簡(jiǎn)介：第九章微生物在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用,本章主要內(nèi)容第一節(jié)碳素生物循環(huán)第二節(jié)氮素生物循環(huán)第三節(jié)物質(zhì)循環(huán)與土壤肥力,第一節(jié)碳素生物循環(huán),一有機(jī)物質(zhì)的合成（CO2作為光合作用的原料）,二有機(jī)物質(zhì)的分解,,含碳有機(jī)物,,碳素循環(huán),第二節(jié)氮素生物循環(huán),本節(jié)主要內(nèi)容一氮素循環(huán)二生物體有機(jī)氮的分解氨化作用三無(wú)機(jī)氮之間的轉(zhuǎn)化,一氮素循環(huán),自然界中除植物利用無(wú)機(jī)氮轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)氮外，其它各轉(zhuǎn)變過(guò)程均由微生物作用。,氨化作用硝化作用反硝化作用生物固氮作用,二生物體有機(jī)氮的分解－－氨化作用,氨化作用含氮有機(jī)物通過(guò)微生物的分解轉(zhuǎn)化成氨的作用。,含氮有機(jī)物蛋白質(zhì)、氨基酸尿素、尿酸幾丁質(zhì),氨化微生物分解含氮有機(jī)物產(chǎn)氨能力強(qiáng)的微生物。,（一）蛋白質(zhì)的氨化（二）尿素和尿酸的氨化（三）幾丁質(zhì)的氨化,（一）蛋白質(zhì)的氨化,微生物作用,1蛋白質(zhì)初步水解成氨基酸,2氨基酸脫氨基產(chǎn)生氨,水解脫氨氧化脫氨還原脫氨,（1）水解脫氨（產(chǎn)生氨、羥基酸、醇）,（2）氧化脫氨基（產(chǎn)生氨、脂肪酸或酮酸）,（3）還原脫氨基（產(chǎn)生氨、脂肪酸）,3氨化蛋白質(zhì)的微生物,細(xì)菌枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、大腸桿菌、熒光假單胞菌、腐敗梭菌。好氣、厭氣、兼厭氣真菌毛霉、曲霉、根霉、青霉、交鏈孢霉放線菌土壤分離的有15％～17％產(chǎn)蛋白酶。好熱放線菌在堆肥的高溫階段分解蛋白起重要作用,（二）尿素和尿酸的氨化,兩者是人畜主要排泄成分。尿酸水解成尿素。,1尿素的利用,植物直接吸收作為氮肥（少量）被尿素細(xì)菌、脲酶分解（大量）,2尿素的水解,,2NH3CO2H2O,無(wú)能量產(chǎn)生。,3水解尿素的細(xì)菌,含有脲酶的細(xì)菌水解尿素產(chǎn)氨,種類(lèi)尿芽孢八疊球菌、巴氏尿素芽孢桿菌、尿小球菌。,分布土壤、廄肥、污水,特性好氣、兼厭氣中溫強(qiáng)堿環(huán)境,（三）幾丁質(zhì)的氨化,動(dòng)物甲殼、真菌細(xì)胞壁含有。,1分解幾丁質(zhì)的微生物需含有幾丁質(zhì)酶。細(xì)菌嗜幾丁質(zhì)桿菌。幾丁質(zhì)色桿菌放線菌鏈霉菌、諾卡氏菌,2幾丁質(zhì)的氨化分解,NH3C6H12O6,三無(wú)機(jī)氮間的轉(zhuǎn)化,（一）硝化作用（NITRIFICATION）（二）反硝化作用（DENITRIFICATION）（三）生物固氮作用BIOLOGICALNITROGENFIXATION,,（一）硝化作用（NITRIFICATION）,概念在有氧氣時(shí)，微生物將氨氧化為硝酸的作用。,1參加硝化作用的微生物2硝化作用的過(guò)程3硝化細(xì)菌的特性4硝化作用的農(nóng)業(yè)和環(huán)境意義,,1參加硝化作用的微生物,兩類(lèi)細(xì)菌相伴而生，作用相連。,2硝化作用的過(guò)程,（1）亞硝酸形成階段,亞硝酸細(xì)菌亞硝酸單胞菌屬、亞硝酸球菌屬亞硝酸螺菌屬、亞硝酸葉菌屬,（2）硝酸形成階段,硝酸細(xì)菌硝酸桿菌屬、硝酸刺菌屬、硝酸球菌屬,HNO2毒性很強(qiáng)，累積起來(lái)對(duì)植物有毒害。HNO3是植物吸收利用的有效氮素養(yǎng)料。,3硝化細(xì)菌的特性,嚴(yán)格好氣喜中溫生長(zhǎng)農(nóng)業(yè)土壤主要是化能自養(yǎng)型酸性森林土壤可能是化能異養(yǎng)型。,農(nóng)田墑情好，通氣好，溫度適中，利于硝化作用的進(jìn)行。,4硝化作用的農(nóng)業(yè)和環(huán)境意義,有利方面（1）利于植物吸收，提高產(chǎn)量。（易溶于水，不被土粒吸附）（2）促進(jìn)難溶性磷酸鹽溶解,,不利方面（1）易隨水流失，造成浪費(fèi)和環(huán)境污染。硝態(tài)氮肥料利用率在低于40％。流失的硝酸鹽導(dǎo)致湖泊和近海的富營(yíng)養(yǎng)化。（2）影響人類(lèi)健康植物累積NO3N，青儲(chǔ)植物被反硝化細(xì)菌還原成NO2N，在窯中積累，人吸入致死。,克服措施（1）深施硝態(tài)氮肥料。（2）集中施N素化肥。（3）加施N肥增效劑。,（二）反硝化作用（DENITRIFICATION）,概念硝酸鹽在通氣不良環(huán)境中（無(wú)氧），被反硝化細(xì)菌還原成NO2或N2的過(guò)程。,1反硝化過(guò)程2反硝化作用的微生物3影響反硝化作用的環(huán)境因素4反硝化作用對(duì)農(nóng)業(yè)和生態(tài)的影響,,1反硝化過(guò)程,反硝化細(xì)菌,2反硝化作用的微生物,反硝化細(xì)菌進(jìn)行反硝化作用的微生物。50多屬。,反硝化細(xì)菌的部分屬群,3影響反硝化作用的環(huán)境因素,（1）土壤通氣狀況。無(wú)氧情況發(fā)生反硝化作用。（2）有機(jī)質(zhì)的影響有機(jī)質(zhì)肥料刺激反硝化作用發(fā)生。原因可溶性有機(jī)質(zhì)刺激反硝化菌生長(zhǎng)。（3）NO3存在。（4）土壤含水量。含水多或局部排水不良，反硝化作用易發(fā)生。（5）土壤PH值PH60～微堿性,4反硝化作用對(duì)農(nóng)業(yè)和生態(tài)的影響,（1）造成土壤和化肥氮素?fù)p失的重要原因。向土壤中施用硝化抑制劑可阻止反硝化作用。（2）破壞大氣層中的臭氧層。,,O3阻擋紫外線，可防止對(duì)生物的傷害。,（三）生物固氮作用BIOLOGICALNITROGENFIXATION,概念微生物還原空氣中的氮?dú)猓∟2為氨的過(guò)程,1生物固氮在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的意義2固氮微生物3生物固氮作用的機(jī)理,,1生物固氮在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的意義,（1）常溫、常壓，不消耗能源（與工業(yè)固氮比）（2）提高土壤的氮素養(yǎng)料全球每年生物固定的N2達(dá)17500萬(wàn)噸。其中耕地土約4400萬(wàn)噸，超過(guò)每年施入土壤4000萬(wàn)噸的氮肥量（3）不污染環(huán)境（4）保證了生態(tài)平衡,2固氮微生物,§固氮微生物都是原核微生物。能在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)58個(gè)屬。§自生固氮微生物§共生固氮微生物§聯(lián)合固氮微生物,自生固氮微生物微生物單獨(dú)生活固氮。,農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中重要的有,固氮菌屬的圓褐固氮菌（ACHROOCOCUM）固氮效率10～15MGN/G糖。氮素不向外分泌存于胞內(nèi)。,圓褐固氮菌圖,固氮梭菌屬的巴氏梭菌（CPASTEURIANUM）是最先發(fā)現(xiàn)的自生固氮細(xì)菌（WINOGRADSKY,1893固氮效率6～8MGN/G糖。固氮產(chǎn)物向胞外分泌?？稍龆嗟咎锏?。固氮藍(lán)細(xì)菌,自生固氮微生物,共生固氮微生物微生物和植物形成共生體共生固氮。單獨(dú)生活不固氮。,根瘤菌和豆科植物共生固氮弗蘭克氏菌和非豆科木本植物共生固氮。紅萍和魚(yú)腥藻共生固氮。,聯(lián)合固氮微生物有些自生固氮微生物在特定的植物根際環(huán)境中發(fā)展比非根際土壤中旺盛，固氮微生物利用該處的能源生活。被稱(chēng)為聯(lián)合固氮。,◎雀稗雀稗固氮菌（最先發(fā)現(xiàn)）◎甘蔗貝氏固氮菌◎玉米、小麥固氮?jiǎng)偮菥蚬茸蛹賳伟?3生物固氮作用的機(jī)理,（1）固氮反應(yīng),每還原1分子N2需8個(gè)H,N2具三鍵，打開(kāi)需很高的能量（16ATP）。固氮酶催化下反應(yīng)。,（2）固氮酶,各種固氮微生物的固氮酶性質(zhì)基本相同。,固氮酶的兩個(gè)組分,鉬鐵蛋白,鐵蛋白,催化N2的轉(zhuǎn)變,,傳遞電子,由4個(gè)亞單位組成,由2個(gè)亞單位組成,固氮酶的特性①對(duì)氧氣敏感，遇氧失活②可互補(bǔ)③共同存在，結(jié)合起來(lái)固氮。④還原底物多樣化,,,①需ATP、電子供體、電子載體§電子供體H2§電子載體◎鐵氧還蛋白（FD）◎黃素蛋白（FLD）,（3）催化反應(yīng)的基本條件,②具有防氧保護(hù)機(jī)制固氮酶對(duì)氧敏感。固氮反應(yīng)在氧壓小于004％大氣壓或無(wú)氧環(huán)境進(jìn)行。原因◆氧氣可氧化固氮作用中的電子載體；◆氧氣抑制固氮酶的活性，阻遏固氮基因表達(dá)。,氨效應(yīng)環(huán)境中的氨或固氮酶固定的氨如果不及時(shí)轉(zhuǎn)化，超過(guò)一定濃度（3～5MG分子）對(duì)固氮作用起抑制效應(yīng)，阻遏固氮基因的表達(dá)。,③防止氨效應(yīng)的發(fā)生,如自生固氮細(xì)菌,GS－谷氨酰胺合成酶；GOGAT－谷氨酸合成酶,④分子態(tài)N2存在⑤MG2存在ATP與MG2結(jié)合為MG－ATP，向固氮酶提供能量。,（4）固氮作用的機(jī)理,生物固氮作用示意圖,第三節(jié)物質(zhì)循環(huán)和土壤肥力,本節(jié)主要內(nèi)容一有機(jī)質(zhì)的C/N率對(duì)植物有效養(yǎng)分的影響二土壤因素對(duì)固氮作用的影響,一有機(jī)質(zhì)的C/N率對(duì)植物有效養(yǎng)分的影響,微生物是土壤的組成部分。微生物參與土壤物質(zhì)循環(huán)形成土壤肥力。微生物分解土壤中的動(dòng)植物殘?bào)w。微生物推動(dòng)土壤物質(zhì)循環(huán)形成新的有機(jī)質(zhì)。,土壤有機(jī)質(zhì)的C/N率影響有機(jī)質(zhì)分解的速率，也影響土壤中有效氮的含量。微生物分解有機(jī)質(zhì)大量形成細(xì)胞物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖。有機(jī)質(zhì)中的碳以CO2形式釋放。微生物分解有機(jī)物需要吸收無(wú)機(jī)養(yǎng)料。N、P、S等元素在內(nèi)循環(huán)中不斷改變存在狀態(tài)，影響植物吸收養(yǎng)分的有效性。,1微生物個(gè)體的C/N比率2代表性植物有機(jī)體的C/N比率3有機(jī)質(zhì)中氮、碳的轉(zhuǎn)化4有機(jī)質(zhì)分解中的C/N比值與土壤肥力的關(guān)系5對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的指導(dǎo)應(yīng)用,1微生物個(gè)體的C/N比率細(xì)菌細(xì)胞的C/N比率平均為5/1。細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中，需從外界吸收利用有機(jī)質(zhì)的C/N比率大致為25/1。,2代表性植物有機(jī)體的C/N比率豆科植物C/N一般小于251，甚至只有151豆類(lèi)綠肥C/N＝201禾本科植物C/N為50/1100/1,3有機(jī)質(zhì)中氮、碳的轉(zhuǎn)化（1）氮的轉(zhuǎn)化含氮有機(jī)物的礦化（產(chǎn)生無(wú)機(jī)氮）微生物細(xì)胞含氮有機(jī)物的合成微生物細(xì)胞含氮有機(jī)物的繼續(xù)礦化氮的轉(zhuǎn)化納入微生物生物量的內(nèi)循環(huán)。,,（2）碳的轉(zhuǎn)化納入微生物生物量的內(nèi)循環(huán)，循環(huán)過(guò)程中大量的碳以CO2的形式釋放到大氣中。,（3）C/N從大于25/1逐漸轉(zhuǎn)化為等于甚至小于25/1碳以CO2形式不斷釋放，氮只存在形態(tài)上的變化（無(wú)機(jī)氮與有機(jī)氮轉(zhuǎn)化）,4有機(jī)質(zhì)分解中的C/N比值與土壤肥力的關(guān)系（1）C/N＝251，N全部進(jìn)行微生物合成作用，暫不向土壤釋放N。（2）C/N小于251，N除能滿(mǎn)足微生物合成作用外，富余氮素釋放到土壤中供植物吸收。（3）C/N大于251，N素不足，限制了微生物的生長(zhǎng)繁殖，從土壤中奪取有效氮，與植物爭(zhēng)氮。,有機(jī)物質(zhì)分解中的碳氮關(guān)系圖解,5對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的指導(dǎo)應(yīng)用（1）C/N比值很大的稻草、麥稈不能直接、單獨(dú)施用于正在生長(zhǎng)的田地。原因很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，會(huì)引起作物的缺氮現(xiàn)象。正確施用先堆積腐漚，降低其C/N值，后施用。（2）堆漚制肥時(shí)，加入一些含氮量高的人畜糞尿，加速腐爛分解的速度。（3）根據(jù)有機(jī)肥料的腐熟度（C/N問(wèn)題）決定施肥和耕翻時(shí)期、深度和方式。,二土壤因素對(duì)固氮作用的影響,土壤C/N率對(duì)固氮作用的影響土壤中必需有大量C/N率大的可給態(tài)有機(jī)物存在，才能固氮。原因土壤中化合態(tài)氮豐富，固氮微生物利用現(xiàn)成的氮化物，抑制固氮作用；而非固氮微生物大量生長(zhǎng)繁殖，與固氮微生物競(jìng)爭(zhēng)碳源和能源。土壤C/N降至70～40/1時(shí)，固氮作用迅速停止。,復(fù)習(xí)思考題,1氨化作用、硝化作用、反硝化作用、生物固氮作用、氨效應(yīng)的概念。2硝化作用和反硝化作用發(fā)生的條件有哪些說(shuō)說(shuō)這兩個(gè)作用對(duì)農(nóng)業(yè)和環(huán)境生態(tài)的意義。3生物固氮在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的意義。4固氮酶兩個(gè)組分的作用分別是什么固氮酶的特性有哪些5固氮酶催化反應(yīng)發(fā)生的條件有哪些6微生物有哪幾種固氮體系各舉一例。7試分析有機(jī)質(zhì)分解中的C/N比值與土壤肥力的關(guān)系。如何用來(lái)指導(dǎo)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)8土壤C/N比值的高低對(duì)固氮作用有什么影響,

簡(jiǎn)介：第六節(jié)研究DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法,又叫做DNA遷移率變動(dòng)試驗(yàn)，是80年代初出現(xiàn)的用于在體外研究DNA與蛋白質(zhì)相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術(shù)。簡(jiǎn)單、快捷，是當(dāng)前被選作分離純化特定DNA結(jié)合蛋白質(zhì)的一種典型的實(shí)驗(yàn)方法。在凝膠電泳中，由于電場(chǎng)的作用，裸露的DNA朝正電極移動(dòng)的距離是同其分子量的對(duì)數(shù)成反比，如果DNA分子結(jié)合上一種蛋白質(zhì)，那么由于分子量加大，在凝膠中的遷移作用便會(huì)受到阻滯，朝正電極移動(dòng)的距離也就相在縮短了。所以當(dāng)特定的DNA片段同細(xì)胞提取物混合之后，若其在凝膠電泳中的移動(dòng)距離變小了，這就說(shuō)明它已同提取物中的某種特殊蛋白質(zhì)分子發(fā)生了結(jié)合作用。,261凝膠阻滯試驗(yàn)原理,返回目錄,返回第二章,凝膠阻滯試驗(yàn)方法,首先是用放射性同位素標(biāo)記待檢測(cè)的DNA片段（亦稱(chēng)探針DNA），然后同細(xì)胞蛋白質(zhì)提取物一道溫育，于是便有可能形成DNA一蛋白質(zhì)復(fù)合物。將它加樣到非變性的凝膠中，在控制使蛋白質(zhì)仍與DNA保持結(jié)合狀態(tài)的條件下進(jìn)行電泳分離，并應(yīng)用放射自顯影技術(shù)顯現(xiàn)具放射性標(biāo)記的DNA條帶位置。如果細(xì)胞層白質(zhì)提取物中不存在可同放射性標(biāo)記的探針DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)，那么所有放射性標(biāo)己都將集中出現(xiàn)在凝膠的底部；反之，將會(huì)形成DNA一蛋白質(zhì)復(fù)合物，由于凝膠阻滯的緣故，其特有的放射性標(biāo)記的探針DNA條帶就將滯后出現(xiàn)在較靠近凝膠頂部的位置。所以有的文獻(xiàn)中也稱(chēng)這種試驗(yàn)為條帶阻滯試驗(yàn)（BANDRETARDATIONASSAY）。,,凝膠阻滯試驗(yàn)用途,鑒定特殊細(xì)胞提取物中，是否存在可同放射性標(biāo)記的探針DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)分子（比如特異的轉(zhuǎn)錄因子等）研究發(fā)生此種結(jié)合作用之精確的DNA序列的特異性其辦法是在DNA一蛋白質(zhì)結(jié)合反應(yīng)體系中，加入超量的非標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)DNA。如果競(jìng)爭(zhēng)同一種蛋白，由于競(jìng)爭(zhēng)DNA與探針DNA相比是極大超量的，絕大部分蛋白質(zhì)都會(huì)被其競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合掉而使探針DNA處于自由狀態(tài)，自顯影圖片上不出現(xiàn)阻滯的條帶，相反，如果不競(jìng)爭(zhēng)同一蛋白，探針DNA仍與特定蛋白復(fù)合，呈現(xiàn)阻滯的條帶。使用競(jìng)爭(zhēng)DNA，可間接闡明體內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)的相互作用。如，使用一種具有與已知轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)DNA，就可以判斷檢測(cè)到的蛋白質(zhì)是否屬于此類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子，或是與之相關(guān)的其它轉(zhuǎn)錄因子；如果事先引入突變，可以檢測(cè)突變對(duì)其與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合作用的影響。,262DNASEL足跡試驗(yàn),盡管凝膠阻滯試驗(yàn)?zāi)軌蚪沂境鲈隗w內(nèi)發(fā)生的DNA蛋白質(zhì)之間相互作用的有關(guān)信息，然而它卻無(wú)法確定兩者結(jié)合的準(zhǔn)確部位。要解答這個(gè)問(wèn)題，則需要應(yīng)用DNASEL足跡試驗(yàn)（FOOTPRINTINGASSAY）。它是一類(lèi)用于檢測(cè)與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA序列的部位及特性的專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。,DNASEL足跡試驗(yàn)過(guò)程,首先是將待檢測(cè)的雙鏈DNA分子用32P作末端標(biāo)記，并用限制酶去掉其中的一個(gè)末端，得到只一條鏈單末端標(biāo)記的雙鏈DNA分子體外同細(xì)胞蛋白質(zhì)提取物混合。待二者結(jié)合之后，再加入少量的DNASEL（它可沿著靶DNA作隨機(jī)單鏈切割）消化DNA分子，并控制酶的用量使之達(dá)到平均每條鏈只發(fā)生一次磷酸二脂鍵的斷裂。如果蛋白質(zhì)提取物中不存在與DNA結(jié)合的特異蛋白質(zhì)，經(jīng)DNASEL消化之后便會(huì)產(chǎn)生出距放射性標(biāo)記末端1個(gè)核苷酸、2個(gè)核苷酸、3個(gè)核苷酸等一系列前后長(zhǎng)度均僅相差一個(gè)核苷酸的、不間斷的、連續(xù)的DNA片段梯度群體。,從此混合物中除去蛋白質(zhì)之后，將DNA片段群體加樣在變性的DNA測(cè)序凝膠中進(jìn)行電泳分離，經(jīng)放射自顯影，便可顯現(xiàn)出相應(yīng)于DNASEL切割產(chǎn)生的不同長(zhǎng)度DNA片段組成的序列梯度條帶。但是，如果有一種蛋白質(zhì)已經(jīng)結(jié)合到DNA分子的某一特定區(qū)段上，那么它就將保護(hù)這一區(qū)段的DNA免受DNASEL的消化作用，因而也就不可能產(chǎn)生出相應(yīng)長(zhǎng)度的切割條帶。所以在電泳凝膠的放射自顯影圖片上，相應(yīng)于蛋白質(zhì)結(jié)合的部位是沒(méi)有放射標(biāo)記條帶的，出現(xiàn)了一個(gè)空白的區(qū)域，人們形象地稱(chēng)之為“足跡”。,足跡試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn),可以形象地展示出一種特殊的蛋白質(zhì)因子同特定DNA片段之間的結(jié)合區(qū)域。如果使用較大的DNA片段，通過(guò)足跡試驗(yàn)便可確定其中不同的核苷酸序列與不同蛋白質(zhì)因子之間的結(jié)合位點(diǎn)的分布狀況。如同凝膠阻滯試驗(yàn)一樣，也可以加入非標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)DNA，來(lái)消除特定的足跡，據(jù)此確定其核酸序列的特異性。,DNASEL足跡試驗(yàn)發(fā)展,目前還出了若干種其它類(lèi)型的足跡試驗(yàn)。例如，自由羥基足跡試驗(yàn)及菲咯琳銅足跡試驗(yàn)等。其中最有趣的是硫酸二甲脂（DMS）足跡試驗(yàn)。它所依據(jù)的原理是，DMS能夠促進(jìn)DNA中裸露的G甲基化，而六氫吡啶又會(huì)對(duì)甲基化的G殘基作特異的化學(xué)切割。假如有一種蛋白質(zhì)同DNA分子中的某一區(qū)段結(jié)合，在它的保護(hù)下，區(qū)域內(nèi)的G免受六氫吡啶的切割，于是在DNA片段的序列梯中，便不存在具這些G殘基末端的DNA片段，故出現(xiàn)個(gè)空白區(qū)域，此即通常所說(shuō)的足跡。與其它足跡試驗(yàn)不同，由于DMS足跡試驗(yàn)中被切割的是G殘基，因此可用來(lái)鑒定同轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA區(qū)段中的特異堿基。,263甲基化干擾試驗(yàn),應(yīng)用甲基化干擾試驗(yàn)（METHVLATIONINTERFERENCEASSAY）技術(shù)，可以檢測(cè)靶DNA中特異G殘基的優(yōu)先甲基化對(duì)爾后的蛋白質(zhì)結(jié)合作用究竟會(huì)有什么效應(yīng)，從而更加詳細(xì)地揭示DNA與蛋白質(zhì)之間相互作用的模式。,甲基化干擾試驗(yàn)的具體操作,先用硫酸二甲脂（DMS）處理靶DNA，控制反應(yīng)條件，使平均每條DNA分子只有一個(gè)G甲基化，而后將這些局部甲基化的DNA群體同含有DNA結(jié)合蛋白的適當(dāng)?shù)募?xì)胞提取物一道溫育，并作凝膠阻滯試驗(yàn)。經(jīng)電泳分離之后，從凝膠中切取出具有結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA條帶和沒(méi)有結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA條帶，并用六氫吡啶處理之，于是甲基化的G殘基被切割，非甲基化的G殘基則不被切割。顯而易見(jiàn)，如果某個(gè)G因甲基化而不與蛋白質(zhì)結(jié)合，那么六氫吡啶對(duì)這個(gè)甲基化G殘基的切割作用，就只能在沒(méi)有同蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA分子上表現(xiàn)出來(lái)。相反地，如果一個(gè)特殊的G殘基在DNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合中不起作用，那么六氫吡啶對(duì)這個(gè)G殘基的切割作用，則在同蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA分子及不同蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA分子中均可觀察到（圖2－44）,甲基化干擾試驗(yàn)的用途,甲基化干擾試驗(yàn)不僅可以用來(lái)研究蛋白質(zhì)與G殘基之間的聯(lián)系，而且同樣也可以用來(lái)研究DNA結(jié)合蛋白質(zhì)與結(jié)合位點(diǎn)中的腺嘌呤A殘基之間的聯(lián)系作用。頭一個(gè)辦法是使所有的嘌呤殘基甲基化，以便同時(shí)研究甲基化的G和A殘基對(duì)蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的干擾效應(yīng)。第二種辦法是使用焦碳酸二乙脂（DEPC）特異性修飾A，而使之易受六氫吡啶的切割作用。對(duì)于研究諸如像具有相對(duì)少數(shù)G殘基的八聚體基序（例如OCT－1，OCT－2等，它們可與八聚體結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合）這樣的序列而言，這些甲基化干擾試驗(yàn)技術(shù)具有特別的價(jià)值，因?yàn)橹灰芯縂殘基的甲基化干擾，就可獲得有用的信息。,DMS化學(xué)干擾的主要局限性,它只能使G和A殘基甲基化，而不能使T和C殘基甲基化。盡管如此，它仍不愧為足跡試驗(yàn)的一種有效的補(bǔ)充手段，可以鑒定足跡區(qū)段中DNA與蛋白質(zhì)相互作用的精確位置。,264體內(nèi)足跡試驗(yàn),上面所討論的這三種方法有一個(gè)共同的不足之處，即它們都是在體外進(jìn)行的試驗(yàn)。因此人們自然會(huì)問(wèn)，這些結(jié)果能夠確切地反映活細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的DNA一蛋白質(zhì)相互作用的真實(shí)情況嗎為了解答這個(gè)問(wèn)題，科學(xué)工作者又設(shè)計(jì)出了一種體內(nèi)足跡試驗(yàn)體系。然而究其實(shí)質(zhì)而言，這種技術(shù)無(wú)非是體外DMS足跡試驗(yàn)的一個(gè)變種而已。,體內(nèi)足跡試驗(yàn)的方法,用有限數(shù)量的化學(xué)試劑DMS處理完整的游離細(xì)胞，并使其滲透到細(xì)胞內(nèi)的濃度恰好導(dǎo)致天然染色質(zhì)DNA中的G殘基發(fā)生甲多化。而后從這些細(xì)胞中提取DNA，并加入六氫吡啶作體外消化。結(jié)果情況就如同體外足跡試驗(yàn)一樣，能同某種特殊蛋白質(zhì)因子結(jié)合的DNA區(qū)段，其上的G殘基就不會(huì)被DMS甲基化，因而也就不會(huì)被六氫吡啶所切割。因此，同對(duì)照的體外裸露DNA所形成的序列梯比較，就會(huì)發(fā)現(xiàn)由完整的活細(xì)胞染色質(zhì)DNA形成的序列梯中，缺少了G殘基沒(méi)有被切割的相應(yīng)條帶（圖2－45）。,體內(nèi)足跡試驗(yàn)優(yōu)缺點(diǎn),顯而易見(jiàn)，與應(yīng)用克隆DNA片段所作的體外足跡試驗(yàn)的結(jié)果相比，經(jīng)體內(nèi)足跡試驗(yàn)從染色質(zhì)總DNA中所獲得的任何一種特異DNA的數(shù)量，都是微不足道的。因此，有必要通過(guò)PCR擴(kuò)增特異的靶DNA，以獲得足夠數(shù)量的DNA樣品。如今體內(nèi)足跡試驗(yàn)已發(fā)展成為研究在完整的活細(xì)胞內(nèi)，DNA一蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)及檢測(cè)結(jié)合位點(diǎn)中堿基突變效應(yīng)的一種極有效的手段。,應(yīng)用凝膠阻滯試驗(yàn)、DNASEL足跡試驗(yàn)、甲基化干擾試驗(yàn)，以及體內(nèi)足跡試驗(yàn)等多種用于研究DNA與蛋白質(zhì)相互作用的基本實(shí)驗(yàn)手段，將有助于深入地探討基因啟動(dòng)子元件的結(jié)構(gòu)與功能，及其與蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子之間相互作用的有關(guān)細(xì)節(jié)；揭示MRNA轉(zhuǎn)錄超始和終止的分子本質(zhì)與主要步驟；闡明在發(fā)育過(guò)程中基因表達(dá)調(diào)節(jié)的時(shí)空特異性；以及外源基因在轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá)的分子機(jī)理，等等。這些研究結(jié)果，將為我們提供大量重要的信息，以最終弄清基因表達(dá)調(diào)節(jié)的真實(shí)內(nèi)容。,思考題,1、研究DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法有哪些2、凝膠阻滯試驗(yàn)原理是什么3、用圖示的方法說(shuō)明DNASEL足跡試驗(yàn)的過(guò)程。4、甲基化干擾試驗(yàn)有什么用途5、什么是體內(nèi)足跡試驗(yàn),

簡(jiǎn)介：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士研究生入學(xué)考試河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士研究生入學(xué)考試分子生物學(xué)分子生物學(xué)考試大綱考試大綱一、考試大綱的性質(zhì)一、考試大綱的性質(zhì)分子生物學(xué)課程主要內(nèi)容以核酸的相關(guān)內(nèi)容為主線，包括核酸的結(jié)構(gòu)、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)翻譯的詳細(xì)機(jī)制，以及真核、原核基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制和研究進(jìn)展。因此在重點(diǎn)考察分子生物學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)同時(shí)，與其他學(xué)科的交叉、聯(lián)系也需要掌握。特編寫(xiě)此考試大綱作為參考，使考生更能把握考試的范圍和要求。二、考試內(nèi)容二、考試內(nèi)容1分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容、發(fā)展簡(jiǎn)史分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容、發(fā)展簡(jiǎn)史考試內(nèi)容考試內(nèi)容分子生物學(xué)概念分子生物學(xué)的發(fā)展歷程分子生物學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀和展望考試要求考試要求掌握廣義、狹義分子生物學(xué)的基本研究?jī)?nèi)容掌握分子生物學(xué)發(fā)展史中的重大歷史事件2DNA結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)和DNA復(fù)制復(fù)制考試內(nèi)容考試內(nèi)容DNA與染色體染色體真核細(xì)胞染色體的組成原核生物基因組特點(diǎn)真核生物基因組特點(diǎn)DNA復(fù)制的一般規(guī)律參與DNA復(fù)制的酶與蛋白質(zhì)（重點(diǎn)是原核生物的DNA聚合酶）DNA復(fù)制的一般過(guò)程真核生物與原核生物DNA復(fù)制的異同常見(jiàn)的無(wú)義、錯(cuò)義、移框突變的抑制突變的機(jī)制如何M5C突變熱點(diǎn)形成的原因掌握RNA聚合酶的作用機(jī)理理解原核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程掌握啟動(dòng)子的作用機(jī)理了解真核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程理解RNA轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程及其意義4蛋白質(zhì)的合成蛋白質(zhì)的合成考試內(nèi)容考試內(nèi)容蛋白質(zhì)合成的一般特征核糖體的活性位點(diǎn)及其功能模板、極性、遺傳密碼的特點(diǎn)參與蛋白質(zhì)合成的主要分子的種類(lèi)和功能蛋白質(zhì)合成的過(guò)程肽鏈的后加工過(guò)程真核生物與原核生物蛋白質(zhì)合成的區(qū)別分子伴侶的功能真核生物蛋白質(zhì)的不同轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制PROK和EUK體內(nèi)蛋白質(zhì)的越膜機(jī)制考試要求考試要求全面了解蛋白質(zhì)合成的過(guò)程熟練掌握蛋白質(zhì)合成中模板和遺傳密碼的特點(diǎn)掌握蛋白質(zhì)合成的一般特征掌握參與蛋白質(zhì)合成的主要分子的種類(lèi)和功能掌握蛋白質(zhì)合成的過(guò)程和肽鏈的后加工過(guò)程理解真核生物與原核生物蛋白質(zhì)合成的區(qū)別了解蛋白質(zhì)的加工成熟了解分子伴侶的功能5基因表達(dá)調(diào)控基因表達(dá)調(diào)控考試內(nèi)容考試內(nèi)容原核基因表達(dá)調(diào)控原核基因調(diào)控總論

簡(jiǎn)介：第一章第一章基因的結(jié)構(gòu)與功能基因的結(jié)構(gòu)與功能1關(guān)于基因的說(shuō)法錯(cuò)誤的是CA基因是貯存遺傳信息的單位B基因的一級(jí)結(jié)構(gòu)信息存在于堿基序列中C為蛋白質(zhì)編碼的結(jié)構(gòu)基因中不包含翻譯調(diào)控序列D基因的基本結(jié)構(gòu)單位是一磷酸核苷E基因中存在調(diào)控轉(zhuǎn)錄和翻譯的序列2基因是指EA有功能的DNA片段B有功能的RNA片段C蛋白質(zhì)的編碼序列及翻譯調(diào)控序列DRNA的編碼序列及轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列E以上都不對(duì)3結(jié)構(gòu)基因的編碼產(chǎn)物不包括CASNRNABHNRNAC啟動(dòng)子D轉(zhuǎn)錄因子E核酶4已知雙鏈DNA的結(jié)構(gòu)基因中，信息鏈的部分序列是5AGGCTGACC3，其編碼的RNA相應(yīng)序列是CA5AGGCTGACC3B5UCCGACUGG3C5AGGCUGACC3D5GGUCAGCCU3E5CCAGUCGGA35已知某MRNA的部分密碼子的編號(hào)如下A127128129130131132133GCGUAGCUCUAACGGUGAAGC以此MRNA為模板，經(jīng)翻譯生成多肽鏈含有的氨基酸數(shù)目為A127B128C129D130E1316真核生物基因的特點(diǎn)是DA編碼區(qū)連續(xù)B多順?lè)醋覴NAC內(nèi)含子不轉(zhuǎn)錄D斷裂基因E外顯子數(shù)目＝內(nèi)含子數(shù)目－17關(guān)于外顯子說(shuō)法正確的是EA外顯子的數(shù)量是描述基因結(jié)構(gòu)的重要特征B外顯子轉(zhuǎn)錄后的序列出現(xiàn)在HNRNA中C外顯子轉(zhuǎn)錄后的序列出現(xiàn)在成熟MRNAD外顯子的遺傳信息可以轉(zhuǎn)換為蛋白質(zhì)的序列信息E以上都對(duì)8斷裂基因的敘述正確的是BA結(jié)構(gòu)基因中的DNA序列是斷裂的B外顯子與內(nèi)含子的劃分不是絕對(duì)的C轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無(wú)需剪接加工D全部結(jié)構(gòu)基因序列均保留在成熟的MRNA分子中E原核和真核生物基因的共同結(jié)構(gòu)特點(diǎn)9原核生物的基因不包括AA內(nèi)含子B操縱子C啟動(dòng)子D起始密碼子E終止子10原核和真核生物的基因都具有EA操縱元件B順式作用元件C反式作用因子23I類(lèi)啟動(dòng)子調(diào)控的基因不包括AA5SRRNAB58SRRNAC18SRRNAD28SRRNA24若I類(lèi)啟動(dòng)子突變，哪種基因的轉(zhuǎn)錄不受影響AA16SRRNAB58SRRNAC18SRRNAD28SRRNAE以上都不對(duì)25I類(lèi)啟動(dòng)子突變可影響合成BA核糖體30S亞基B核糖體40S亞基C核糖體50S亞基D70S核糖體E以上都不對(duì)26不屬于真核生物啟動(dòng)子特點(diǎn)的是DA分為I、II、III類(lèi)B與之結(jié)合的RNA聚合酶不只一種C轉(zhuǎn)錄因子輔助啟動(dòng)子與RNA聚合酶相結(jié)合D5SRRNA編碼基因的轉(zhuǎn)錄由I類(lèi)啟動(dòng)子控制EII類(lèi)啟動(dòng)子可調(diào)控大部分SNRNA編碼基因的轉(zhuǎn)錄27原核生物的啟動(dòng)子BA根據(jù)所調(diào)控基因的不同分為I、II、III類(lèi)B與RNA聚合酶全酶中的Σ因子結(jié)合C不具有方向性D涉及轉(zhuǎn)錄因子－DNA的相互作用E涉及不同轉(zhuǎn)錄因子之間的相互作用28原核生物和真核生物啟動(dòng)子的共同特點(diǎn)是EA需要反式作用因子輔助作用B本身不被轉(zhuǎn)錄C與RNA聚合酶I、II、III相結(jié)合D轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)由RNA聚合酶的Σ因子辨認(rèn)E涉及DNA－蛋白質(zhì)的相互作用29真核生物與原核生物的啟動(dòng)子的顯著區(qū)別是CA具有方向性B啟動(dòng)子自身被轉(zhuǎn)錄C需要轉(zhuǎn)錄因子參與作用D位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游E與RNA聚合酶相互作用30真核生物的啟動(dòng)子不能控制哪個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄DASNRNABHNRNAC5SRRNAD16SRRNAEU6SNRNA31I類(lèi)啟動(dòng)子敘述錯(cuò)誤的是AA不能調(diào)控58SRRNA結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄B與RNA聚合酶I的親和力弱C與TFIA、IB、IC等相互作用D富含GCE包括核心元件和上游調(diào)控元件32啟動(dòng)子位于BA結(jié)構(gòu)基因BDNACMRNADRRNAETRNA33關(guān)于TATA盒敘述錯(cuò)誤的是CA看家基因不具有TATA盒結(jié)構(gòu)B是II類(lèi)啟動(dòng)子的組成部分

簡(jiǎn)介：生物化學(xué)生物化學(xué)和分子生物學(xué)分子生物學(xué)課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱課程名稱(chēng)稱(chēng)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)英文名稱(chēng)稱(chēng)EXPERIMENTTECHNOLOGYOFBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGY課程編號(hào)號(hào)實(shí)驗(yàn)課性質(zhì)質(zhì)必修課程負(fù)責(zé)人人崔行開(kāi)放實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目數(shù)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目數(shù)3一、學(xué)時(shí)、學(xué)分一、學(xué)時(shí)、學(xué)分課程總學(xué)時(shí)70課程總學(xué)分20二、適用專(zhuān)業(yè)及年級(jí)二、適用專(zhuān)業(yè)及年級(jí)本大綱適用于醫(yī)療、公共衛(wèi)生、口腔、護(hù)理、預(yù)防醫(yī)學(xué)七年制學(xué)生。三、實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的與基本要求三、實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的與基本要求掌握人體生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能。掌握各種生物物質(zhì)能量的正常代謝過(guò)程，代謝調(diào)節(jié)，代謝障礙和臨床疾病的關(guān)系。通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握基本的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及驗(yàn)證部分課堂理論知識(shí)。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，要求學(xué)生掌握電泳技術(shù)、層析技術(shù)、分光光度法、離心技術(shù)、蛋白質(zhì)及分子生物學(xué)等技術(shù)。掌握蛋白質(zhì)、核酸、酶類(lèi)的提取、測(cè)定，學(xué)習(xí)血液成分生化測(cè)定，以及部分生物化學(xué)理論知識(shí)的驗(yàn)證。掌握紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、高速離心機(jī)、PCR儀、層析系統(tǒng)、電泳儀系統(tǒng)、電熱恒溫水浴箱、凝膠掃描儀、電動(dòng)勻漿器等儀器的使用，了解其性能、適用范圍及注意事項(xiàng)。四、主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、高速離心機(jī)、PCR儀、層析系統(tǒng)、電熱恒溫水浴箱、凝膠掃描儀、電泳儀、電動(dòng)勻漿器等。五、實(shí)驗(yàn)課程內(nèi)容和學(xué)時(shí)分配五、實(shí)驗(yàn)課程內(nèi)容和學(xué)時(shí)分配序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)分配分配實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)屬性屬性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)類(lèi)型類(lèi)型每組每組人數(shù)人數(shù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)要求要求指導(dǎo)指導(dǎo)教師教師已開(kāi)已開(kāi)未開(kāi)11可見(jiàn)分光光度技術(shù)2蛋白質(zhì)含量測(cè)定1掌握朗伯比爾定律。2掌握比色定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。3熟悉可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用。5設(shè)計(jì)基礎(chǔ)2必做已開(kāi)2紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量掌握紫外分光光度計(jì)的使用方法2綜合基礎(chǔ)2必做已開(kāi)7PH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響本實(shí)驗(yàn)以磷酸苯二鈉為底物，在不同PH值的甘氨酸緩沖液條件下，測(cè)定堿性磷酸酶的活性，從而確定其最適PH值。2驗(yàn)證基礎(chǔ)2必做已開(kāi)8溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響本實(shí)驗(yàn)以堿性磷酸酶為例，在不同溫度下保溫一定時(shí)間，觀察酶活性的差別。2驗(yàn)證基礎(chǔ)2必做已開(kāi)9聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血LDH同工酶掌握電泳分離同工酶的方法并了解其原理，了解顯色原理，了解血清乳酸脫氫酶同工酶電泳分離的臨床意義。5綜合基礎(chǔ)2必做已開(kāi)10胰島素對(duì)血糖含量的影響及測(cè)定1熟悉激素對(duì)血糖含量的影響因素。2學(xué)習(xí)鄰甲苯法測(cè)定血糖的原理，了解測(cè)定血糖的方法。15綜合基礎(chǔ)2必做已開(kāi)11糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定1復(fù)習(xí)糖酵解的主要中間步驟及其產(chǎn)物，2了解一碘醋酸對(duì)3磷酸甘油醛脫氫酶的抑制作用。15驗(yàn)證基礎(chǔ)2必做已開(kāi)12氨基轉(zhuǎn)換作用GPT測(cè)定掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的方法及臨床意義1驗(yàn)證基礎(chǔ)2必做已開(kāi)13血清尿素氮測(cè)定學(xué)習(xí)尿素測(cè)定的方法。1驗(yàn)證基礎(chǔ)2必做已開(kāi)14血清脂類(lèi)薄層層析1學(xué)習(xí)脂類(lèi)薄層層析法的具體操作。2了解薄層層析在脂類(lèi)成份分析及脂代謝研究中的用途。1綜合基礎(chǔ)2必做已開(kāi)

簡(jiǎn)介：生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)考試大綱考試大綱一、一、考試大綱的性質(zhì)考試大綱的性質(zhì)生物化學(xué)與分子生物學(xué)課程是生物學(xué)專(zhuān)業(yè)重要的專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課，是林學(xué)、園林植物學(xué)、環(huán)境學(xué)等專(zhuān)業(yè)的選修課，它是報(bào)考理科植物學(xué)、生化和分子生物學(xué)、遺傳育種學(xué)等專(zhuān)業(yè)研究生的考試科目之一。為幫助考生明確考試復(fù)習(xí)范圍和有關(guān)要求，特制定本考試大綱。本考試大綱主要根據(jù)北京林業(yè)大學(xué)本科生物科學(xué)、生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)與林科類(lèi)各專(zhuān)業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)課程教學(xué)大綱編制而成，適用于報(bào)考北京林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位研究生的考生。二、二、考試內(nèi)容考試內(nèi)容1蛋白質(zhì)化學(xué)蛋白質(zhì)的化學(xué)組成，20種氨基酸的簡(jiǎn)寫(xiě)符號(hào)氨基酸的理化性質(zhì)及化學(xué)反應(yīng)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)（一級(jí)、二級(jí)、高級(jí)結(jié)構(gòu)的概念及形式）蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定的一般步驟蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及分離純化和純度鑒定的方法蛋白質(zhì)的變性作用蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系2核酸化學(xué)核酸的基本化學(xué)組成及分類(lèi)核苷酸的結(jié)構(gòu)DNA和RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的概念和二級(jí)結(jié)構(gòu)要特點(diǎn)；DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)RNA的分類(lèi)及各類(lèi)RNA的生物學(xué)功能核酸的主要理化特性核酸的研究方法3酶學(xué)酶的作用特點(diǎn)酶的作用機(jī)理影響酶促反應(yīng)的因素酶的提純與活力鑒定的基本方法DNA復(fù)制的基本過(guò)程真核生物與原核生物DNA復(fù)制的比較轉(zhuǎn)錄基本概念；參與轉(zhuǎn)錄的酶及有關(guān)因子原核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程RNA轉(zhuǎn)錄后加工的意義MRNA、TRNA、RRNA和非編碼RNA的后加工10蛋白質(zhì)的合成和轉(zhuǎn)運(yùn)MRNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用、原理和密碼子的概念、特點(diǎn)TRNA、核糖體在蛋白質(zhì)生物合成中的作用和原理參與蛋白質(zhì)生物合成的主要分子的種類(lèi)和功能蛋白質(zhì)生物合成的過(guò)程翻譯后的加工過(guò)程真核生物與原核生物蛋白質(zhì)合成的區(qū)別蛋白質(zhì)合成的抑制劑11原核生物基因表達(dá)調(diào)控操縱子學(xué)說(shuō)翻譯水平上的基因表達(dá)調(diào)控轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的類(lèi)型啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄起始操縱子模型轉(zhuǎn)錄后調(diào)控翻譯的阻遏12真核生物基因調(diào)控原理真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)基因家族真核基因的斷裂結(jié)構(gòu)真核生物DNA水平的調(diào)控順式作用元件與基因調(diào)控染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響啟動(dòng)子及其對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響

簡(jiǎn)介：植物營(yíng)養(yǎng)分子生物學(xué)基礎(chǔ)植物營(yíng)養(yǎng)分子生物學(xué)基礎(chǔ)教學(xué)大綱教學(xué)大綱一、基本信息課程名稱(chēng)植物營(yíng)養(yǎng)分子生物學(xué)基礎(chǔ)課程編號(hào)ARGE4208英文名稱(chēng)MOLECULARBIOLOGYFPLANTNUTRITION課程類(lèi)型專(zhuān)業(yè)選修課總學(xué)時(shí)36其中理論學(xué)時(shí)36實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)實(shí)踐學(xué)時(shí)學(xué)分2預(yù)修課程生物化學(xué)，植物營(yíng)養(yǎng)學(xué)適用對(duì)象農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境專(zhuān)業(yè)課程簡(jiǎn)介（200字左右）植物營(yíng)養(yǎng)分子生物學(xué)基礎(chǔ)課程內(nèi)容（1）講解植物分子生物學(xué)基本理論和基礎(chǔ)知識(shí)（2）講解植物分子生物學(xué)領(lǐng)域的基本研究方法和技術(shù)，其中包括植物轉(zhuǎn)基因所需的植物組織培養(yǎng)技術(shù)（3）介紹植物分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)和基本技能在植物養(yǎng)分吸收利用機(jī)理研究的應(yīng)用，包括其必要性、研究現(xiàn)狀以及取得的研究成果。目的是為學(xué)生進(jìn)一步利用分子生物學(xué)手段深入研究植物養(yǎng)分吸收利用機(jī)理打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。二、教學(xué)目標(biāo)及任務(wù)通過(guò)本課程的教學(xué)，使學(xué)生掌握植物分子生物學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)和基本理論，了解植物分子生物學(xué)的基本研究方法與手段，為學(xué)生進(jìn)一步利用分子生物學(xué)手段深入研究植物養(yǎng)分吸收利用機(jī)理打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。三、學(xué)時(shí)分配教學(xué)課時(shí)分配第三章植物離子運(yùn)輸?shù)鞍椎姆肿由飳W(xué)研究方法與策略第一節(jié)植物根系對(duì)離子的吸收從生理水平到分子水平的研究第二節(jié)研究植物運(yùn)輸?shù)鞍椎牟呗?2第四章作物氮素吸收利用分子生物學(xué)第一節(jié)硝酸鹽離子運(yùn)輸?shù)鞍椎诙?jié)銨鹽離子運(yùn)輸?shù)鞍椎谌?jié)作物氮素吸收利用分子生物學(xué)研究進(jìn)展22第五章作物磷酸鹽吸收利用分子生物學(xué)第一節(jié)作物根系發(fā)育對(duì)植物缺磷逆境的響應(yīng)機(jī)制第二節(jié)磷酸鹽運(yùn)輸?shù)鞍椎谌?jié)作物磷酸鹽吸收利用分子生物學(xué)研究進(jìn)展第四節(jié)作物與菌根菌共生體菌根44第六章作物鉀及其它離子吸收利用分子生物學(xué)第一節(jié)鉀離子運(yùn)輸?shù)鞍椎诙?jié)其它離子運(yùn)輸?shù)鞍椎谌?jié)鉀及其它離子吸收利用分子生物學(xué)研究進(jìn)展22合計(jì)3636四、教學(xué)內(nèi)容及教學(xué)要求緒論2學(xué)時(shí)教學(xué)要求使學(xué)生了解植物營(yíng)養(yǎng)分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容，特點(diǎn)及研究現(xiàn)狀。第一章基礎(chǔ)分子生物學(xué)知識(shí)16學(xué)時(shí)第一節(jié)植物基因組的特點(diǎn)及多樣性2學(xué)時(shí)習(xí)題要點(diǎn)常見(jiàn)模式植物基因組的大小，基因組大小與植物遺傳背景復(fù)雜性的關(guān)系。

簡(jiǎn)介：1分子生物學(xué)分子生物學(xué)課程教學(xué)大綱課程教學(xué)大綱（理論學(xué)時(shí)16學(xué)時(shí)）使用教材醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)（供8年制及7年制臨床醫(yī)學(xué)等專(zhuān)業(yè)用）分子生物學(xué)是一門(mén)從分子水平研究生命現(xiàn)象、生命的本質(zhì)、生命活動(dòng)及其規(guī)律的科學(xué)。醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)是分子生物學(xué)的一個(gè)重要分支，是從分子水平研究人體在正常及疾病狀態(tài)下生命活動(dòng)及其規(guī)律的一門(mén)科學(xué)。它主要研究人體生物大分子和大分子體系的結(jié)構(gòu)、功能、相互作用及其同疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。作為一門(mén)課程，醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)涵蓋了醫(yī)學(xué)各專(zhuān)業(yè)學(xué)生必須學(xué)習(xí)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，以及分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中形成的專(zhuān)門(mén)研究領(lǐng)域及相關(guān)知識(shí)。醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)既要較系統(tǒng)地了解分子生物學(xué)的基礎(chǔ)理論知識(shí)和技術(shù)理論知識(shí)，同時(shí)也要了解分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用和相關(guān)研究進(jìn)展。本書(shū)共二十三章，包括5個(gè)方面內(nèi)容。第二章至第十章介紹分子生物學(xué)基本知識(shí)，主要介紹基因和基因組的基本概念和基本特點(diǎn)，基因組核酸復(fù)制與損傷修復(fù)、基因表達(dá)和功能蛋白形成與降解、基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞間通訊與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本概念和基本理論，細(xì)胞增殖與凋亡的相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制。第十一章至第十三章介紹基因操作的基本知識(shí)，包括基因分析、基因功能研究和基因克隆與表達(dá)的相關(guān)基本知識(shí)和研究策略。第十四章至第十八章介紹疾病分子生物學(xué)機(jī)制，介紹了基因和基因組、3緒論一、目的要求了解分子生物學(xué)的定義、研究對(duì)象和研究?jī)?nèi)容；分子生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史；生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)；現(xiàn)代分子生物學(xué)的建立和深入發(fā)展；分子生物學(xué)與相關(guān)學(xué)科的關(guān)系；分子生物學(xué)在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中的應(yīng)用。二、主要內(nèi)容分子生物學(xué)則是從分子水平研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律的一門(mén)新興學(xué)科。它以核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能為研究對(duì)象（一）、分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容分子生物學(xué)主要研究生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能、生物大分子之間的相互作用及其與疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。研究?jī)?nèi)容主要包括以下三個(gè)方面。1核酸分子生物學(xué)2蛋白質(zhì)分子生物學(xué)3細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（二）、分子生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史1、生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)2、現(xiàn)代分子生物學(xué)的建立3、現(xiàn)代分子生物學(xué)的深入發(fā)展（三）、分子生物學(xué)與相關(guān)學(xué)科的關(guān)系由于生命本質(zhì)的高度一致性，分子生物學(xué)已經(jīng)對(duì)生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域產(chǎn)生了全面而深刻的影響，并逐步形成了一系列的分子學(xué)科。

簡(jiǎn)介：分子生物學(xué)分子生物學(xué)課程教學(xué)大綱課程教學(xué)大綱課程編號(hào)233201課程名稱(chēng)分子生物學(xué)總學(xué)時(shí)數(shù)64實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)0先修課及后續(xù)課先修課為生物化學(xué)，遺傳學(xué)；后續(xù)課為基因工程一、一、說(shuō)明部分說(shuō)明部分1課程性質(zhì)生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)課，必修2教學(xué)目標(biāo)及意義本課程是高等院校生物專(zhuān)業(yè)的專(zhuān)業(yè)課。旨在使學(xué)生掌握分子生物學(xué)的基本知識(shí)、基本概念，并了解分子生物學(xué)的發(fā)展趨勢(shì)及應(yīng)用前景。3教學(xué)內(nèi)容和要求本課程安排在學(xué)生完成生物化學(xué)、遺傳學(xué)等有關(guān)基礎(chǔ)和專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課程之后的第六學(xué)期。內(nèi)容上注意與以上課程的銜接，并避免不必要的重復(fù)。同時(shí)注意與后續(xù)課程基因工程等課程的銜接。課堂教學(xué)應(yīng)力求使學(xué)生掌握基本概念，了解分子生物學(xué)的發(fā)展歷史以及最新研究成果；熟練掌握DNA的結(jié)構(gòu)與功能、DNA的復(fù)制、RNA的轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的合成、RNA在蛋白質(zhì)合成中的功能、遺傳密碼、基因表達(dá)與調(diào)控的本質(zhì)、基因組與比較基因組學(xué)；由于該課程內(nèi)容繁多，發(fā)展迅速，故授課教師在吃透教材基礎(chǔ)上，應(yīng)廣泛閱讀相關(guān)參考資料，緊跟本學(xué)科發(fā)展，隨時(shí)補(bǔ)充新內(nèi)容，使學(xué)生及時(shí)了解本學(xué)科的重要進(jìn)展及發(fā)展動(dòng)態(tài)。分子生物學(xué)的發(fā)展依賴(lài)于現(xiàn)代分析和研究技術(shù)，因此，配合分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程，講解一些分子生物學(xué)的重要研究方法。4教學(xué)重點(diǎn)，難點(diǎn)重點(diǎn)DNA的結(jié)構(gòu)與功能；DNA的轉(zhuǎn)座；基因的表達(dá)與調(diào)控難點(diǎn)基因表達(dá)的調(diào)控5教學(xué)方法與手段在教學(xué)方法上采取課堂講授為主，輔以多媒體課件、提問(wèn)、綜述、實(shí)驗(yàn)、作業(yè)、教學(xué)輔助材料等，以加強(qiáng)學(xué)生對(duì)理論知識(shí)的消化和理解，在教學(xué)過(guò)程應(yīng)注意積極啟發(fā)學(xué)生的思維，培養(yǎng)學(xué)生發(fā)現(xiàn)問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力。6教材及主要參考書(shū)教材朱玉賢，李毅現(xiàn)代分子生物學(xué)，第三版；北京高等教育出版社2007主要參考書(shū)調(diào)控；DNA的修復(fù)機(jī)制。第四節(jié)DNA的轉(zhuǎn)座知識(shí)要點(diǎn)轉(zhuǎn)座因子的分類(lèi)和結(jié)構(gòu)特征；轉(zhuǎn)座作用的機(jī)制；轉(zhuǎn)座作用的遺傳學(xué)效應(yīng)；真核生物中的轉(zhuǎn)座因子。三、本章學(xué)時(shí)數(shù)12第三章生物信息的傳遞（上）從DNA到RNA一、教學(xué)要求了解啟動(dòng)子區(qū)的基本結(jié)構(gòu)；啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別；原核生物MRNA的特征；真核生物MRNA的特征。掌握轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程；增強(qiáng)子及其功能；真核生物啟動(dòng)子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響；內(nèi)含子的剪接、編輯。二、教學(xué)內(nèi)容第一節(jié)RNA的轉(zhuǎn)錄知識(shí)要點(diǎn)轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程；轉(zhuǎn)錄酶和轉(zhuǎn)錄因子。第二節(jié)啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄起始知識(shí)要點(diǎn)啟動(dòng)子區(qū)的基本結(jié)構(gòu)；啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別；酶與啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合；10區(qū)和35區(qū)的最佳間距；增強(qiáng)子及其功能；真核生物啟動(dòng)子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響。第三節(jié)原核生物與真核生物MRNA的特征比較知識(shí)要點(diǎn)原核生物MRNA的特征；真核生物MRNA的特征。第四節(jié)終止和抗終止知識(shí)要點(diǎn)不依賴(lài)于Ρ因子的終止；依賴(lài)于Ρ因子的終止；抗終止。第五節(jié)內(nèi)含子的剪接、編輯及化學(xué)修飾知識(shí)要點(diǎn)RNA中的內(nèi)含子；RNA的剪接；RNA的編輯和化學(xué)修飾。三、本章學(xué)時(shí)數(shù)10第四章生物信息的傳遞（下）從MRNA到蛋白質(zhì)一、教學(xué)要求了解三聯(lián)子；核糖體；RRNA；氨基酸的活化。掌握核糖體的功能；蛋白質(zhì)合成的生物學(xué)機(jī)制；核定位蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。二、教學(xué)內(nèi)容第一節(jié)遺傳密碼三聯(lián)子知識(shí)要點(diǎn)三聯(lián)體密碼及其破譯；遺傳密碼的性質(zhì)。第二節(jié)核糖體知識(shí)要點(diǎn)核糖體的結(jié)構(gòu)；RRNA；核糖體的功能。第三節(jié)蛋白質(zhì)合成的生物學(xué)機(jī)制知識(shí)要點(diǎn)氨基酸的活化；翻譯的起始；肽鏈的延伸；肽鏈的終止；蛋白質(zhì)前體的加工；蛋白質(zhì)合成抑制劑；RNA分子在生物進(jìn)化中的地位。第四節(jié)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制知識(shí)要點(diǎn)翻譯轉(zhuǎn)運(yùn)同步機(jī)制；翻譯后轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制；核定位蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制；蛋白質(zhì)的降解。三、本章學(xué)時(shí)數(shù)10

簡(jiǎn)介：CHAPTER2DNASTRUCTUREANDPROPERTIES,§21DNAISTHEGENETICMATERIAL§22THECHEMICALNATUREOFPOLYNUCLEOTIDES§23DNAISADOUBLEHELIX§24POLYMORPHISMOFDNASTRUCTURE§25DENATURATIONANDRENATURATION§26SUPERCOILEDDNAANDTOPOISOMERASE§27RESTRICTIONENZYMESANDDNASEQUENCING,§21DNAISTHEGENETICMATERIAL,,DEOXYRIBONUCLEICACIDDNADNAISTHESTOREHOUSE,ORCELLLIBRARY,THATCONTAINSALLTHEINFORMATIONREQUIREDTOBUILDTHECELLSANDTISSUESOFANORGANISM,,1THEDISCOVERYOFDNAFRIEDRICHMIESCHER1869DISCOVEREDINTHECELLNUCLEUSAMIXTUREOFCOMPOUNDSNUCLEINNUCLEINISMOSTLYCHROMATIN,ACOMPLEXOFDNAANDCHROMOSOMALPROTEINS,2TRANSFORMATIONINBACTERIA,KEYEXPERIMENTSDONEBYFREDERICKGRIFFITHIN1928OBSERVEDCHANGEINSTREPTOCOCCUSPNEUMONIAEFROMVIRULENTSSMOOTHCOLONIESWHEREBACTERIALHADCAPSULES,TOAVIRULENTRROUGHCOLONIESWITHOUTCAPSULESHEATKILLEDVIRULENTCOLONIESCOULDTRANSFORMAVIRULENTCOLONIESTOVIRULENTONES,DNATHETRANSFORMINGMATERIAL,IN1944AVERYUSEDATRANSFORMATIONTESTSIMILARTOGRIFFITH’SPROCEDURETAKINGCARETODEFINETHECHEMICALNATUREOFTHETRANSFORMINGSUBSTANCETECHNIQUESUSEDEXCLUDEDBOTHPROTEINANDRNAASTHECHEMICALAGENTOFTRANSFORMATIONOTHERTREATMENTSVERIFIEDTHATDNAISTHECHEMICALAGENTOFTRANSFORMATIONOFSPNEUMONIAEFROMAVIRULENTTOVIRULENT,GRIFFITH,1928AVERYETAL,1944,3DNACONFIRMATION,IN1952,HERSHEYANDCHASEDEMONSTRATEDTHATBACTERIOPHAGEINFECTIONCOMESFROMDNABY1953WATSONRNAISNAMEDFORITSSUGARRIBOSETHEDIFFERENCEISTHATTHESUGARINRNAHASANOHGROUPATTHE2POSITIONOFTHEPENTOSERING,1NITROGENOUSBASE,NUCLEOTIDENTBASICUNIT,EACHNUCLEICACIDCONTAINS4TYPESOFBASETHESAMETWOPURINES,ADENINEANDGUANINE,AREPRESENTINBOTHDNAANDRNATHETWOPYRIMIDINESINDNAARECYTOSINEANDTHYMINEINRNAURACILISFOUNDINSTEADOFTHYMINETHEONLYDIFFERENCEBETWEENURACILANDTHYMINEISTHEPRESENCEOFAMETHYLSUBSTITUENTATPOSITIONC5THEBASESAREUSUALLYREFERREDTOBYTHEIRINITIALLETTERSDNACONTAINSA,G,C,T,WHILERNACONTAINSA,G,C,U,TWOTYPESOFPENTOSEAREFOUNDINNUCLEICACIDSTHEYDISTINGUISHDNAANDRNA,2PENTOSESUGAR,THEDIFFERENCELIESINTHEABSENCE/PRESENCEOFTHEHYDROXYLGROUPATPOSITION2OFTHESUGARRING,THENITROGENOUSBASEISLINKEDTOPOSITION1ONTHEPENTOSERINGBYAGLYCOSIDICBONDFROMN1OFPYRIMIDINESORN9OFPURINES,NUCLEOSIDENUCLEOTIDE,NUCLEOSIDES核苷BASESUGARNUCLEOSIDERNARIBONUCLEOSIDESORJUSTNUCLEOSIDESDNA2’DEOXYRIBONUCLEOSIDESORJUSTDEOXYNUCLEOSIDESNUCLEOTIDES核苷酸BASESUGARPHOSPHATENUCLEOTIDESTHENUCLEOSIDE5’TRIPHOSPHATESNTPSORDNTPSARERESPECTIVELYTHEBUILDINGBLOCKSOFPOLYMERICRNAANDDNA,THEPOLYNUCLEOTIDECHAINISCONSTRUCTEDBYLINKINGTHE5′POSITIONOFONEPENTOSERINGTOTHE3′POSITIONOFTHENEXTPENTOSERINGVIAAPHOSPHATEGROUPSOTHESUGARPHOSPHATEBACKBONEISSAIDTOCONSISTOF5′3′PHOSPHODIESTERLINKAGESTHENITROGENOUSBASES“STICKOUT“FROMTHEBACKBONE,PHOSPHODIESTERBONDS磷酸二脂鍵COVALENTLINKAGEOFAPHOSPHATEGROUPBETWEENTHE5’HYDROXYLOFARIBOSEANDTHE3’HYDROXYLOFTHENEXTATNEUTRALPH,EACHPHOSPHATEGROUPHASASINGLENEGATIVECHARGE,THISISWHYNUCLEICACIDSARETERMEDACIDSTHEYARETHEANIONSOFSTRONGACIDSNUCLEICACIDSARETHUSHIGHLYCHARGEDPOLYMERS,THETERMINALNUCLEOTIDEATONEENDOFTHECHAINHASAFREE5′GROUPTHETERMINALNUCLEOTIDEATTHEOTHERENDHASAFREE3′GROUPITISCONVENTIONALTOWRITENUCLEICACIDSEQUENCESINTHE5′→3′DIRECTIONTHATIS,FROMTHE5′TERMINUSATTHELEFTTOTHE3′TERMINUSATTHERIGHT,DNA/RNASEQUENCETHENUCLEICACIDSEQUENCEISTHESEQUENCEOFBASESA,C,G,T/UINTHEDNA/RNACHAINTHESEQUENCEISCONVENTIONALLYWRITTENFROMTHEFREE5’TOTHEFREE3’ENDOFTHEMOLECULE5’ATTAGCTC3’DNA5’AUAGCUUGA3’RNA,§23DNAISADOUBLEHELIX,1CHARGAFF’SRULESERWINCHARGAFF’SSTUDIESOFTHEBASECOMPOSITIONSOFDNASFROMVARIOUSSOURCESREVEALEDTHATTHECONTENTOFPURINESWASALWAYSROUGHLYEQUALTOTHECONTENTOFPYRIMIDINES,ERWINCHARGAFF1949DNA是由四種脫氧核苷酸NUCLEOTIDE，就是腺嘌呤ADENINE、鳥(niǎo)嘌呤GUANINE胸腺嘧啶THYMIDINE和胞嘧啶CYTOCINE組成的，且在不同物種中四種核苷酸的比率不同。但A與T的量相等，G與C的量相等，即AT；GC，這就是所謂的CHARGAFF規(guī)則（CHARGAFFSRULES。,2THEDOUBLEHELIXMODELFORDNABYWATSONANDCRICK,,THEDOUBLEHELIXMODEL1XRAYDIFFRACTIONDATASHOWEDTHATDNAHASTHEFORMOFAREGULARHELIX,MAKINGACOMPLETETURNEVERY34?34NM,WITHADIAMETEROF20?2NMSINCETHEDISTANCEBETWEENADJACENTNUCLEOTIDESIS34?,THEREMUSTBE10NUCLEOTIDESPERTURN2THEDENSITYOFDNASUGGESTSTHATTHEHELIXMUSTCONTAINTWOPOLYNUCLEOTIDECHAINSTHECONSTANTDIAMETEROFTHEHELIXCANBEEXPLAINEDIFTHEBASESINEACHCHAINFACEINWARDANDARERESTRICTEDSOTHATAPURINEISALWAYSOPPOSITEAPYRIMIDINE,AVOIDINGPARTNERSHIPSOFPURINEPURINETOOTHICKORPYRIMIDINEPYRIMIDINETOOTHIN,3THEPROPORTIONOFGISALWAYSTHESAMEASTHEPROPORTIONOFCINDNA,ANDTHEPROPORTIONOFAISALWAYSTHESAMEASTHATOFTSOTHECOMPOSITIONOFANYDNACANBEDESCRIBEDBYTHEPROPORTIONOFITSBASESTHATISGCTHISRANGESFROM26TO74FORDIFFERENTSPECIESWATSONANDCRICKPROPOSEDTHATTHETWOPOLYNUCLEOTIDECHAINSINTHEDOUBLEHELIXASSOCIATEBYHYDROGENBONDINGBETWEENTHENITROGENOUSBASESGCANHYDROGENBONDSPECIFICALLYONLYWITHC,WHILEACANBONDSPECIFICALLYONLYWITHTTHESEREACTIONSAREDESCRIBEDASBASEPAIRING,ANDTHEPAIREDBASESGWITHC,ORAWITHTARESAIDTOBECOMPLEMENTARY,THEMODELREQUIRESTHETWOPOLYNUCLEOTIDECHAINSTORUNINOPPOSITEDIRECTIONSANTIPARALLELLOOKINGALONGTHEHELIX,THEREFORE,ONESTRANDRUNSINTHE5′3′DIRECTION,WHILEITSPARTNERRUNS3′5′,THEBASESLIEONTHEINSIDETHEYAREFLATSTRUCTURES,LYINGINPAIRSPERPENDICULARTOTHEAXISOFTHEHELIXCONSIDERTHEDOUBLEHELIXINTERMSOFASPIRALSTAIRCASETHEBASEPAIRSFORMTHETREADSPROCEEDINGALONGTHEHELIX,BASESARESTACKEDABOVEONEANOTHER,INASENSELIKEAPILEOFPLATES,EACHBASEPAIRISROTATED36oAROUNDTHEAXISOFTHEHELIXRELATIVETOTHENEXTBASEPAIRSO10BASEPAIRSMAKEACOMPLETETURNOF360oTHETWISTINGOFTHETWOSTRANDSAROUNDONEANOTHERFORMSADOUBLEHELIXWITHANARROWGROOVE12?ACROSSANDAWIDEGROOVE22?ACROSSTHEDOUBLEHELIXISRIGHTHANDEDTHETURNSRUNCLOCKWISELOOKINGALONGTHEHELICALAXISTHESEFEATURESREPRESENTTHEACCEPTEDMODELFORWHATISKNOWNASTHEBFORMOFDNA,,FLASH,,§24POLYMORPHISMOFDNASTRUCTURE,1THEDOUBLEHELIXEXISTSINMULTIPLECONFORMATION1RIGHTHANDEDHELIXB，A，C，D，E2LEFTHANDEDHELIXZDNA,ADNA,BDNA,ZDNA,RELATIVEHUMIDITY9275SALTSODIUMSODIUM,BDNAADNA,,THEAFORMHAS11BASEPAIRSPERTURNITSMAJORGROOVEISNARROWERANDDEEPERTHANTHATOFBFORM,ANDITSMINORGROOVEISBROADERANDSHALLOWERUNCLEARIFPUREAFORMDNAEXISTSWITHINCELLSDNARNAHYBRIDDOUBLEHELICESALLDOUBLEHELICALRNAREGIONS,TAKEAFORM,STRUCTURALPROPERTIESOFA、BANDZDNA,2ZDNAALEXANDERRICHETALMITDOUBLESTRANDEDDNACONTAININGSTRANDSOFALTERNATINGPURINESANDPYRIMIDINESEGPOLYDGDCPOLYDCDGGCGCGCGCCGCGCGCGM5CGATM5CGGM5CTAGM5CLIVINGCELLSCONTAINASMALLPROPORTIONOFZDNAFUNCTIONOFZDNAREGULATEGENEEXPRESSION,ZDNAINDROSOPHILACHROMOSOMEPROVEDBYANTIZANTIBODY,IMMUNOLOGICALSLID,CYTOLOGICALSLID,,,,3INVERTEDREPEATSHAIRPINWHENASEQUENCEOFBASESISFOLLOWEDBYACOMPLEMENTARYSEQUENCENEARBYINTHESAMEMOLECULE,THECHAINMAYFOLDBACKONITSELFTOGENERATEANANTIPARALLELDUPLEXSTRUCTURE,CALLAHAIRPINITCONSISTSOFABASEPAIRED,DOUBLEHELICALREGION,THESTEM,WITHALOOPOFUNPAIREDBASESATONEEND,HAIRPIN,INVERTEDREPEATSTHESEQUENCEINADOUBLEDDNACONSISTSOFTWOCOPIESOFANIDENTICALSEQUENCEPRESENTINTHEREVERSEORIENTATIONTHEYCALLEDINVERTEDREPEATSEG5’GCTTTTAAAAGC3’3’CGAAAATTTTCG5’THESEQUENCEOFTHEINVERTEDREPEATSTOGETHERISCALLEDAPALINDROME回文結(jié)構(gòu)ITISDEFINEDASASEQUENCEOFDUPLEXDNATHATISTHESAMEWHENEITHEROFITSSTRANDSISREADINADEFINEDDIRECTION,APALINDROMICSEQUENCEISFORMALLYDESCRIBEDASAREGIONOFDYADSYMMETRY（雙重對(duì)稱(chēng)區(qū)），INWHICHTHEAXISOFSYMMETRYSEPARATESTHEINVERTEDREPEATS,GGTCCA,ACCTGG,,THETWOCOPIESOFANINVERTEDREPEATNEEDNOTNECESSARILYBECONTIGUOUS,GGTNNCCANN,NNACCNNTGG,,PALINDROME,§25DENATURATIONANDRENATURATIONCHEMICALANDPHYSICALPROPERTIESOFNUCLEICACIDSSTABILITYOFNUCLEICACIDSALTHOUGHITMIGHTSEEMOBVIOUSTHATDNADOUBLESTRANDSANDRNASTRUCTURESARESTABILIZEDBYHYDROGENBONDING,THISISNOTTHECASEHBONDSDETERMINETHESPECIFICITYOFTHEBASEPAIRING,BUTTHESTABILITYOFANUCLEICACIDHELIXISTHERESULTOFHYDROPHOBICANDSTACKINGINTERACTIONBETWEENTHESTACKEDBASEPAIRS,,,EFFECTOFACIDINSTRONGACIDANDATELEVATEDTEMPERATURES,NUCLEICACIDSAREHYDROLYZEDCOMPLETELYTOTHEIRCONSTITUENTSBASES,RIBOSEORDEOXYRIBOSEANDPHOSPHATEINMOREDILUTEMINERALACID,PH34,THEMOSTEASILYHYDROLYZEDBONDSARESELECTIVELYBROKENEFFECTOFALKALIINCREASINGPHABOVEPH8,SPECIFICHYDROGENBONDINGBROKEN,DSDNASSDNABECAUSEOFTHEPRESENCEOFTHE2OHGROUP,RNAMORESUSCEPTIBLETOALKALIINHIGHPH,PHOSPHODIESTERBONDBACKBONEISBROKENRNAFRAGMENTS,,,CHEMICALDENATURATIONATNEUTRALPH,UREAANDFORMAMIDECANCAUSETHEDENATURATIONOFDNAORRNABYDISRUPTINGTHEHYDROPHOBICFORCESBETWEENTHESTACKEDBASESEFFECTOFMECHANICALFORCESDNAISARELATIVELYSTIFFMOLECULELONGDNAMOLECULARCANEASILYBEDAMAGEDBYSHEARINGFORCES,ORBYSONICATIONHIGHINTENSITYULTRASOUNDTHEYMERELYREDUCETHELENGTHOFTHEDOUBLESTRANDEDMOLECULESINTHESOLUTION,,ACRUCIALPROPERTYOFTHEDOUBLEHELIXISTHEABILITYTOSEPARATETHETWOSTRANDSWITHOUTDISRUPTINGCOVALENTBONDSTHISMAKESITPOSSIBLEFORTHESTRANDSTOSEPARATEANDREFORMUNDERPHYSIOLOGICALCONDITIONSATTHEVERYRAPIDRATESNEEDEDTOSUSTAINGENETICFUNCTIONSTHESPECIFICITYOFTHEPROCESSISDETERMINEDBYCOMPLEMENTARYBASEPAIRING,2DENATURATIONANDRENATURATION,DNA的呼吸作用DENATURATIONDENATURATIONOFDNAORRNADESCRIBESITSCONVERSIONFROMTHEDOUBLESTRANDEDTOTHESINGLESTRANDEDSTATETHECOMPLEMENTARYSTRANDSOFTHEDOUBLEHELIXCANBEMADETOCOMEAPARTWHENASOLUTIONOFDNAISHEATEDABOVEPHYSIOLOGICALTEMPERATURETONEAR100?CORUNDERCONDITIONOFHIGHPH,APROCESSKNOWNASDENATURATION,HYPERCHROMICITY增色效應(yīng),HYPERCHROMICITYWHENTHETEMPERATUREOFASOLUTIONOFDNAISRAISEDTONEARTHEBOILINGPOINTOFWATER,THEABSORBANCEAT260NMMARKEDLYINCREASES,APHENOMENONKNOWNASHYPERCHROMICITYTHISINCREASEISTHATDUPLEXDNAABSORBSLESSULTRAVIOLETLIGHTBYABOUT40THANDOINDIVIDUALDNACHAINSTHISHYPERCHROMICITYISDUETOBASESTACKING,WHICHDIMINISHESTHECAPACITYOFTHEBASESINDUPLEXDNATOABSORBULTRAVIOLETLIGHT,當(dāng)濃度都為50ΜG/ML時(shí)，DOUBLESTRAINEDDNAA260100SINGLESTRAINEDDNA完全變性DNAA260137單核苷酸的等比例混合物A260160TMMELTINGTEMPERATUREOFDNAISTHEMIDPOINTOFTHETRANSITIONWHENDUPLEXDNATODENATUREDBYHEATINGTOSEPARATEINTOSINGLESTRANDS,THETMOFDNAISACHARACTERISTICOFEACHDNATMISLARGELYDETERMINEDBY1GCCONTENT2IONICSTRENGTH3PH,TM↑,PH12,酮基→烯醇基,PH23,NH2→NH2質(zhì)子化,改變氫鍵的形成與結(jié)合力,極端PH條件的影響,,一切減弱氫鍵，堿基堆積力的因素均將使TM值降低,,RENATURATIONRENATURATIONISTHEREASSOCIATIONOFDENATUREDCOMPLEMENTARYSINGLESTRANDSOFADNADOUBLEHELIX,RENATURATIONISDETERMINEDBYTEMPERATUREOFSOLUTIONCONCENTRATIONOFDNACOMPLEXITYOFDNA,RENATURATIONKINETIC復(fù)性動(dòng)力學(xué)DNA復(fù)性是一種雙分子二級(jí)反應(yīng)，單鏈消失的速度可表示為,C單鏈DNA濃度T時(shí)間K復(fù)性速度常數(shù)CODNA濃度,,當(dāng)T0時(shí)，CC0,,在上式中，當(dāng)T0時(shí)，CC0，表明所有的DNA都是單鏈。,復(fù)性的分?jǐn)?shù)C/C0是起始濃度和經(jīng)過(guò)時(shí)間的乘積COT的函數(shù)，這個(gè)函數(shù)繪成的曲線，稱(chēng)為COT曲線。,,當(dāng)反應(yīng)完成一半時(shí),,,反應(yīng)進(jìn)行至一半時(shí)的COT，即C0T1/2，其意義為半數(shù)變性DNA再結(jié)合時(shí)的COT值；反映復(fù)性進(jìn)行至一半時(shí)所需的時(shí)間與DNA濃度間的關(guān)系。任何一個(gè)DNA的復(fù)性都可用C0T1/2描述（核苷酸MOLESECL1），值越大表明反應(yīng)越慢，DNA的復(fù)性遵循C0T曲線。,THECONCEPTOFBASEPAIRINGISCENTRALTOALLPROCESSESINVOLVINGNUCLEICACIDSDISRUPTIONOFTHEBASEPAIRSISACRUCIALA

簡(jiǎn)介：1生化分子生物學(xué)專(zhuān)業(yè)碩士研究生培養(yǎng)方案生化分子生物學(xué)專(zhuān)業(yè)碩士研究生培養(yǎng)方案（071010）一、培養(yǎng)目標(biāo)一、培養(yǎng)目標(biāo)培養(yǎng)適應(yīng)我國(guó)社會(huì)主義現(xiàn)代化建設(shè)需要的，德、智、體全面發(fā)展的高級(jí)專(zhuān)業(yè)人才。要求碩士研究生1、掌握馬克思主義的基本原理，堅(jiān)持四項(xiàng)基本原則，熱愛(ài)祖國(guó)，遵紀(jì)守法，品德優(yōu)良，學(xué)風(fēng)嚴(yán)謹(jǐn)，具有實(shí)事求是、不斷追求新知、勇于創(chuàng)造的科學(xué)精神，積極為社會(huì)主義建設(shè)服務(wù)。2、掌握本學(xué)科堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)理論，系統(tǒng)的專(zhuān)門(mén)知識(shí)和技能；具有從事科學(xué)研究工作或獨(dú)立擔(dān)負(fù)專(zhuān)門(mén)技術(shù)工作的能力。3、較熟練地掌握一門(mén)外國(guó)語(yǔ)，具有較好的外語(yǔ)聽(tīng)說(shuō)和科學(xué)論文寫(xiě)作能力。各學(xué)科應(yīng)根據(jù)上述要求，結(jié)合學(xué)科特點(diǎn)，針對(duì)學(xué)生的知識(shí)結(jié)構(gòu)和能力要求，進(jìn)一步細(xì)化本學(xué)科碩士研究生的培養(yǎng)目標(biāo)。二、研究方向二、研究方向1、熱帶生物抗逆分子機(jī)理研究海南省擁有豐富的熱帶陸地、海洋生物資源，并以其獨(dú)特的地理及氣候環(huán)境孕育了許多特有的植物品種，本研究方向主要利用海南豐富的熱帶植物資源，著眼于熱帶生物資源中那些具有重要經(jīng)濟(jì)性狀或主要生物學(xué)功能的抗逆基因的克隆及表達(dá)研究。地域優(yōu)勢(shì)和資源優(yōu)勢(shì)使本研究方向在國(guó)內(nèi)處于不可替代的位置，同時(shí)也賦予更多的源頭創(chuàng)新研究的機(jī)會(huì)。該研究方向主要著重于（1）耐鹽相關(guān)基因的克隆與鑒定研究，通過(guò)克隆鑒定耐鹽相關(guān)基因，遺傳轉(zhuǎn)化，并利用基因工程手段培育出耐鹽作物品種，具有重要理論和實(shí)踐意義；（2）橡膠產(chǎn)膠相關(guān)基因以及抗逆相關(guān)基因的研究；了解天然橡膠生物合成及調(diào)控的分子基礎(chǔ)研究，乙烯利刺激橡膠樹(shù)后的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及產(chǎn)膠相關(guān)基因及橡膠樹(shù)高產(chǎn)基因克隆及鑒定研究，橡膠創(chuàng)傷和乳管分化的分子機(jī)理和信號(hào)傳導(dǎo)研究；橡膠抗旱抗寒相關(guān)基因的克隆及抗逆分子機(jī)理研究。（3）水稻抗逆基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化育種研究，利用海南野生稻資源，篩選和克隆水稻高抗稻瘟病、紋枯病等抗性相關(guān)基因。利用分子標(biāo)記輔助選擇和回交轉(zhuǎn)育的常規(guī)育種技術(shù)，進(jìn)行水稻高抗3保護(hù)和品種改良的有機(jī)結(jié)合。（3）（3）媒介生物（蚊蟲(chóng)、蜱蟲(chóng)等）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)以及熱帶動(dòng)物疾病的分子診斷和防治方法的研究。此方向主要研究蚊蟲(chóng)的表皮合成的生化機(jī)制，進(jìn)行殺蚊劑藥物靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)，為研發(fā)新型殺蚊藥提供有效的靶標(biāo)。研究?jī)?nèi)容包括利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定參與表皮形成的蛋白；運(yùn)用RNA干擾的方法評(píng)價(jià)柔性表皮合成酶和主要表皮結(jié)構(gòu)蛋白的基因功能區(qū)域；評(píng)價(jià)表皮合成酶抑制劑對(duì)蚊蟲(chóng)的影響；以及柔性表皮合成酶的特性等。（4）動(dòng)物疾病相關(guān)蛋白質(zhì)功能及相互作用研究，及藥物作用的分子機(jī)理研究。此研究方向主要開(kāi)展與動(dòng)物抗炎免疫以及神經(jīng)疾患有關(guān)的關(guān)鍵蛋白質(zhì)的功能、未知內(nèi)源性配體、蛋白質(zhì)復(fù)合體的組成、有調(diào)控功能的未知磷酸化位點(diǎn)及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)方式等研究；同時(shí)開(kāi)展與動(dòng)物抗炎免疫以及神經(jīng)系統(tǒng)疾患有關(guān)的合成和天然化合物的藥理學(xué)作用機(jī)制研究。（5）基因重組藥物與飼用添加劑制備工藝路線研究。此方向主要研究基因工程產(chǎn)品（包括藥用蛋白質(zhì)和飼用添加劑）的原核和真核表達(dá)載體的構(gòu)建、蛋白質(zhì)表達(dá)以及分離純化方法；并針對(duì)蛋白酶底物共有序列加以基因改造，提高療效或延長(zhǎng)蛋白質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的半衰期。三、學(xué)制和學(xué)習(xí)年限三、學(xué)制和學(xué)習(xí)年限碩士研究生學(xué)制為3年。個(gè)別因特殊情況，不能按期完成培養(yǎng)計(jì)劃者，須按規(guī)定提出延長(zhǎng)學(xué)習(xí)年限的書(shū)面報(bào)告，經(jīng)研究生處批準(zhǔn)，可適當(dāng)延長(zhǎng)，但在學(xué)年限最長(zhǎng)不得超過(guò)4年。延長(zhǎng)學(xué)習(xí)期間的一切費(fèi)用自理。四、培養(yǎng)方式四、培養(yǎng)方式1、本專(zhuān)業(yè)碩士研究生采取全日制培養(yǎng)方式。2、本專(zhuān)業(yè)碩士研究生采取課程學(xué)習(xí)和科學(xué)研究相結(jié)合、以及導(dǎo)師指導(dǎo)和集體培養(yǎng)相結(jié)合的辦法。在培養(yǎng)過(guò)程中，導(dǎo)師（組）起主導(dǎo)作用，鼓勵(lì)研究生獨(dú)立思考、勇于創(chuàng)新。在保證基本培養(yǎng)目標(biāo)及培養(yǎng)質(zhì)量的前提下，可采取靈活多樣的培養(yǎng)方式。五、課程設(shè)置與學(xué)分要求五、課程設(shè)置與學(xué)分要求碩士研究生課程學(xué)習(xí)實(shí)行學(xué)分制，總學(xué)分26學(xué)分（不包括學(xué)術(shù)活動(dòng)、教學(xué)實(shí)踐或社會(huì)實(shí)踐、文獻(xiàn)綜述及開(kāi)題報(bào)告等必修環(huán)節(jié)），其中學(xué)位課19學(xué)分。碩士研究生中期考核前必須修滿(mǎn)專(zhuān)業(yè)培養(yǎng)方案規(guī)定的所有課程，考試成績(jī)合格方

簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法1、1MTRISHCL□組份濃度1MTRISHCL（PH74，76，80）□配制量1L□配置方法1稱(chēng)量1211GTRIS置于1L燒杯中。2加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的PH值。PH值濃HCL74約70ML76約60ML80約42ML4將溶解定容至1L。5高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定PH值，因?yàn)門(mén)RIS溶液的PH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃，溶液的PH值大約降低003個(gè)單位。2、15MTRISHCL□組份濃度15MTRISHCL（PH88）□配制量1L□配置方法1稱(chēng)取1817GTRIS置于1L燒杯中。2加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?用濃鹽酸調(diào)PH值至88。4將溶液定容至1L。5高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定PH值，因?yàn)門(mén)RIS溶液的PH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的PH值大約降低003個(gè)單位。3、10TEBUFFER□組份濃度100MMTRISHCL，10MMEDTA（PH74，76，80）□配制量1L□配置方法1量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTRISHCLBUFFER（PH74，76，80）100ML500MMEDTA（PH80）20ML2向燒杯中加入約800ML的去離子水，均勻混合。3將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。4室溫保存。4、3M醋酸鈉醋酸鈉□組份濃度3M醋酸鈉（PH52）□配制量100ML□配置方法1稱(chēng)取408GNAOAC3H2O置于100～200ML燒杯中，加入約40ML的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?加入冰乙酸調(diào)節(jié)PH值至52。3加入去離子水將溶液定容至100ML。4高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBUFFER□組份濃度137MMNACL，27MMKCL，10MMNA2HPO4，2MMKH2PO4□配制量1L□配置方法1稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中。NACL8GKCL02GNA2HPO4142GKH2PO4027G2向燒杯中加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?滴加HCL將PH值調(diào)節(jié)至74，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意上述PBSBUFFER中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1MMCACL2和05MMMGCL2。6、10M醋酸銨醋酸銨□組份濃度10M醋酸銨□配制量100ML□配置方法1稱(chēng)量771G醋酸銨置于100～200ML燒杯中，加入約30ML的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?加去離子水將溶液定容至100ML。3使用022ΜM濾膜過(guò)濾除菌。4密封瓶口于室溫保存。注意醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、TRISHCL平衡苯酚平衡苯酚□配置方法1使用原料大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無(wú)色的，無(wú)需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2操作注意苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3苯酚平衡因?yàn)樵谒嵝訮H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其PH值達(dá)到78以上，苯酚平衡操作方法如下①液化苯酚應(yīng)貯存于20℃，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。②加入羥基喹啉（8QUINOLINOL）至終濃度01％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。③加入等體積的1MTRISHCL（PH80），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制方法分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制方法1、AMPICILLIN□組份濃度100MGMLAMPICILLIN（100MGML）□配制量50ML□配置方法1稱(chēng)量5GAMPICILLIN置于50ML離心管中。2加入40ML滅菌水，充分混合溶解后，定容至50ML。3用022ΜM濾膜過(guò)濾除菌。4小份分裝（1ML份）后，20℃保存。2、IPTG□組份濃度24MGMLIPTG（24MGML）□配制量50ML配置方法1稱(chēng)量12GIPTG置于50ML離心管中。2加入40ML滅菌水，充分混合溶解后，定容至50ML。3用022ΜM濾膜過(guò)濾除菌。4小份分裝（1ML份）后，20℃保存。3、XGAL□組份濃度20MGMLXGAL（20MGML）□配制量50ML□配置方法1稱(chēng)取1GXGAL置于50ML離心管中。2加入40MLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50ML。3小份分裝（1ML份）后，20℃保存。4、LB培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度1％（WV）TRYPTONE，05％（WV）YEASTEXTRACT，1％（WV）NACL□配制量1L□配置方法1稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中TRYPTONE10GYEASTEXTRACT5GNACL10G2加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?滴加5NNAOH（約02ML），調(diào)節(jié)PH值至70。4高溫高壓滅菌后，4℃保存。5、LBAMP培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度1％（WV）TRYPTONE05％（WV）YEASTEXTRACT1％（WV）NACL01MGMLAMPICILLIN□配制量1L□配置方法1稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中TRYPTONE10GYEASTEXTRACT5GNACL10G2加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?滴加5NNAOH（約02ML），調(diào)節(jié)PH值至70。4加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。6加入1MLAMPICILLIN（100MGML）后均勻混合。74℃保存。6、TB培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度12％（WV）TRYPTONE24％（WV）YEASTEXTRACT04％（VV）GLYCEROL17MMKH2PO472MMK2HPO4□配制量1L□配置方法1配制磷酸鹽緩沖液（017MKH2PO4，072MK2HPO4）100ML。2稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。TRYPTONE12GYEASTEXTRACT24GGLYCEROL4ML3加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5待溶液冷卻至60℃以下時(shí)，加入100ML的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。64℃保存。7、TBAPM培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度12％（WV）TRYPTONE24％（WV）YEASTEXTRACT04％（VV）GLYCEROL17MMKH2PO472MMK2HPO401MGMLAMPICILLIN□配制量1L□配置方法1配制磷酸鹽緩沖液（017MKH2PO4，072MK2HPO4）100ML。溶解231GKH2PO4和254GK2HPO4于90ML的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100ML，高溫高壓滅菌。2稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。TRYPTONE12GYEASTEXTRACT24GGLYCEROL4ML3加入約800ML的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5待溶液冷卻至60℃以下時(shí)，加入100ML的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1MLAMPICILLIN（100MGML）。6均勻混合后4℃保存。8、SOB培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度2％（WV）TRYPTONE05％（WV）YEASTEXTRACT005％（WV）NACL25MMKCL10MMMGCL2□配制量1L□配置方法1配制250MMKCL溶液。在90ML的去離子水中溶解186GKCL后，定容至100ML。2配制2MMGCL2溶液。在90ML的去離子水中溶解19GMGCL2后，定容至100ML，高溫高壓滅菌。3稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。TRYPTONE20GYEASTEXTRACT5G

簡(jiǎn)介：糖尿病與分子生物學(xué),石巖,相關(guān)分子生物學(xué)理論基礎(chǔ),遺傳病,基因病,染色體?。?54）,單基因病（25）,多基因?。?80）,,,,,,,,,指生殖細(xì)胞或受精卵的遺傳物質(zhì)發(fā)生突變或畸變所引起的疾病。,,多基因病是一種異質(zhì)性疾病，是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用而形成的一種特殊生命過(guò)程，伴組織器官形態(tài)、代謝和功能的改變。其中遺傳因素即致病基因在決定該病中所起的作用的大小稱(chēng)為遺傳率。遺傳率高達(dá)7080者遺傳基礎(chǔ)在決定發(fā)病上起著重要作用，而環(huán)境因素的影響較??；遺傳率只占3040或以下的疾病，則表明環(huán)境因素有重要作用，而遺傳因素作用不顯著；也有的環(huán)境因素與遺傳因素都很重要，即遺傳因素提供了產(chǎn)生疾病的必要遺傳背景而環(huán)境因素促使疾病表現(xiàn)出相應(yīng)的癥狀和體征。,,,遺傳因素,環(huán)境因素,染色體病,苯酮尿癥,半乳糖血癥,G6PD缺乏癥,哮喘、精神分裂癥,糖尿?。ㄉ倌晷停?冠心病,消化性潰瘍,強(qiáng)性傳染病,維C缺乏癥,物理、機(jī)械、化學(xué)因素?fù)p傷,唇裂腭裂強(qiáng)直性脊椎炎高血壓病,結(jié)核病,2型糖尿病相關(guān)基因,1胰島素基因,11胰島素分子上的某一個(gè)氨基酸被代替，而此氨基酸對(duì)胰島素的生物活性起關(guān)鍵性作用,12胰島素原轉(zhuǎn)換為胰島素的過(guò)程中，正常的咸基殘端被裂開(kāi)。,B52突變（苯丙氨酸亮氨酸）INS一級(jí)結(jié)構(gòu)改變受體結(jié)合障礙。,65位（精氨酸非咸性氨基酸）蛋白酶識(shí)別點(diǎn)消失INS加工障礙胰島素原在C肽和B鏈之間斷裂妨礙受體識(shí)別,,,,,,,2型糖尿病相關(guān)基因,2胰島素受體基因,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,0,10,20,30,40,50,60,70,80,90,100,110,120,130,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,1,2,3,456789,1011,1213,1421,22,胰島素結(jié)合區(qū),富含半胱氨酸區(qū)域,太,選擇性可剪切外顯子,前受體胯加工區(qū),酷氨酸激酶,信號(hào)肽,外顯子,胰島素受體基因結(jié)構(gòu)圖,2型糖尿病相關(guān)基因,3葡萄糖激酶基因,,,,,,,,,,,,,,,1B1C,2,3,789,10,EXON,GCK結(jié)構(gòu)示意圖,456,1A,,在少年起病成年型病人中發(fā)現(xiàn)了葡萄糖激酶（GCK）基因的改變及該酶活性下降，當(dāng)屬近年來(lái)2型糖尿病研究的一大突破。,血糖增高,GCK表達(dá),葡萄糖,6磷酸葡萄糖,,,,胰島素分泌,,,,,,肝糖元合成,,國(guó)內(nèi)一項(xiàng)報(bào)道稱(chēng)，在起病早及/或伴明顯家族史的常見(jiàn)型2型糖尿病中見(jiàn)到GCK內(nèi)含子1B變異。距EX1及IN1拼接點(diǎn)第12個(gè)堿基呈現(xiàn)AT突變。未見(jiàn)編碼區(qū)及拼接區(qū)有突變?？尚诺慕忉尀檫@些突變?cè)谑来鷤鬟f中經(jīng)自然選擇消除，以致在普通群體中少見(jiàn)，僅見(jiàn)于MODY者而非常見(jiàn)型2型糖尿病的主要病因。,2型糖尿病相關(guān)基因,4糖原合成酶基因,在周?chē)M織對(duì)葡萄糖的非氧化攝取、合成糖原的過(guò)程中，糖原合成酶（GSY）基因產(chǎn)物起到重要作用。這一過(guò)程的受阻可引起周?chē)M織對(duì)胰島素的抵抗，常伴高血壓，并常有明顯的家族遺傳傾向。,在2型糖尿病患者GSY基因中發(fā)現(xiàn)了雙核苷酸復(fù)序列多態(tài)性（TG）。它位于19號(hào)染色體載脂蛋白C2及富含組氨酸的鈣結(jié)合蛋白基因之間，擁有10個(gè)等位基因，雜合度082，在2型糖尿病發(fā)病及胰島素抵抗中的作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。,2型糖尿病相關(guān)基因,5載脂蛋白基因群,糖尿病患者多合并有血脂和脂蛋白成分的異常，是引起糖尿病血管病變的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。載脂蛋白（APO）在脂類(lèi)代謝中起重要作用，目前國(guó)際上已從分子生物學(xué)領(lǐng)域?qū)PO基因多態(tài)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了2型糖尿病與APOA1、C3、B等基因相關(guān)聯(lián)。研究最為深入的當(dāng)屬APOB。,APOB是乳糜微粒（CM）和低密度脂蛋白的主要載脂蛋白，主要有APOB100、APOB48兩種形式。前者的主要功能是結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)，參與脂類(lèi)代謝，它是肝臟合成和分泌富含甘油三酯的VLDL所必需的載脂蛋白。而后者在CM裝配及分泌中起重要作用，它在小腸細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成后作為CM的主要蛋白質(zhì)分泌入血。人類(lèi)APOB基因已被成功克隆，基因全長(zhǎng)43KB，位于2號(hào)染色體短臂末端（2P23），含28個(gè)內(nèi)含子及29個(gè)外顯子?；蜣D(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游有7KB長(zhǎng)的AT富含區(qū)，可促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。3端181KB構(gòu)成一種由1116BP重復(fù)排列的富含AT的超變異小衛(wèi)星序列。另外，某些序列在重組中可成為潛在位點(diǎn)，當(dāng)APOB基因存在缺陷時(shí)上述區(qū)域可成為突變區(qū)。,2型糖尿病與APOB基因的某些多態(tài)性有一定關(guān)聯(lián)，且APOB基因的多態(tài)性方面存在種族差異。,2型糖尿病相關(guān)基因,6線粒體TRNA基因,線粒體（MT基因突變糖尿病是1992年以來(lái)發(fā)現(xiàn)的以母系遺傳、血糖升高，多數(shù)伴耳聾為主要特征的特殊類(lèi)型的糖尿病，占2型糖尿病發(fā)病率的0510。,APOB是乳糜微粒（CM）和低密度脂蛋白的主要載脂蛋白，主要有APOB100、APOB48兩種形式。前者的主要功能是結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)，參與脂類(lèi)代謝，它是肝臟合成和分泌富含甘油三酯的VLDL所必需的載脂蛋白。而后者在CM裝配及分泌中起重要作用，它在小腸細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成后作為CM的主要蛋白質(zhì)分泌入血。人類(lèi)APOB基因已被成功克隆，基因全長(zhǎng)43KB，位于2號(hào)染色體短臂末端（2P23），含28個(gè)內(nèi)含子及29個(gè)外顯子。基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游有7KB長(zhǎng)的AT富含區(qū)，可促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。3端181KB構(gòu)成一種由1116BP重復(fù)排列的富含AT的超變異小衛(wèi)星序列。另外，某些序列在重組中可成為潛在位點(diǎn)，當(dāng)APOB基因存在缺陷時(shí)上述區(qū)域可成為突變區(qū)。,2型糖尿病與APOB基因的某些多態(tài)性有一定關(guān)聯(lián)，且APOB基因的多態(tài)性方面存在種族差異。,

簡(jiǎn)介：腫瘤（TUMOR）是指細(xì)胞在致癌因素作用下，基因發(fā)生了改變，失去對(duì)其生長(zhǎng)的正常調(diào)控，導(dǎo)致單克隆性異常增生而形成的新生物。這種新生物常形成局部腫塊，因而得名。根據(jù)腫瘤的生物學(xué)特性及其對(duì)機(jī)體的危害性的不同，腫瘤可分為良性腫瘤和惡性腫瘤兩大類(lèi)。良性腫瘤生長(zhǎng)緩慢，與周?chē)M織界限清楚，不發(fā)生轉(zhuǎn)移，對(duì)人體健康危害不大。惡性腫瘤生長(zhǎng)迅速，可轉(zhuǎn)移到身體其他部位，還會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，破壞正常器官結(jié)構(gòu)，使機(jī)體功能失調(diào)，威脅生命。,癌基因、抑癌基因與生長(zhǎng)因子的關(guān)系,癌基因,,抑癌基因,細(xì)胞,生長(zhǎng)因子,,,正調(diào)控,負(fù)調(diào)控,,產(chǎn)物,,一、概念癌基因細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的基因，它的結(jié)構(gòu)異?；虮磉_(dá)異常，可以引起細(xì)胞癌變。,第一節(jié)癌基因ONCOGENE,二、癌基因理論的確立PEYTONROUSANDROUSSARCOMAVIRUS,1966年諾貝爾獎(jiǎng)授獎(jiǎng)儀式上生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)評(píng)定委員會(huì)委員G克萊因教授致詞,那是1910年。那時(shí)剛剛了解，每個(gè)個(gè)體細(xì)胞都通過(guò)分裂而來(lái)自其他細(xì)胞；癌細(xì)胞的分裂方式與正常細(xì)胞完全一樣，不同之處僅在于它們往往肆無(wú)忌憚地侵入正常的組織屏障。那時(shí)也剛剛認(rèn)清，某些傳染病是由一些小得在光學(xué)顯微鏡下看不見(jiàn)、并能通過(guò)細(xì)菌通不過(guò)的超濾器的生物所引起。這些生物稱(chēng)為濾過(guò)性“毒物”或病毒。就在那時(shí)和那時(shí)前后，現(xiàn)代生物學(xué)尚未建立，人們還不能設(shè)想看不見(jiàn)的病毒與癌細(xì)胞的自行其是的生長(zhǎng)之間會(huì)有什么關(guān)系。大約就在這個(gè)時(shí)候，洛克菲勒研究所30歲的研究人員勞斯進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)，這些實(shí)驗(yàn)乍看起來(lái)有點(diǎn)生拉硬扯。他把一只母雞身上的惡性結(jié)締組織肉瘤制成無(wú)細(xì)胞濾液，并把它接種入健康的雞體內(nèi)。結(jié)果是令人驚訝的，接受濾液的個(gè)體也患上了與上述母雞完全一樣的腫瘤。（說(shuō)明）,1932年，SHOPE發(fā)現(xiàn)，野生棉尾兔的皮膚腫瘤也可借助無(wú)細(xì)胞濾液傳播。把這些實(shí)驗(yàn)聯(lián)系在一起，勞斯第一個(gè)想到正常細(xì)胞之變成癌細(xì)胞不一定是個(gè)突然的過(guò)程；那些原來(lái)作為整體一部分的細(xì)胞可能通過(guò)若干步驟，逐漸變成獨(dú)立的自行其是的癌細(xì)胞。勞斯把這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為“腫瘤進(jìn)展”，在這個(gè)過(guò)程開(kāi)始時(shí)，潛在的癌細(xì)胞處于“休眠”狀態(tài)。被化學(xué)因子、病毒或激素刺激喚醒之后，他們就采取一種更加無(wú)法無(wú)天的生活方式。勞斯關(guān)于腫瘤進(jìn)展的發(fā)現(xiàn)很快在許多實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)內(nèi)得到證實(shí)。另一方面，他的病毒理論則備受懷疑。一般認(rèn)為，病毒病都具有傳染性，而癌癥不能傳染；這種說(shuō)法如此根深蒂固，所以人們往往把各種病毒原性腫瘤解釋為不可思議的例外。,到1950年，情況有了迅速改變。由于微生物遺傳學(xué)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)某些病毒能將自己的部分遺傳物質(zhì)注入細(xì)胞內(nèi)而不殺死細(xì)胞或抑制其增殖。這樣引入的病毒物質(zhì)可以整合到受體細(xì)胞的基因中，并且其行為就如同新的遺傳因素一樣，引起某些細(xì)胞特性的永久性改變。重新估計(jì)了病毒概念之后，就有可能了解病毒怎么會(huì)將正常細(xì)胞循規(guī)蹈矩的行為改變?yōu)樘匾?jiàn)于癌細(xì)胞的惡性增生。ROUS病毒是一種急轉(zhuǎn)化逆轉(zhuǎn)錄病毒ACUTETRANSFORMINGRETROVIRUS，RNA病毒追蹤研究逆轉(zhuǎn)錄病毒致癌的線索，BISHOP等人于1980年提出了癌基因假說(shuō)。根據(jù)這一假說(shuō)，引起ROUS雞肉瘤等的逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因組中存在有致癌基因，即病毒癌基因，VONC。該癌基因來(lái)源于正常細(xì)胞基因組中的部分序列，即逆轉(zhuǎn)錄病毒中的致癌基因序列是在進(jìn)化過(guò)程中從宿主細(xì)胞基因組中獲得的。,1966年，87歲的勞斯獲得諾貝爾獎(jiǎng),VIRUSLIKEPARTICLESASSEMBLEDINVITROWITHPURIFIEDROUSSARCOMAVIRUSGAGPROTEIN,反轉(zhuǎn)錄病毒顆粒結(jié)構(gòu),勞氏肉瘤病毒（RSV,ROUSSARCOMAVIRUS）基因組結(jié)構(gòu)圖,LTRLONGTERMINALREPEAT序列是調(diào)節(jié)區(qū)，含有反轉(zhuǎn)錄病毒DNA基因組表達(dá)所需要的全部調(diào)節(jié)元件；在勞氏肉瘤病毒基因組中，SRC是額外的腫瘤式基因，它能誘發(fā)RSV感染的動(dòng)物產(chǎn)生肉瘤,,,反轉(zhuǎn)錄病毒癌基因（VONC的起源,,,,,,,,,,,,,,,,,,逆轉(zhuǎn)錄,復(fù)制,整合,轉(zhuǎn)錄,,感染,病毒RNA,RNADNA,前病毒DNA,細(xì)胞基因組DNA,病毒RNA癌基因,RNA病毒顆粒,,,宿主細(xì)胞,,,,,,,,,,,,,再感染,宿主細(xì)胞,攜帶癌基因的病毒顆粒,RNA病毒與宿主細(xì)胞基因組整合過(guò)程示意圖,PROTOONCOGENES,,,,,,,癌變,根據(jù)來(lái)源分為病毒癌基因與細(xì)胞癌基因兩類(lèi)。病毒癌基因（VIRUSONCOGENE,VONC）是一類(lèi)存在于腫瘤病毒中、能使靶細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。病毒癌基因不編碼病毒的結(jié)構(gòu)成分，對(duì)病毒復(fù)制也沒(méi)有作用，但可以使細(xì)胞持續(xù)增殖。細(xì)胞癌基因CELLULARONCOGENE,CONC存在于正常細(xì)胞基因組中的癌基因，又稱(chēng)原癌基因（PROTOONCOGENE,PROONC）。,二、分類(lèi),（一）原癌基因（細(xì)胞癌基因）,特點(diǎn)廣泛存在于生物界基因序列高度保守表達(dá)產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞正常生長(zhǎng)、繁殖、發(fā)育和分化起著精確的調(diào)控作用基因結(jié)構(gòu)發(fā)生異?；虮磉_(dá)失控，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和分化異常VONC與CONC的不同VONC不含內(nèi)含子VONC與CONC的核苷酸序列不完全相同VONC丟失了原癌基因兩端的某些調(diào)控序列，而在病毒高效啟動(dòng)子作用下有較高的轉(zhuǎn)錄活性,斷裂基因,完整的沒(méi)有斷裂的可讀框,功能上相關(guān)的癌基因家族分類(lèi),SRC家族產(chǎn)物多具有酪氨酸蛋白激酶活性，能促進(jìn)增殖信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。RAS家族編碼小G蛋白P21，參與CAMP水平的調(diào)節(jié)。MYC家族編碼核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白，調(diào)節(jié)其他基因轉(zhuǎn)錄的作用。SIS家族編碼的P28，能刺激間葉組織的細(xì)胞分裂繁殖。MYB家族核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,人體內(nèi)細(xì)胞癌基因的分類(lèi)及功能舉例,癌基因最早發(fā)現(xiàn)于逆轉(zhuǎn)錄病毒中。1911年，F(xiàn)ROUS醫(yī)生首次提出病毒引起腫瘤，但直到上一世紀(jì)50年代才得到實(shí)驗(yàn)證實(shí)，命名為羅氏肉瘤病毒（ROUSSARCOMAVIRUS，RSV）。,（二）病毒癌基因,病毒基因組結(jié)構(gòu),病毒癌基因VSRC來(lái)源于宿主細(xì)胞的CSRC基因,ONCOGENEEPSTEINBARRVIRUS,（一）獲得啟動(dòng)子與增強(qiáng)子,二、癌基因活化的機(jī)制,逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細(xì)胞后，病毒基因組所攜帶的長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR內(nèi)含較強(qiáng)的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子）插入到細(xì)胞原癌基因附近或內(nèi)部,啟動(dòng)下游鄰近基因的轉(zhuǎn)錄和影響附近結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平，使原癌基因過(guò)度表達(dá)或由不表達(dá)變?yōu)楸磉_(dá)，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變。,雞（禽）白細(xì)胞病毒（AVIANLEUCOSISVIRUS，ALV）逆轉(zhuǎn)錄病毒,,正常宿主細(xì)胞,病毒DNA的LTR被整合到宿主細(xì)胞CMYC癌基因附近成為其啟動(dòng)子和增強(qiáng)子,,,CMYC癌基因表達(dá)為正常的30100倍,,,,,EXON1,EXON2,EXON3,,,CMYC基因,,,,,EXON1,EXON2,EXON3,,,LTR,,,,,EXON1,EXON2,EXON3,,LTR,ALV,ALV,LTR,,,,,EXON1,EXON2,EXON3,,,,ALV,LTR,缺乏癌基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒致癌模式,,,,（二）染色體易位,在染色體易位的過(guò)程中發(fā)生了某些基因的易位和重排，使原來(lái)無(wú)活性的原癌基因移至強(qiáng)的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子附近而被活化，原癌基因表達(dá)增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。費(fèi)城染色體1960年，在美國(guó)費(fèi)城，NOWELL和HUNGERFORD發(fā)現(xiàn)慢性粒細(xì)胞白血病的患者中，有一個(gè)很小的近端著絲粒染色體，稱(chēng)為費(fèi)城染色體（PHILADELPHIACHROMOSOME,PH）。PH染色體現(xiàn)已被公認(rèn)為是慢性粒細(xì)胞性白血病的特異標(biāo)記染色體。,CABL原癌基因的易位激活,CABL,,,CABL原癌基因，經(jīng)重排后插入到BCR基因的啟動(dòng)子后，使其轉(zhuǎn)錄活性增加，從而引起慢性粒細(xì)胞性白血病。,（三）基因擴(kuò)增,原癌基因可通過(guò)基因擴(kuò)增（GENEAMPLIFICATION）使基因拷貝數(shù)可升高幾十甚至上千倍不等，發(fā)生擴(kuò)增的機(jī)制目前尚不清楚?；驍U(kuò)增可致編碼產(chǎn)物過(guò)量表達(dá)，細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)未變化，但總量大大提高,CMYC基因,CMYC基因是禽類(lèi)白血病增生病毒（ALV）癌基因的同系物。在細(xì)胞靜止期，CMYC幾乎不表達(dá)，但在有絲分裂原刺激下迅速表達(dá)促使細(xì)胞由G0期進(jìn)入G1期，增加細(xì)胞數(shù)量。因此，CMYC原癌基因與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)。CMYC原癌基因激活的主要機(jī)制擴(kuò)增、重排和異常高表達(dá)。另外，CMYC基因低甲基化可能為其激活的另一重要機(jī)制。1985年，SHIBUYA首次在部分胃癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)CMYC基因擴(kuò)增和高表達(dá)。,（四）點(diǎn)突變,原癌基因在射線或化學(xué)致癌劑作用下，發(fā)生單個(gè)堿基的替換點(diǎn)突變POINTMUTATION,從而改變了表達(dá)蛋白的氨基酸組成，造成蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變異?；螯c(diǎn)突變是癌基因活化的主要方式。1982年，美國(guó)3家研究機(jī)構(gòu)（麻省理工大學(xué)、國(guó)立癌癥研究所和哥倫比亞大學(xué)）幾乎同時(shí)發(fā)表這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果人膀胱癌細(xì)胞EJ株的惡性轉(zhuǎn)化是由于其原癌基因CHRAS（356個(gè)堿基）的點(diǎn)突變所致。,1234567891011121314正常細(xì)胞HRAS堿基序列ATGACGGAATATAAGCTGGTGGTGGTGGGCGCCGGCGGTGTG腫瘤細(xì)胞HRAS堿基序列ATGACGGAATATAAGCTGGTGGTGGTGGGCGCCGTCGGTGTG正常P21蛋白氨基酸序列METTHRGLUTYRLYSLEUVALVALVALGLYALAGLYALAVAL腫瘤P21蛋白氨基酸序列METTHRGLUTYRLYSLEUVALVALVALGLYALAVALALAVAL,,,突變的RAS癌基因蛋白質(zhì)被鎖定在激活狀態(tài),,,GDP,,,GDP,GTP,GTP,PI,,,,,,,,,無(wú)活性的RAS蛋白,有活性的RAS蛋白,輸入的信號(hào)刺激GDPGTP交換,內(nèi)源性GTP酶活性,輸出信號(hào),突變的RAS癌基因蛋白質(zhì)被鎖定在激活狀態(tài),,HARREY和KIRFEN鼠肉瘤病毒上發(fā)現(xiàn)，稱(chēng)HRAS、KRAS，人神經(jīng)母細(xì)胞瘤上發(fā)現(xiàn)NRAS，基因突變往往發(fā)生在12、13和61密碼子，以12密碼子最常見(jiàn)。,癌基因活化的4種機(jī)制示意圖,出現(xiàn)新的表達(dá)產(chǎn)物出現(xiàn)過(guò)量的正常表達(dá)產(chǎn)物出現(xiàn)異常、截短的表達(dá)產(chǎn)物,癌基因激活的結(jié)果,作用于細(xì)胞膜上的受體系統(tǒng)或直接被傳遞至細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)蛋白激酶活化轉(zhuǎn)錄因子，引發(fā)一系列基因的轉(zhuǎn)錄激活。,三、原癌基因的產(chǎn)物與功能,CSIS表達(dá)蛋白P28和PDGF一樣能促進(jìn)血管的生長(zhǎng)。,（一）細(xì)胞外生長(zhǎng)因子,例如,,,4NUCLEARPROTEINSTRANSCRIPTIONFACTORS,5CELLGROWTHGENES,,3CYTOPLASMICSIGNALTRANSDUCTIONPROTEINS,,,,,,,,,,1SECRETEDGROWTHFACTORS,2GROWTHFACTORRECEPTORS,,,,（二）跨膜的生長(zhǎng)因子受體,接受細(xì)胞外的生長(zhǎng)信號(hào)并將其傳入胞內(nèi)。受體的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)區(qū)具有特異的蛋白激酶活性，通過(guò)磷酸化作用使其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，增加激酶對(duì)底物的活性，促進(jìn)生長(zhǎng)信號(hào)在胞內(nèi)的傳遞。,例如,CSRC、CABL有酪氨酸特異的蛋白激酶活性。CMOS和RAF所編碼的激酶使絲氨酸和蘇氨酸殘基磷酸化。,非受體酪氨酸激酶SRC、ABL、絲氨酸/蘇氨酸激酶RAF，RAS蛋白HRAS、KRAS和NRAS及磷脂酶CRK產(chǎn)物。,（三）細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子,原癌基因的產(chǎn)物作為胞內(nèi)信息傳遞體系成員，或者通過(guò)影響第二信使作用，將接受到的信號(hào)由胞內(nèi)傳至核內(nèi)，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。,例如,（四）核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,某些癌基因表達(dá)蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)，與靶基因的順式調(diào)控元件相結(jié)合直接調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性。,例如,CFOS是一種即刻早期反應(yīng)基因IMMEDIATEEARLYGENE，IEG。作為傳遞信息的第三信使。,原癌基因BRAF所編碼的蛋白質(zhì)屬于絲/蘇氨酸激酶，是MAPK信號(hào)通路的重要組成分子，在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化等方面發(fā)揮重要作用。,四、癌基因及其靶向治療,約60的黑素瘤中BRAF發(fā)生突變，其第600位氨基酸從纈氨酸突變?yōu)楣劝彼幔╒600E）最為常見(jiàn)，導(dǎo)致BRAF的持續(xù)激活。,（一）BRAF,例如,維羅非尼,HER2是表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員，具有蛋白酪氨酸激酶活性，能激活下游信號(hào)通路，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡。,在30的乳腺癌中HER2基因發(fā)生擴(kuò)增或者過(guò)度表達(dá)，其表達(dá)水平與治療后復(fù)發(fā)率和不良預(yù)后顯著相關(guān)。,（二）HER2,例如,赫賽汀,慢性粒細(xì)胞白血病患者的9號(hào)染色體與22號(hào)染色體之間發(fā)生易位，從而融合產(chǎn)生了癌基因BCRABL，編碼的蛋白質(zhì)BCRABL具有持續(xù)活化的蛋白酪氨酸激酶活性，能促進(jìn)細(xì)胞增殖，并增加基因組的不穩(wěn)定性。,在95的慢性粒細(xì)胞白血病患者中都伴隨有BCRABL融合基因的產(chǎn)生，在一些急性淋巴白血病患者中也有發(fā)現(xiàn)。,（三）BCRABL,例如,伊馬替尼,腫瘤抑制基因TUMORSUPPRESSORGENE,第二節(jié),腫瘤抑制基因TUMORSUPPRESSORGENES,腫瘤抑制基因的概念,也稱(chēng)抗癌基因（ANTICANCERGENES）或抑癌基因，是調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長(zhǎng)和增殖的基因。當(dāng)這些基因不能表達(dá)，或者當(dāng)它們的產(chǎn)物失去活性時(shí)，細(xì)胞就會(huì)異常生長(zhǎng)和增殖，最終導(dǎo)致細(xì)胞癌變。反之，若導(dǎo)入或激活它則可抑制細(xì)胞的惡性表型。,早在20世紀(jì)20年代，TBOVERI就提出正常細(xì)胞中存在特異的抑制細(xì)胞增殖的因素，并假定與染色體有關(guān)。20世紀(jì)60年代，HHARRIS開(kāi)創(chuàng)了雜合細(xì)胞的致癌性研究AKNUDSON在研究視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RETINOBLASTOMA，RB）時(shí)發(fā)現(xiàn)，這種腫瘤的發(fā)生與RB基因的失活有關(guān)。,一、腫瘤抑制基因的發(fā)現(xiàn),細(xì)胞雜交試驗(yàn),,,二、腫瘤抑制基因的功能,常見(jiàn)的某些腫瘤抑制基因及其功能,（一）視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因（RB基因）,G0G1期,S期,E2F,,DNA,MRNA,DNA,三、腫瘤抑制基因失活促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展,RB磷酸化與細(xì)胞周期控制,視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RETINOBLASTOMA，RB）,兒童期就發(fā)病的眼科惡性腫瘤，貓眼。遺傳型多為雙側(cè)發(fā)病，發(fā)病早，有家族史。非遺傳型多為單側(cè)發(fā)病，且在2歲以后才發(fā)病。,（二）TP53,P53蛋白,解鏈酶,復(fù)制因子A,,P21蛋白,細(xì)胞停滯于G1期,,細(xì)胞調(diào)亡,DNA損傷,,P53蛋白,P53蛋白,P53的結(jié)構(gòu)及其在清除DNA損傷細(xì)胞中的作用,P53基因突變不僅失去野生型P53抑制腫瘤增殖的作用，而且突變本身又使該基因具備癌基因功能。突變的P53蛋白與野生型P53蛋白相結(jié)合，形成的這種寡聚蛋白不能結(jié)合DNA，使得一些癌變基因轉(zhuǎn)錄失控導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。,（三）PTEN,PTEN基因（PHOSPHATASEANDTENSINHOMOLOGDELETEDONCHROMOSOMETEN，第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因）是繼TP53基因后發(fā)現(xiàn)的另一個(gè)與腫瘤發(fā)生關(guān)系密切的腫瘤抑制基因。,PTEN通過(guò)阻斷PI3K/AKT信號(hào)通路抑制細(xì)胞的生長(zhǎng),,四、癌基因與腫瘤抑制基因在腫瘤發(fā)生中的作用特點(diǎn),在基因水平上，或通過(guò)外界致癌因素，或由于細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的惡化，突變基因數(shù)目增多，基因組變異逐步擴(kuò)大；在細(xì)胞水平上則要經(jīng)過(guò)永生化、分化逆轉(zhuǎn)、轉(zhuǎn)化等多個(gè)階段，細(xì)胞周期失控細(xì)胞的生長(zhǎng)特性逐步得到強(qiáng)化。結(jié)果組織從增生、異型變、良性腫瘤、原位癌發(fā)展到浸潤(rùn)癌和轉(zhuǎn)移癌。,（一）細(xì)胞癌變的多基因協(xié)同,63,HANAHANWEINBERG2000,,,,,SUMMARYOF30YEARSOFRESEARCH19712001,WWWNATURECOM/REVIEWS/CANCER,從基因角度認(rèn)識(shí)結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展,（二）細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵,癌基因和腫瘤抑制基因與細(xì)胞周期細(xì)胞周期調(diào)控體現(xiàn)在細(xì)胞周期驅(qū)動(dòng)和細(xì)胞周期監(jiān)控兩個(gè)方面，后者的失控與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系最為密切。細(xì)胞周期監(jiān)測(cè)機(jī)制由DNA損傷感應(yīng)機(jī)制、細(xì)胞生長(zhǎng)停滯機(jī)制、DNA修復(fù)機(jī)制和細(xì)胞命運(yùn)決定機(jī)制等構(gòu)成。,癌基因、腫瘤抑制基因與細(xì)胞凋亡細(xì)胞除了生長(zhǎng)、增生和分化等現(xiàn)象之外，還存在細(xì)胞死亡現(xiàn)象，即程序性細(xì)胞死亡或凋亡。有些腫瘤抑制基因的過(guò)量表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，而與細(xì)胞生存相關(guān)的癌基因的激活則可抑制凋亡，細(xì)胞凋亡異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的密切相關(guān)。,促進(jìn)正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的因素,生長(zhǎng)因子GROWTHFACTORS,第三節(jié),生長(zhǎng)因子GROWTHFACTOR,一類(lèi)由細(xì)胞分泌的、類(lèi)似于激素的信號(hào)分子，多數(shù)為肽類(lèi)（含蛋白類(lèi)）物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)與分化的作用。,,內(nèi)分泌ENDOCRINE旁分泌PARACRINE自分泌AUTOCRINE,作用模式,一、生長(zhǎng)因子的分類(lèi)和功能,（一）生長(zhǎng)因子的分類(lèi),（二）生長(zhǎng)因子的功能,生長(zhǎng)因子的生物學(xué)效應(yīng)主要表現(xiàn)在促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、促進(jìn)個(gè)體發(fā)育等方面。但是有些生長(zhǎng)因子具有雙重調(diào)節(jié)作用或負(fù)調(diào)節(jié)作用。同一生長(zhǎng)因子對(duì)不同細(xì)胞的作用有所不同一種細(xì)胞也可受不同生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)具有負(fù)調(diào)節(jié)作用的生長(zhǎng)因子比較少，人們通常把這種負(fù)調(diào)節(jié)因子（NEGATIVEGROWTHFACTOR）稱(chēng)為細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子。,產(chǎn)生相應(yīng)第二信使,胞內(nèi)相關(guān)蛋白質(zhì)被磷酸化,與膜受體結(jié)合,酪氨酸激酶活化,蛋白激酶活化,核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活化,基因轉(zhuǎn)錄,與胞內(nèi)受體結(jié)合,,,,,,,,生長(zhǎng)因子受體復(fù)合物，活化相關(guān)基因,,,,二、生長(zhǎng)因子作用機(jī)制,腫瘤的發(fā)生除了與癌基因的異?；罨约澳[瘤抑制基因的異常失活密切相關(guān)外，其與生長(zhǎng)因子及其受體的高度活化亦緊密相關(guān)，如EGF、VEGF、TNF及IGF、PDGF等的過(guò)度表達(dá)能導(dǎo)致相應(yīng)的腫瘤發(fā)生。,三、生長(zhǎng)因子與疾病,（一）生長(zhǎng)因子與腫瘤,

簡(jiǎn)介：第七屆全國(guó)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國(guó)臨床第七屆全國(guó)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國(guó)臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)暨會(huì)員代表大會(huì)研討會(huì)暨會(huì)員代表大會(huì)會(huì)議住宿和會(huì)后旅游回執(zhí)單會(huì)議住宿和會(huì)后旅游回執(zhí)單（所有參會(huì)人員每人必填一份）（所有參會(huì)人員每人必填一份）姓名性別性別電話電話EMAILEMAIL工作單位工作單位職稱(chēng)職稱(chēng)職務(wù)職務(wù)是否參加會(huì)后旅游（請(qǐng)?jiān)谑欠駞⒓訒?huì)后旅游（請(qǐng)?jiān)凇笆恰被颉胺瘛崩锩娲蚶锩娲颉κ欠袷欠駭y帶家屬一起參加會(huì)后旅游，如攜帶，具體是否攜帶家屬一起參加會(huì)后旅游，如攜帶，具體幾人，請(qǐng)寫(xiě)明。如有兒童請(qǐng)告知，具體年齡。如幾人，請(qǐng)寫(xiě)明。如有兒童請(qǐng)告知，具體年齡。如兒童兒童占床則按照成人價(jià)格執(zhí)行。占床則按照成人價(jià)格執(zhí)行。成人（成人（）人）人；兒童（兒童（）人）人會(huì)后旅游請(qǐng)選擇以下兩條旅游線路（具體的旅游附后，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀）會(huì)后旅游請(qǐng)選擇以下兩條旅游線路（具體的旅游附后，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀）AA青海湖、塔爾寺一日游青海湖、塔爾寺一日游BB圣地拉薩三日游圣地拉薩三日游8月1414日會(huì)議結(jié)束，日會(huì)議結(jié)束，8月1515日開(kāi)始旅游，參會(huì)人員如需延住酒店，請(qǐng)務(wù)必在橫線上注日開(kāi)始旅游，參會(huì)人員如需延住酒店，請(qǐng)務(wù)必在橫線上注明，延住的天數(shù)，以便會(huì)務(wù)組安排。明，延住的天數(shù)，以便會(huì)務(wù)組安排。會(huì)議期間酒店選擇如下（備注請(qǐng)務(wù)必在會(huì)議期間酒店選擇如下（備注請(qǐng)務(wù)必在20112011年6月1515日之前回執(zhí)確認(rèn)，請(qǐng)選擇具日之前回執(zhí)確認(rèn)，請(qǐng)選擇具體住宿的酒店，體住宿的酒店，住宿時(shí)的住宿時(shí)的8月幾號(hào)到幾號(hào)，如一人住雙標(biāo)間要說(shuō)明，不說(shuō)明將安排合住。月幾號(hào)到幾號(hào)，如一人住雙標(biāo)間要說(shuō)明，不說(shuō)明將安排合住。青海賓館（五星）青海賓館（五星）720720元間天；天；單標(biāo)間（單標(biāo)間（號(hào)到號(hào)到號(hào)）雙標(biāo)間（）雙標(biāo)間（號(hào)到號(hào)到號(hào)）神旺大酒店（準(zhǔn)五）神旺大酒店（準(zhǔn)五）580580元間天；天；單標(biāo)間（單標(biāo)間（號(hào)到號(hào)到號(hào)））雙標(biāo)間（雙標(biāo)間（號(hào)到號(hào)到號(hào)）建銀賓館（四星）建銀賓館（四星）480480元間天；天；單標(biāo)間（單標(biāo)間（號(hào)到號(hào)到號(hào)））雙標(biāo)間（雙標(biāo)間（號(hào)到號(hào)到號(hào)）備注備注1、以上回執(zhí)單務(wù)必于2011年6月15日之前全部填寫(xiě)完畢，回傳至以下信箱EMAILGUO_08282、7和8月份是青海、西藏的旅游旺季，在這個(gè)旅游季節(jié)里，酒店用房、用車(chē)非常緊張，請(qǐng)務(wù)必按照以上時(shí)間內(nèi)回執(zhí)，過(guò)期不侯；3、后附旅游線路兩條。8月1717日布達(dá)拉宮日布達(dá)拉宮大昭寺大昭寺八角街八角街含早餐含早餐中餐中餐晚餐晚餐宿拉薩★★★★上午游覽世界上海拔最高的古代宮堡式建筑群布達(dá)拉宮布達(dá)拉宮【游覽時(shí)間1小時(shí)，具體參觀和游覽時(shí)間以布達(dá)拉宮管委會(huì)規(guī)定時(shí)間為準(zhǔn)】。隨著歷史的變遷，布達(dá)拉宮成為歷代達(dá)賴(lài)?yán)锏鸟v錫地和政教權(quán)利中心，以其極高的歷史價(jià)值和曠世寶藏聞名于世。下午游覽位于拉薩古城中心、藏傳佛教信徒以及全世界佛教徒心中的圣地大昭寺大昭寺【游覽時(shí)間50分鐘】，近距離體驗(yàn)信徒們五體投地的虔誠(chéng)，體驗(yàn)獨(dú)特的藏族宗教風(fēng)俗。隨后跟隨人潮洶涌的當(dāng)?shù)匦磐揭坏啦饺氚私墙质止に嚻肥袌?chǎng)自由購(gòu)物【游覽時(shí)間60分鐘】。晚上若有興趣可自費(fèi)觀看藏式歌舞表演及品嘗藏式風(fēng)味餐【觀看時(shí)間120分鐘】，感受舊時(shí)貴族宮廷式生活。然后可自由活動(dòng)到布達(dá)拉宮音樂(lè)廣場(chǎng)觀看炫麗的布宮夜景，自行返回酒店休息。【溫馨提示】當(dāng)日還是高原適應(yīng)期，身體根據(jù)每人情況不同多少有些不適，屬正?，F(xiàn)象，只要保持樂(lè)觀心態(tài)就可度過(guò)。因初進(jìn)高原，行程安排相對(duì)較為輕松，景點(diǎn)均在市內(nèi)，帶好您的相機(jī)，時(shí)時(shí)準(zhǔn)備拍下難忘時(shí)刻。參觀布達(dá)拉宮較為辛苦。八角街手工藝品市場(chǎng)購(gòu)物時(shí)導(dǎo)游會(huì)提示購(gòu)物注意事項(xiàng)，以避免因在景區(qū)購(gòu)物發(fā)生不必要的不愉快。今天會(huì)對(duì)神秘的藏族文化及人文風(fēng)情進(jìn)行一個(gè)全方位的了解。8月1818日拉薩日拉薩各地各地含午餐上午參觀羅布林卡，西藏博物館，下午乘飛機(jī)離開(kāi)拉薩（可前往成都廣州西安北京上海等地），結(jié)束愉快的西藏之旅。注注此此行行程程可可選選擇擇乘乘火火車(chē)車(chē)進(jìn)進(jìn)藏藏，，行行程程增增加加一一天天為為四四日日。。行程優(yōu)惠價(jià)2400元（不含旅游結(jié)束后的返程機(jī)票）報(bào)報(bào)價(jià)價(jià)含含1、酒店酒店全程三星標(biāo)準(zhǔn)雙人間；；2、用餐用餐早餐酒店用，3正正餐八菜一湯十人一桌，如有個(gè)人用餐不習(xí)慣者可自備佐；3、旅游車(chē)旅游車(chē)全程精選經(jīng)驗(yàn)豐富專(zhuān)業(yè)旅游車(chē)司機(jī)正規(guī)手續(xù)齊全含全額保險(xiǎn)旅游車(chē)；4、門(mén)票門(mén)票景區(qū)首道大門(mén)票【行程內(nèi)注明自費(fèi)項(xiàng)目及景點(diǎn)游客自理】；5、導(dǎo)游導(dǎo)游全程優(yōu)秀持證導(dǎo)游服務(wù)；6、西寧、西寧拉薩硬臥火車(chē)票；含全程保險(xiǎn)費(fèi)；不含旅游結(jié)束后拉薩返拉薩硬臥火車(chē)票；含全程保險(xiǎn)費(fèi)；不含旅游結(jié)束后拉薩返程火車(chē)票和機(jī)票費(fèi)用?？腿俗杂喎党虣C(jī)票。不含火車(chē)上客人用程火車(chē)票和機(jī)票費(fèi)用。客人自訂返程機(jī)票。不含火車(chē)上客人用餐，費(fèi)用自理。餐，費(fèi)用自理。備注備注1、西藏旅游結(jié)束后，拉薩飛往全國(guó)各地的航班機(jī)票由客人自訂。、西藏旅游結(jié)束后，拉薩飛往全國(guó)各地的航班機(jī)票由客人自訂。2、旅游報(bào)名截止日期、旅游報(bào)名截止日期20112011年6月1515日旅游小貼士旅游小貼士青海、西藏兩地精青海、西藏兩地精華景點(diǎn)介景點(diǎn)介紹塔爾寺