì)形成細(xì)胞株COLO16和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304為研究對象，用四唑鹽MTT比色法觀察消銀解毒飲及拆方后各組藥物血清對其增殖的影響；用流式細(xì)胞技術(shù)觀察藥物對其凋亡的影響；用雙抗體夾心ABCELISA法測定藥物對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌VEGF的影響。通過細(xì)胞生物學(xué)方面的研究，進(jìn)一步探討了消銀解毒飲治療銀屑病的作用機(jī)制和作用靶位。并為中醫(yī)辨證組方規(guī)律的研究以及銀屑病的臨床治療提供新的思路和方法。結(jié)果顯示①M(fèi)TX組較蒸餾水組細(xì)胞存活率明顯降低，隨著濃度的升高差異亦加大，在濃度高于10％時二者有極其顯著性差異P005。②在含藥血清濃度為20％時，解毒方組、祛風(fēng)除濕方組、涼血方組等三組細(xì)胞的凋亡率與蒸餾水組比較無顯著性差別P005；而消銀解毒飲組、MTX組凋亡率顯著增高，與蒸餾水組相比有極為顯著性差異P0001。③在5％濃度下，MTX組、消銀解毒飲組和涼血方組體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率均有所降低，但只有MTX組與對照組比較有較為顯著的差別P005。在10％濃度下，消銀解毒飲組、涼血方組及MTX組血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率均有所下降，其中消銀解毒飲組和MTX組細(xì)胞存活率下降的較為明顯，與對照組比較有極其顯著性差異P0001，涼血方組與對照組比較亦有較為顯著的差別P005。在20％濃度下，消銀解毒飲組、祛風(fēng)除濕方組、涼血方組以及MTX組血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活率均有下降，其中消銀解毒飲組、涼血方組及MTX組與對照組比較有極其顯著性差異P0001。祛風(fēng)除濕方組有較為顯著差異P005。④在5％濃度下，MTX組和消銀解毒飲組對體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞COLO16分泌VEGF有抑制作用，消銀解毒飲組的抑制作用更為明顯，與對照組相比有極其顯著的差異。在10％濃度下，消銀解毒飲組、解毒方組及MTX組對COLO16細(xì)胞分泌VEGF均有抑制作用，其中消銀解毒飲組和解毒方組與對照組比較有極其顯著性差異消銀解毒飲組P0001，解毒方組P001。在20％濃度下，消銀解毒飲組、解毒方組、涼血方組以及MTX組對COLO16細(xì)胞分泌VEGF均有抑制作用，其中消銀解毒飲組、解毒方組及MTX組與對照組比較有極其顯著性差異P0001。消銀解毒飲組、解毒方組涼血方組及MTX組隨著含藥血清濃度的升高VEGF含量降低，兩者呈負(fù)相關(guān)。結(jié)果表明①消銀解毒飲能抑制銀屑病患者角質(zhì)形成細(xì)胞的異常增殖并誘導(dǎo)其凋亡。②消銀解毒飲對患者血管內(nèi)皮細(xì)胞的過度增生亦具有的抑制作用。③消銀解毒飲還可抑制患者角質(zhì)形成細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子。④在消銀解毒飲的拆方中，涼血藥物對抑制細(xì)胞的過度增殖發(fā)揮主要作用，解毒藥物對抑制角質(zhì)形成細(xì)胞分泌VEGF起主要作用；而三組藥物的協(xié)同配合可使各種作用明顯加強(qiáng)，從而對銀屑病的有效治療發(fā)揮更好的作用。⑤消銀解毒飲除通過免疫調(diào)節(jié)而發(fā)揮其治療作用外，還可通過對角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖的直接抑制及誘導(dǎo)其凋亡，抑制真皮微血管的異常增生而發(fā)揮治療作用。消銀解毒飲可通過多個環(huán)節(jié)，多個靶點(diǎn)對銀屑病發(fā)揮治療作用。為臨床運(yùn)用消銀解毒飲治療銀屑病提供了重要的理論依據(jù)。

簡介：鈦合金（TITANIUMALLOYS）材料以其良好的生物相容性、機(jī)械性能、耐腐蝕性等在矯形外科和毗鄰學(xué)科中得到廣泛應(yīng)用。目前商業(yè)用鈦合金材料存在兩個突出問題其一是材料表面與骨組織或軟組織界面難以充分整合的問題；其二是材料彈性模量較高產(chǎn)生應(yīng)力遮擋的問題。為解決界面問題而進(jìn)行表面改性是提高材料生物相容性的一種可靠方法，已有研究顯示，經(jīng)表面理化改性后鈦合金材料植入物更易與骨組織、軟組織有效整合，其中表面形態(tài)學(xué)改性因其突出的接觸導(dǎo)向作用和表面穩(wěn)定性而被廣泛關(guān)注；材料彈性模量的改進(jìn)則需制作工藝的提高。目前國內(nèi)外尚未有在鈦合金表面進(jìn)行規(guī)則微形態(tài)改性處理后觀察組織細(xì)胞相容性的實(shí)驗(yàn)研究報道。本研究擬通過觀察兔腱膜成纖維細(xì)胞在不同微形態(tài)鈦合金表面生物學(xué)行為的不同表現(xiàn)，探討鈦合金材料表面規(guī)則微形態(tài)與機(jī)體軟組織早期整合的機(jī)制。1兔腱膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)、純化及其生長特性的研究目的建立一種獲得高純度成纖維細(xì)胞的簡便可靠的培養(yǎng)方法，研究其體外實(shí)驗(yàn)條件下的生長及增殖特點(diǎn)。方法采用組織塊法培養(yǎng)原代兔跟腱腱膜成纖維細(xì)胞并純化、傳代后，觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)及形態(tài)，繪制生長曲線并計(jì)算細(xì)胞倍增時間。結(jié)果通過該方法可獲得的純度高、性狀穩(wěn)定、增殖能力強(qiáng)的成纖維細(xì)胞。結(jié)論組織塊培養(yǎng)法是一種簡便、可行的培養(yǎng)方法，能夠?yàn)槌衫w維細(xì)胞的相關(guān)研究提供穩(wěn)定可靠的種子細(xì)胞來源。2鈦合金材料表面規(guī)則微形態(tài)對體外兔成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究目的通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，評價不同表面微形態(tài)鈦合金對兔腱膜成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為及軟組織整合的影響。方法在鈦金屬試片上制備4種表面微觀形態(tài)光滑（SMOOTH）噴砂（SBLAST），微溝嵴（MICROGROOVE）和螺紋（THREAD）。進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，比較4種表面形態(tài)對成纖維細(xì)胞增殖和貼附的影響通過MTT比色法、掃描電鏡等技術(shù)，觀察細(xì)胞在不同微形態(tài)鈦合金表面的增殖和貼附狀況。結(jié)果腱膜成纖維細(xì)胞在光滑組、噴砂組、微溝嵴組、螺紋組表面增殖的光吸收值均數(shù)分布有規(guī)律，兩兩比較大都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P結(jié)論鈦合金的微形態(tài)表面處理比光滑表面更利于動物成纖維細(xì)胞的增殖和附著，噴砂表面細(xì)胞增殖最快但細(xì)胞貼附雜亂，而規(guī)則微溝嵴的表面細(xì)胞增殖較快且細(xì)胞貼附規(guī)律，更適合于軟組織生理功能的需求。

簡介：本課題中我們利用前期真核表達(dá)的具有生物活性的人ICOSIG融合蛋白和構(gòu)建的膜表達(dá)ICOS的CHO細(xì)胞株研究ICOS是否向樹突狀細(xì)胞傳遞逆向信號及該逆向信號是否可以引起DCS相應(yīng)功能的改變進(jìn)一步深入探討ICOSLICOS通路信號傳遞的本質(zhì)和內(nèi)在機(jī)制全面的了解ICOSICOSL配受體相互作用對機(jī)體免疫平衡調(diào)節(jié)的重要作用。研究內(nèi)容第一部分主要研究前期構(gòu)建的人ICOSIG與小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞體外特異性的結(jié)合、驗(yàn)證其生物學(xué)活性、研究可溶性ICOSIG蛋白本身對DCS的是否具有毒性作用為后續(xù)研究ICOSIG與DCS表面ICOSL結(jié)合傳遞逆向信號的可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第二部分主要研究ICOSIG結(jié)合小鼠骨髓體外誘導(dǎo)培養(yǎng)第5天不成熟DCS表面ICOSL后能否引起DCS相應(yīng)的功能變化。檢測指標(biāo)包括DCS表型分子的變化、DCS分泌細(xì)胞因子的變化、DCS吞噬功能改變、DCS抗原遞呈功能改變、DCS對同種異基因T細(xì)胞刺激增殖能力變化。另外還利用體外構(gòu)建的表達(dá)膜錨定ICOS的CHO細(xì)胞株模擬體內(nèi)細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用對可溶性ICOSIG蛋白的生物學(xué)功能進(jìn)行驗(yàn)證。第三部分由于研究發(fā)現(xiàn)針對共刺激分子另一家族成員PD1配體PDL2的抗體作用于成熟DCS可向DCS傳遞逆向信號誘導(dǎo)產(chǎn)生了一種兼俱較強(qiáng)抗原攝取和抗原遞呈功能并有成熟DCS表型的新的一類DCS細(xì)胞。我們也擬進(jìn)一步研究ICOSIG作用于成熟過程中和成熟后的DCS能否引起DCS的功能改變。第四部分由于體外研究缺少體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境因素相互作用的影響我們借鑒文獻(xiàn)建立皮膚過敏反應(yīng)的動物模型在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證體外觀察到的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象并進(jìn)行相關(guān)機(jī)制的探討。實(shí)驗(yàn)方法采用流式細(xì)胞儀檢測ICOSIG與其配體的特異性結(jié)合、實(shí)驗(yàn)處理后各DCS或T細(xì)胞表面分子的變化、胞內(nèi)細(xì)胞因子變化、DCS的吞噬功能等；采用ELISA和實(shí)時熒光定量RTPCR的方法檢測各種培養(yǎng)上清中和培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的多種細(xì)胞因子、趨化因子、表面分子的表達(dá)變化；采用ANNEXINVPI復(fù)染檢測不同因素處理后細(xì)胞凋亡的變化；采用CCK8檢測可溶性蛋白對DCS細(xì)胞的毒性和促增殖作用；采用3HTDR摻入檢測DCS細(xì)胞抗原遞呈功能和刺激異基因T細(xì)胞增殖能力；采用WESTERNBLOT方法檢測實(shí)驗(yàn)組表達(dá)P38總蛋白和磷酸化蛋白的表達(dá)情況；采用小鼠皮膚過敏反應(yīng)的模型體內(nèi)驗(yàn)證ICOSIG的生物學(xué)功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果第一部分研究結(jié)果表明體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的DCS表面有一定程度的ICOSL的表達(dá)且ICOSL的表達(dá)隨DCS細(xì)胞的成熟而逐漸下調(diào)。為了驗(yàn)證體外表達(dá)可溶性人ICOSIG與小鼠DCS特異性結(jié)合我們先將DCS用CD1632封閉然后與ICOSIG或人IGG共孵育再加入熒光標(biāo)記抗人IGG二抗可檢測到ICOSIG與DC的結(jié)合而對照IGG與DC無結(jié)合；為進(jìn)一步驗(yàn)證其結(jié)合的特異性我們用不同濃度的ICOSIG與PE標(biāo)記的抗鼠ICOSL抗體同時作用于DC結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗ICOSL抗體與DC結(jié)合受到不同程度的阻斷；如果先加入ICOSIG與DC共孵育則ICOSIG可完全阻斷抗鼠ICOSL抗體與DC的結(jié)合。同時借助于ANNEXINVPI染色和CCK8試劑盒我們也發(fā)現(xiàn)ICOSIG處理過程中DCS死亡或凋亡情況與對照組相比沒有明顯變化。同時人源ICOSIG可在體外抑制不同品系小鼠脾臟單個核細(xì)胞的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)更表明其具有生物學(xué)活性。第二部分我們首先用可溶性ICOS蛋白與骨髓單個核細(xì)胞來源DCS5天未成熟共孵育檢測培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IL2、IL4、IL6、IL10、IL12、TNFΑ、IFNΓ、TGFΒ1表達(dá)。其中IL2、IL4低于試劑盒檢測下限ICOSIG不改變DCS分泌IL10、IL12、TNFΑ、IFNΓ、TGFΒ1細(xì)胞因子的表達(dá)變化；而DCS表達(dá)IL6水平隨融合蛋白ICOSIG濃度的增加而明顯上調(diào)。定量RTPCR表明各實(shí)驗(yàn)組DCS表達(dá)TGFΒ1PGE2CCL3CCL4和CCL19無明顯差異但I(xiàn)COSIG處理組IL10有部分升高。與此同時流式細(xì)胞儀檢測表明ICOS處理組DCS表達(dá)共刺激分子CD83、CD80、CD86和IAB表達(dá)均比對照組有相應(yīng)的提高而ICOSL低于對照。進(jìn)一步定量RTPCR檢測ICOSLMRNA水平結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組和對照蛋白組ICOSL表達(dá)無明顯差異。第三部分研究表明PDL2的抗體可以向成熟DCS傳遞逆向信號而我們及其他研究者均發(fā)現(xiàn)DCS成熟過程當(dāng)中ICOSL的表達(dá)量逐漸下調(diào)。那么ICOS能否向成熟過程中和成熟后的DCS傳遞逆向信號調(diào)節(jié)DCS的功能狀態(tài)我們在ICOSIG處理DCS的同時加入100NGMLLPS或者是在加入100NGMLLPS處理24H誘導(dǎo)DCS成熟后再用ICOSIG處理DC24H。結(jié)果LPS單獨(dú)處理組DC分泌各種細(xì)胞細(xì)胞因子除IL2、IL4均比無LPS處理組明顯升高其表面分子的表達(dá)也明顯增加高于未刺激不成熟DCS。與對照組IGG相比ICOSIG加LPS處理組DCS分泌TGFΒ1的表達(dá)明顯高于對照組IL10、IL12P40、IL12P70、TNFΑ、IFNΓ等均無明顯差別。ICOSIGLPS組DC細(xì)胞各表面分子的表達(dá)也低于或類似于對照組。第四部分為了進(jìn)一步在體內(nèi)確證ICOSIG引起的DCS功能變化我們采用皮膚過敏實(shí)驗(yàn)研究ICOSIG作用后的DCS調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能的變化。用ICOSIG處理DCS再用P815AB多肽和5ΜM破傷風(fēng)毒素TETANUSTOXINTT多肽沖擊后經(jīng)尾靜脈輸入不同分組小鼠。2周后誘發(fā)過敏反應(yīng)。結(jié)果表明1無處理和對照IGG1蛋白處理不成熟DCS體外經(jīng)P815AB和TT刺激后能引起輕度足墊皮膚過敏反應(yīng)；而經(jīng)過ICOSIG處理后DCS能夠誘發(fā)出明顯的過敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)鼠左足重量明顯增加；2若ICOSIG處理DCS細(xì)胞前先用足量抗ICOSL抗體封閉則ICOSIG處理足墊過敏反應(yīng)程度顯著下調(diào)；3若在DCS與ICOSIG或IGG1孵育時加入抗IL6阻斷性抗體則ICOSIG處理也不能引起典型足墊過敏反應(yīng)。如在ICOSIG處理DCS的同時加入LPS刺激再進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)則各實(shí)驗(yàn)組DCS細(xì)胞均可誘發(fā)出明顯的過敏反應(yīng)但對照與實(shí)驗(yàn)組之間無明顯差異。抑制DCS中P38MAPK通路進(jìn)而抑制IL6的分泌后DCS誘導(dǎo)皮膚過敏反應(yīng)的能力下調(diào)。討論共刺激分子家族成員配受體之間存在正反向信號的現(xiàn)象比較普遍。我們在本課題中致力于研究ICOSICOSL通路是否同樣存在反向信號并對該信號的性質(zhì)作深入的探討。以往研究用計(jì)算機(jī)模擬的方式證明人和小鼠的ICOS結(jié)構(gòu)相似ICOS與配體ICOSL結(jié)合面關(guān)鍵氨基酸的序列也高度相似；我們的研究表明真核表達(dá)的人ICOSIG確實(shí)可以和小鼠DCS細(xì)胞表面ICOSL發(fā)生特異性結(jié)合并具有生物學(xué)活性。進(jìn)一步研究表明可溶性ICOSIG可以向不成熟DC傳遞逆向信號引起骨髓來源不成熟DCS特異性分泌IL6增加同時DCS表型分子CD83、CD80、CD86和IAB表達(dá)均高于相應(yīng)對照組。ICOS處理不成熟DCS后其吞噬和抗原遞呈功能均增強(qiáng)引起TH1細(xì)胞比例和功能增加可在體內(nèi)促進(jìn)DCS調(diào)節(jié)的細(xì)胞免疫。然而我們也發(fā)現(xiàn)如果在ICOSIG作用DCS過程中加入LPS或CPG誘導(dǎo)DCS成熟則DCS分泌TGFΒ1升高。由于LPS等因素刺激DCS成熟后DCS分泌大量的促炎細(xì)胞因子如IL6、IL12、TNFΑ、IL1Β等因此盡管ICOS可以引起TGFΒ1的部分增加但其抑制免疫反應(yīng)的功能作用有限在體外僅引起DCS部分功能的改變在體內(nèi)則不能檢測到明顯的功能差異。然而也存在另外一種可能因?yàn)镮COS僅在DCS成熟過程中促進(jìn)其表達(dá)TGFΒ1而我們是在使用LPS和ICOSIG作用完畢后收集細(xì)胞輸注小鼠體內(nèi)此時細(xì)胞已基本處于成熟狀態(tài)不同實(shí)驗(yàn)處理引起的DCS功能差異己接近消失在這種情況下皮膚過敏反應(yīng)的模型可能并不能夠真實(shí)反應(yīng)DCS功能的改變可能需要更好的模型來檢測相關(guān)的功能變化。通過本課題的研究我們首次證明和其他部分共刺激分子一樣ICOSICOSL通路也存在反向信號；然而不同的是隨著環(huán)境因素的不同ICOS可以通過同樣的配體ICOSL傳遞不同的免疫信號向不成熟DCS傳遞免疫刺激信號誘導(dǎo)IL6產(chǎn)生增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)；向成熟過程中的DCS傳遞免疫抑制信號誘導(dǎo)TGFΒ1表達(dá)調(diào)節(jié)成熟過程中DCS細(xì)胞的功能狀態(tài)。以往研究表明同一個配體可以通過不同受體傳遞不同信號如PD1通過其配體PDL1和PDL2可傳遞不同的信號；不同的配體也可以經(jīng)過同一個受體傳遞不同的信號如CCL19和CCL21結(jié)合CCR7、CD28CTLA4結(jié)合CD80CD86然而像ICOSICOSL這種同一個配體通過同一個受體傳遞不同信號的方式卻是首次證實(shí)這也更表明免疫系統(tǒng)、免疫細(xì)胞之間相互影響、相互調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性。因此ICOS可以通過DCS表面的ICOSL向不同成熟狀態(tài)的DCS傳遞不同的信號調(diào)節(jié)機(jī)體在不同狀態(tài)下的免疫應(yīng)答這為進(jìn)一步闡明ICOSICOSL通路在機(jī)體免疫調(diào)控中的作用以及針對該通路的靶向免疫治療提供了新的思路。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文肝癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測及其生物學(xué)特性姓名左國華申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師梁平20080501第三軍醫(yī)人學(xué)博十學(xué)何論文后，將微量肝癌HEPG2細(xì)胞與外周血單個核細(xì)胞懸液混勻，再通過免疫磁性細(xì)胞分離，行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，檢測免疫磁珠的特異性和敏感性，并計(jì)算癌細(xì)胞的回收率。2采集肝癌患者56例、肝炎和肝硬化患者19例、繼發(fā)性肝癌患者11例血樣，及18個健康志愿者的血樣作為陰性對照。用FICOLL密度梯度離心與免疫磁珠技術(shù)首先對患者的外周血進(jìn)行癌細(xì)胞的富集，然后運(yùn)用FITCCK標(biāo)記富集的癌細(xì)胞，免疫細(xì)胞熒光技術(shù)對循環(huán)腫瘤細(xì)胞行形態(tài)學(xué)分析，并用巢式RTPCR技術(shù)聯(lián)合檢測AFPMRNA和HTERTMRNA。3對8例富集分離出來的循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過測定生長曲線和細(xì)胞倍增時間評估細(xì)胞生長增殖能力，錨著獨(dú)立性試驗(yàn)了解克隆集落能力，掃描電鏡觀察細(xì)胞表面超微結(jié)構(gòu)，以及裸鼠移植及成瘤觀察等方法研究其細(xì)胞生物學(xué)特性。結(jié)果1包被HABL8的免疫磁珠能與HEPG2細(xì)胞敏感而特異地結(jié)合，當(dāng)單個核細(xì)胞與HEPG2細(xì)胞比為1106L時可檢測到癌細(xì)胞，結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)方法可檢出外周血單個核細(xì)胞中572％的微量癌細(xì)胞，無假陽性。2在用肝癌HEPG2細(xì)胞所做的2組預(yù)實(shí)驗(yàn)中，免疫磁珠聯(lián)用增強(qiáng)了巢式RTPCR的靈敏度、特異性，其靈敏度為5ML血中含有一個癌細(xì)胞。3在臨床樣品的實(shí)驗(yàn)中，免疫磁珠富集后，結(jié)合免疫細(xì)胞熒光方法觀察肝癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞，檢出陽性率為429％24／56，并與腫瘤的TNM分期有關(guān)；檢出細(xì)胞的形態(tài)可分為四類中等細(xì)胞型、大細(xì)胞型、有核細(xì)胞碎片和無核細(xì)胞碎片。4肝癌患者外周血中AFPMRNA及HTERTMRNA的檢出陽性率分別為554％、482％。AFPMRNA及HTERTMRNA的檢出率和TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移臨床參數(shù)密切相關(guān)。當(dāng)肝癌直徑大于5CM、多結(jié)節(jié)、伴門靜脈癌栓，AFPMRNA及HTERTMRNA的檢出率均明顯提高PO05。679％的肝癌患者至少表達(dá)一種標(biāo)志物，357％的患者兩種標(biāo)志物均陽性。AFPMRNA和HTERTMRNA的檢出呈『F相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0363P005。HTERTMRNA在AFPMRNA陽性和陰性的肝癌患者檢出率分別為645％、28％P005。AFPMRNA在肝炎和肝硬化患者中檢出率為211％HCCVS肝炎和肝硬化，PO05，繼發(fā)性肝癌患者及健康成人均未檢出；HTERTMRNA在繼發(fā)性肝癌患者中檢出率為636％，而肝炎和肝硬化及健康成人中均未檢出。58例標(biāo)本中，其中7例培養(yǎng)未成功，僅有1例出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞增生，異型性明顯，命名為HCC一27，共傳代培養(yǎng)5代。免疫細(xì)胞化學(xué)染色證實(shí)為肝癌細(xì)胞，HCC一27細(xì)胞的生長增殖及獨(dú)立錨著生長能力顯著低于HEPG2細(xì)胞PO05。兩只裸鼠經(jīng)脾內(nèi)接種培養(yǎng)腫瘤的細(xì)胞，其中一只裸鼠出現(xiàn)肝內(nèi)移植瘤生長。結(jié)論1成功利用碳二亞胺耦聯(lián)法制備了一種抗人肝細(xì)胞癌免疫磁性微珠，制

簡介：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文人胰腺癌細(xì)胞系中SP細(xì)胞的分選及生物學(xué)表型研究姓名楊塔娜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師張偉黃常志20090501北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文英文摘要ABSTRACTOBJECTIVETOISOLATESIDEPOPULATIONSPCELLSFROMHUMANPANCREATICCARCINOMACELLLINESWL990ANDTOSTUDYTHEBIOLOGICALPHENOTYPECHARACTERISTICSOFTHECELLPOPULATIONMETHODSFLUORESCENCEACTIVATEDCELLSORTINGWASUSEDTOISOLATEANDCOLLECTSPCELLSFROMSWL990CELLLINE；DRUGCHEMOSENSITIVITYOFSPANDNONSPCELLSWASMEASUREDBYATPTUMORCHEMOSENSITIVITYASSAYATETCA；THECLONEFORMATIONRATEOFSPANDNONSPCELLSWASEVALUATEDBYLIMITEDDILUTIONMETHOD；THEINVASIVCNESSANDMIGRATIONEFFICIENCYOFSPANDNONSPCELLSWASASSESSEDBYTRANSWELLCHAMBERS；THECELLCYCLEANDCELLDIFFERENTIATIONWASANALYZEDBYFLOWCYTOMETRY；THETUMORIGENICITYOFTWOCELLSUBPOPULATIONSWASFINISHEDBYINOCULATIONINNOD／SCIDMICE；TOIDENTIFYWHETHERVERAPAMILCOULDREVERSECHEMORESISTANCEAMONGDIFFERENTDRUGSRESUL月STHEREARE392PERCENTOFSPCELLSINSWL990CELLLINEATPTCAINDICATEDTHATSPCELLSWEREMORERESISTANCETOCHEMOTHERAPEUTICDRUGSTHANNONSPCELLS儼O05；THECLONEFORMATIONEFFICIENCYOFSPCELLSWASSTRONGERTHANNONSPCELLS，1979％2812％AND625％1041％P004，RESPECTIVELY；THESIMILARCONCLUSIONWASDRAWNININVASIVENESSANDMIGRATIONASSAYP005；THEPERCENTAGEOFG0／G1PHASECELLSIS6341114％INSPCELLS，AND5846_088％INNONSPCELLSPO05；THECELLDIFFERENTIATIONSTUDYSHOWEDTHATSPANDNONSPCELLSCONTAIN102_004％AND006002％SPCELLS儼O05；THETUMORFORMATIONRATEOFSPANDNONSPCELLSINVIVOIS6667％AND1111％CONCLUSIONSPCELLSEXISTEDINHUMANPANCREATICCARCINOMACELLLINESWL990ISANENRICHEDSOURCEOFPANCREATICTUMORINITIATINGCELLSWITHSTEMCELLPROPERTIESVERAPAMILCANREVERSETHEDRUGRESISTANCEOFTHETWOCELLPOPULATIONS，ESPECIALLYINSPCELLSKEYWORDSSTEMCELLS，TUMORSTEMCELLS，SIDEPOPULATIONCELLS，F(xiàn)LUORESCENCEACTIVATEDCELLSORTING6

簡介：生物學(xué)活性測定在重組藥物的研究開發(fā)和質(zhì)量控制中至關(guān)重要。目前的生物活性分析方法主要包括體內(nèi)法（動物實(shí)驗(yàn)）和體外法（細(xì)胞與組織實(shí)驗(yàn)）?；诩?xì)胞的分析方法由于其具有操作簡便，周期短，特異性好，變異度小等優(yōu)點(diǎn)得到廣泛應(yīng)用。但許多重組藥物由于藥物作用的組織器官特異性，往往難以獲得適用于活性測定的穩(wěn)定的高反應(yīng)性細(xì)胞株，而通過人工改造的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞可以解決這一難題。本研究的目的是構(gòu)建活性測定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞技術(shù)平臺并應(yīng)用于重組藥物的生物學(xué)活性測定方法研究，以解決特定重組藥物的測活難題。本研究內(nèi)容共分為三部分，分別根據(jù)特定藥物的具體作用機(jī)制采用了不同的策略構(gòu)建活性測定用轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株。第一部分，導(dǎo)入天然受體的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞活性測定方法的建立和應(yīng)用。腦利鈉肽與其天然受體鳥苷酸環(huán)化酶A（GCA）結(jié)合后，可激活其胞內(nèi)區(qū)的鳥苷酸環(huán)化酶活性，催化GTP轉(zhuǎn)化為CGMP。構(gòu)建GCA超表達(dá)的293GCAC3單克隆細(xì)胞株，通過檢測CGMP含量的來測定重組人腦利鈉肽的生物學(xué)活性。結(jié)果表明，該方法較傳統(tǒng)的兔主動脈條法操作簡便，周期短，變異小，可以作為一種有效的替代方法用于重組人腦利鈉肽的生物活性分析。第二部分，同時導(dǎo)入天然受體和報告基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞活性測定方法的建立與應(yīng)用。BYETALOG與GLP1受體結(jié)合后，可提高細(xì)胞內(nèi)CAMP水平，最終激活CAMP反應(yīng)元件（CRE），增強(qiáng)下游基因的表達(dá)。構(gòu)建GLP1受體和CRE報告基因共轉(zhuǎn)染的CHOGLP1RCREC14單克隆細(xì)胞株，通過檢測報告基因的表達(dá)來測定BYETALOG的生物學(xué)活性。結(jié)果表明，該方法操作簡便快速，變異度小，適用于BYETALOG的生物學(xué)活性測定。第三部分，同時導(dǎo)入融合受體和報告基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞活性測定方法研究。構(gòu)建VEGFR胞外區(qū)和IFNAR12胞內(nèi)區(qū)的融合受體，與IFN反應(yīng)元件（ISRE）報告基因共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，VEGF與胞外區(qū)的VEGFR結(jié)合后激活胞內(nèi)的IFN信號通路，引起ISRE報告基因高表達(dá)，可以通過檢測VEGF單抗對報告基因表達(dá)的抑制作用來測定其活性。成功構(gòu)建了融合受體和ISRE報告基因，并經(jīng)過瞬時轉(zhuǎn)染及檢測，RHVEGF121刺激后可以引起ISRE報告基因表達(dá)的增強(qiáng)，且具有劑量依賴效應(yīng)。通過本課題的研究，我們初步形成了構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細(xì)胞活性測定方法的研究策略和技術(shù)路線，并成功構(gòu)建了兩個轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株，建立了相應(yīng)的檢測方法。本課題研究成果為建立活性測定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞技術(shù)平臺打下了良好基礎(chǔ)。

簡介：分類號R758密級單位代碼10114學(xué)號200930570不同條件下銀屑病患者表皮千細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性的初步研究研究生奎欣指導(dǎo)教師郄瑞副教援合作指導(dǎo)教師毖玨明熬援申請學(xué)位門類級別醫(yī)堂亟±抖堂堂僮2專業(yè)名稱麈魃痘皇眭痘堂研究方向廑叢塵堡堂友囪所在學(xué)院山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院2012年3月18閂山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要??????????????????????????????????．．1英文摘要??????????????????????????????????II縮略詞表??????????????????????????????????IV前言?????????????????????????????????????????????．．1日U舌?????????????????????????????????????????????．．1正文第一章材料與方法????????????????????????????21．1標(biāo)本來源???????????????????????????????21．2主要試劑???????????????????????????????21．3主要儀器設(shè)備?????????????????????????????31．4實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????????????31．4．1主要試劑配制??????????????????????????31．4．2ESCS的體外分離、篩選、培養(yǎng)、鑒定及生長曲線的繪制???????．．41．5統(tǒng)計(jì)處理??????????????????????????????一6『F文第二章實(shí)驗(yàn)結(jié)果?????????????????????????????72．1ESCS分離、篩選、培養(yǎng)????????????????????????．72．1．1不同消化條件分離真表皮效率比較?????????????????72．1．2胰酶消化制備單細(xì)胞懸液?????????????????????72．1．3銀屑病ESCS純化????????????????????????82．1．4ESCS培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察????????????????????一82．2ESCS表面標(biāo)記物檢測?????????????????????????．92．2．1免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果????????????????????92．2．2流式細(xì)胞儀檢測CD29整合素131、P63、CD71結(jié)果?????????92．3細(xì)胞生長曲線的繪制??????????????????????????9正文第三章討論?????????????????????????????．10正文第四章結(jié)論?????????????????????????????．13正文參考文獻(xiàn)????????????????????????????????14『F文附圖??????????????????????????????????16綜J簽?????????????????????????????????????????????20參考文獻(xiàn)??????????????????????????????????25個人簡歷??????????????????????????????????27致謝?????????????????????????????????????????????28

簡介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名手寫礴磊簽字日期2。／Z。6月／1日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名手寫磅免鋤簽名矧∥夕夕簽字日期勱IZ易月『『日簽字日期掃／許6月『F日摘要摘要目的構(gòu)建能特異性抑制SHI一1細(xì)胞株趨化因子受體CXCR4CXCCHEMOKINERECEPTORTYPE4基因表達(dá)的慢病毒SIRNA載體，轉(zhuǎn)染至SHI一1細(xì)胞中，降氐CXCR4基因的表達(dá)，建立白血病細(xì)胞株SHI一1細(xì)胞與急性白血病骨髓基質(zhì)細(xì)胞BONEMARROWSTROMALCELLS，BMSCS體外共培養(yǎng)模型，觀察干擾CXCR4表達(dá)后對SHIL細(xì)胞體外增殖、黏附、侵襲能力的影響，并通過體內(nèi)裸鼠皮下成瘤模型，進(jìn)一步明確CXCR4與急性白血病臨床發(fā)生、發(fā)展和髓外浸潤問的關(guān)系。方法1、參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)針對CXCR4的RNAI靶點(diǎn)序列，合成靶序列的OLIGODNA，退火形成雙鏈DNA，與經(jīng)AGEI／BAMH膊切后的GV248EGFP載體連接產(chǎn)生RNA慢病毒載體GV248LV，PCR鑒定陽性克隆并測序，將測序『F確的GV248一LV、PHELPER10雨1PHELPER2O質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體2000將共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得重組慢病毒，用逐孔稀釋法測定病毒滴度。同理針對CXCR4陰性干擾序列，構(gòu)建陰性病毒，測定病毒滴度。2、分SHI一1細(xì)胞為SHI一1／CXCR4組、SHI1／NC組和SHI一1組共3組，其中SHI1／CXCR4組為SHI一1細(xì)胞轉(zhuǎn)染特異性干擾CXCR4基因表達(dá)的慢病毒干擾載體，SHI一1／NC組為轉(zhuǎn)染含無關(guān)序列片段的慢病毒載體，SHI1組不做任何處理，培養(yǎng)后，通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)FCM觀察各組SHI一1細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒載體后的GFP熒光率，MTT法檢測3組細(xì)胞體外增殖能力的變化，通過半定量RTPCR、實(shí)時熒光定量PCRQPCR、流式細(xì)胞術(shù)檢NJCXCR4表達(dá)的改變。成功干擾SHI一1細(xì)胞CXCR4表達(dá)后，通過實(shí)時定量PCR檢測SHI1細(xì)胞中MMP一2、MMP一9MRNA的表達(dá)。3、體外培養(yǎng)急性非淋巴細(xì)胞白血病患者BMSCS，分別與3組細(xì)胞共培養(yǎng)24H，檢測3組細(xì)胞與BMSCS細(xì)胞之間黏附能力改變。4、按110比例將BMSCS與三組SHI一1細(xì)胞接種于鋪有MATRIGEL基質(zhì)膠的MILLICELLD、室中，建立SHI一1細(xì)胞跨MATRIGEL侵襲模型，共培養(yǎng)24H后，觀察表達(dá)不同程度CXCR4的SHI一1細(xì)胞侵襲能力的改變。