簡介：點擊查看更多脊髓膠質(zhì)細(xì)胞慢性疼痛和嗎啡鎮(zhèn)痛耐受新靶點分子的生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文成人急性髓性白血病細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)表達(dá)的初步研究姓名王蕾申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師哈力達(dá)亞森200909新疆醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位論文２MOLECULARCYTOGEICABNMALITIESINADULTPATIENTSWITHACUTEMYELOIDLEUKEMIAPOSTGRADUATEWANGLEISUPERVISHALIDAYASENPARAPROFESSABSTRACTOBJECTIVETHEINCIDENCEDEVELOPMENTOFTUMSWHICHMAYBECLOSELYRELATEDTOCYTOGEICABNMALITIESACUTEMYELOIDLEUKEMIAAMLISAMALIGNANTTUMOFHEMOPOIETICSYSTEMITHASBEENSTUDIEDTHATTHEMAJITYOFPATIENTSWITHLEUKEMIAHAVENONROMCHROMOSOMEABERRATIONSFUSIONGENEWHICHMAYPROVIDEIMPTANTINFMATIONFTYPINGPROGNOSTICEVALUATIONOPTIONSOFTREATMENTEVENTHERESEARCHESOFPATHOGENESISTHEPURPOSEOFTHISARTICLEISTOSTUDYTHEDISTRIBUTIONOFKARYOTYPETHERELATIONSHIPBETWEENCHROMOSOMEABNMALITIESPROGNOSTICINAMLACCDINGTOKNOWNDOMESTICINTERNATIONALHIERARCHICALCYTOGEICCLASSIFICATIONMETHODSCYTOGEICEXAMINATIONOFBONEMARROWCELLSWASPERFMEDBYSHTTURNCULTUREMETHODGBINGTECHNIQUEWASUSEDFKARYOTYPEANALYSISAML1ETOFUSIONGENEPMLRARAALPHAFUSIONGENEWEREANALYZEDRESPECTIVELYBYRQPCRIN95AMLPATIENTS64PATIENTSACCEPTEDTHETWOCOURSEOFTREATMENTTHEIRRESPONSESURVIVALRATEWEREANALYZEDRESULTSKARYOTYPICABNMALITIESWEREDETECTEDIN50OF95PATIENTS526THEEXPRESSIONRATEINFABSUBTYPESWEREM3923M2447M4214M150M51676CASESWERENUMERICALABNMALITIES24CASESWITHVARIANTOFT15；1715CASESWITHVARIANTOFT8；12WEREDETECTEDDMANTVARIANCETRANSLOCATIONSWEREFOUNDWHENAPPLYINGRQPCRTECHNIQUETODETECTAML1ETOFUSIONGENEPMLRARAFUSIONGENEWHICHWEREASSOCIATEDWITHFABSUBTYPESM2M3TOANALYZETHEREMISSIONRATEACCEPTEDTHETWOCOURSEOFTREATMENTABOUTTHE64PATIENTSEXCEPTM3ITCLASSIFYTHREEGROUPSACCDINGTOCYTOGEICSTHEHIGHRISKGROUPWAS50MEDIATERISKGROUPWAS745LOWRISKWAS889THEREMISSIONRATEWERESTATISTICALLYDIFFERENCE（P005）INTHREEGROUPSCONCLUSIONCHROMOSOMEANALYSISDETECTIONOFFUSIONGENESAREHELPFULINTHEDIAGNOSISOFAMLTHEDIFFERENTIATIONOFAMLSUBTYPETREATMENTGEICABNMALITYISAFACTINFLUENCESTHETREATMENTRESPONSEOFACUTELEUKEMIAKEYWDSACUTEMYELOIDLEUKEMIA；CHROMOSOME；FUSIONGENES；PROGNOSIS

簡介：為進(jìn)一步探討ACEI和ATRA及其聯(lián)合應(yīng)用對于心血管疾病的作用及其作用機理我們采用培養(yǎng)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞株ECV304作為研究對象觀察兩種藥物及其聯(lián)合應(yīng)用對于AMGII作用下導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞變化的作用和影響從而在細(xì)胞和分子生物學(xué)水平上探討藥物卡托普利和氯沙坦聯(lián)合應(yīng)用對于內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用以及對于心血管疾病治療作用的可能機制1、培養(yǎng)條件下的血管內(nèi)皮細(xì)胞在ANGII作用下細(xì)胞凋亡率明顯增加且在一定的范圍內(nèi)呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性和時間依賴性同時細(xì)胞凋亡調(diào)控基因、多種細(xì)胞因子MRNA的表達(dá)、細(xì)胞RASRA、ANGII、ALD的表達(dá)也發(fā)生了明顯的變化并與ANGII的濃度和作用時間均有一定的關(guān)系2、ACEI和ATLRA兩類藥物單獨應(yīng)用及合用時對內(nèi)皮細(xì)胞因ANGII刺激導(dǎo)致的凋亡、凋亡調(diào)控基因、多種細(xì)胞因子MRNA表達(dá)及細(xì)胞RAS表達(dá)的變化有較好的干預(yù)作用而且卡托普利和氯沙坦合用的作用效果明顯好于兩種藥物的單獨應(yīng)用在相同劑量下卡托普利的作用強于氯沙坦3、兩藥合用在較小的劑量下即可發(fā)揮較強的作用提示兩藥合用的小劑量原則這樣既可發(fā)揮良好的治療效果又可減少藥物的不良反應(yīng)

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文幕上星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MR表現(xiàn)的分子生物學(xué)相關(guān)因素的研究姓名張輝申請學(xué)位級別博士專業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師周康榮2002426第二部分幕上星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤胍征象與微血管密度的相關(guān)性研究，目的探討星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MR影像學(xué)特征與腫瘤微血管密度的相關(guān)性，研究MRI對該腫瘤生物學(xué)行為及惡性程度的評估價值OF’，材料與方法對88例術(shù)前MR檢查及術(shù)后病理證實的幕上星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，測定微血管密度MICROVESSELDENSITY，MVD。按照WHO腦腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)將星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤分為三組低級別星形細(xì)胞瘤LGA49例、間變性星形細(xì)胞瘤AA23例和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤GBM16例。LO例正常成人腦組織作為對照組。磁共振常規(guī)頭顱掃描后行DDDTPA增強掃描。在MR圖像上測量腫瘤大小、形狀、囊變壞死、信號均勻性、穿越中線、占位效應(yīng)、邊緣界線、出血、瘤周水腫范圍及強化程度。結(jié)果星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MVD平均值為35731565，正常對照組MVD值為1410527，兩組間比較差異顯著P001。星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤大小、形狀與MVD比較，無統(tǒng)計學(xué)差異P005。隨著腫瘤病理級別的增高，微血管形態(tài)由以竇狀擴張為主，逐漸轉(zhuǎn)變成以芽狀或細(xì)索狀血管為主，部分出現(xiàn)球狀血管叢。MVD值亦隨之增大，GBM組MVD明顯高于AA、LGA組，三組之間比較差異顯著PO01。MR圖像中，星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤壞死、出血、信號不均勻、穿越中緣關(guān)系密切P005，P001。聲一一萬結(jié)論星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤MVD除了與腫瘤大瘤周水腫及占位效應(yīng)、強化程度與MVD小、形態(tài)無關(guān)聯(lián)外，與腫瘤的囊變壞死、意義。粼詞唾篡鬻渾移螂度免疫組化技術(shù)廠相關(guān)性研究，1／

簡介：背景和目的急性血栓性肺栓塞是臨床常見病嚴(yán)重威脅著患者的健康和生命提高該病的治愈率改善患者的預(yù)后是臨床工作者面臨的重大問題臨床研究發(fā)現(xiàn)雖經(jīng)積極的抗凝和溶栓治療部分肺栓塞患者肺動脈內(nèi)的栓子仍未能完全溶解以至發(fā)生慢性血栓栓塞性肺動脈高壓嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量乃至危及生命因此探討影響肺動脈內(nèi)血栓溶解的因素顯得尤為重要研究發(fā)現(xiàn)深部靜脈血栓和肺栓塞的栓子本身具有溶栓抵制的特性主要是基于栓子內(nèi)RAI1水平的升高另一方面栓塞局部環(huán)境內(nèi)凝血和纖溶因素的變化可能對栓子的溶解也起著一定作用該研究從凝血系統(tǒng)的啟動因素組織因子TF及其抑制物TFPI以及纖維系統(tǒng)中主要的纖溶酶原激活物TPA及其抑制物PAI1著手研究栓塞肺動脈組織內(nèi)各因子MRNA的表達(dá)水平探討栓塞局部環(huán)境凝血和纖溶的變化及該變化對血栓轉(zhuǎn)歸的影響同時研究肺栓塞對全身其它組織凝血和纖溶帶來的變化為臨床治療提供參考

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文特異性下調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP94對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究姓名陳瑤申請學(xué)位級別博士專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師宋今丹200331功能，還有助于理解UPR通路的變化?；诖?，我們選擇了人大腸癌細(xì)胞株CCL229作為研究對象，通過特異性核酶打靶的方式，下調(diào)細(xì)胞中GRP94的表達(dá)水平，觀察其對人大腸癌細(xì)胞某些生物學(xué)特性及UPR通路的影響，加深對GRP94、UPR和腫瘤這三者間關(guān)系的了解。方法1穩(wěn)定下調(diào)GRP94的人大腸癌細(xì)胞克隆株的構(gòu)建1分別對含有特異性打靶GRP94核酶的質(zhì)粒PRE／RSVRIBOL和對照組質(zhì)粒PRE／RSV進(jìn)行小量提取、PVULI酶切鑒定?！?測定PRC／RSVRIBOL和PRE／RSV的基因序列，以質(zhì)粒DNA大量提純方法獲得純化的質(zhì)粒。3按照FUGENE?！?TRANSFECTIONREAGENT說明書分別用兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人大腸癌細(xì)胞CCL229。4分別通過RTPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測GRP94的表達(dá)情況，以此鑒定轉(zhuǎn)染成功的陽性克隆株。2檢測GRP94表達(dá)水平下降對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響1光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)、貼壁狀態(tài)、聚集生長能力和生長速度。2繪制細(xì)胞生長曲線，計算細(xì)胞群體倍增時間。3檢測細(xì)胞聚集能力，計算細(xì)胞的聚集度。4流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布。3檢測GRP94表達(dá)水平下降對相關(guān)分子伴侶GRP78和PDI的影響1分別通過RTPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測分子伴侶GRF78的表達(dá)情況。2分別通過LITPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測折疊酶PDI的表達(dá)情況。4檢測GRP94表達(dá)水平下降對UPR中CHOP通路的影響1利用WESTERNBLOT和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測UPR通路特異的，與程序性死亡密切相關(guān)的CHOP蛋白表達(dá)水平。5檢測穩(wěn)定下調(diào)GRP94表達(dá)水平的細(xì)胞株對化療藥物的敏感性2

簡介：原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名單塹止日期砂華沙、，‘關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名導(dǎo)師簽名工嘎級日期WQS山東大學(xué)博士論文兒于出生時留取臍血檢測HBVDNA。入選研究的孕婦，均符合2000年全國肝炎會議擬定的無癥狀乙肝病毒攜帶者診斷標(biāo)準(zhǔn)。早產(chǎn)兒、低體重兒、窒息兒及有妊娠期出血史產(chǎn)婦所分娩的新生兒排除本研究。孕婦外周血和新生兒臍血血清中HBVDNA均陽性者作為研究組，孕婦外周血HBVDNA陽性但新生兒臍血血清中HBVDNA陰性者作為對照組，用PCR微板核酸雜交一ELISA法行HBV基因分型。所有新生兒于出生后12小時內(nèi)及第14天各注射乙肝免疫球蛋白HBIG200U，出生24小時內(nèi)、1月及6月齡共接種3次乙肝疫苗，對新生兒及嬰兒進(jìn)行前瞻性隨訪研究，由產(chǎn)婦自愿選擇母乳喂養(yǎng)或人工喂養(yǎng)，分別于嬰兒7月及12個月時隨訪，檢測嬰兒外周靜脈血HBVDNA及乙肝血清標(biāo)志物，同時詢問嬰兒喂養(yǎng)方法，母乳喂養(yǎng)1個月以上者為母乳喂養(yǎng)組，從未行母乳喂養(yǎng)的為人工喂養(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)少于1月者排除本研究。嬰兒7月時未感染乙肝但抗一HBS陰性者給予乙肝疫苗5119加強注射。結(jié)果1乙肝血清學(xué)標(biāo)志物HBSAGHBEAG及抗一HB。均陽性孕婦血清中HBVDNA均陽性，陽性率為1004949HBSAG與HBEAG陽性者HBVDNA陽性率亦為100A1616HBSAG及抗一HBC陽性者，HBVDNA陽性率為54171324HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者HBVDNA陽性率較低，僅為4173N2。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例HBVDNA陽性。2HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率最高，為1837949HBSAG與HBEAG陽性及HBSAG與抗一HBC陽性者次之，分別為1250216及12503124HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者為133175。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例新生兒臍血陽性。HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者有統(tǒng)計學(xué)意義Z29415P0002HBSAG與抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學(xué)意義P0043其余各組對比無統(tǒng)計學(xué)意義。315例臍血HBVDNA陽性的新生兒11例發(fā)生于HBEAG陽性的孕婦，陽性率為16921165，僅4例發(fā)生于HBEAG陰性的孕婦，陽性率為377O3774106HBEAG陽性與HBEAG陰性孕婦所生新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學(xué)意義X28706P0003。

簡介：目的研究溫針灸治療膝骨關(guān)節(jié)炎虛寒證的臨床療效、并探討其基因表達(dá)譜等方面的生物學(xué)基礎(chǔ)。方法1臨床證候及療效研究選取符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)的膝骨關(guān)節(jié)炎，中醫(yī)辨證為虛寒證的66例患者，隨機分為33例溫針灸組與33例針刺組。取關(guān)元、氣海和足三里為主穴，膝眼、陽陵泉為配穴，治療14天。用疼痛量表和虛寒證量表對治療前后分別計量評分，以評價兩種療法的療效。2生理學(xué)研究選擇10例骨關(guān)節(jié)炎虛寒證患者與10例正常人，從植物神經(jīng)系數(shù)、交感皮膚反應(yīng)、體表溫度、植物神經(jīng)反射等方面進(jìn)行比較研究。3基因表達(dá)譜研究選取骨關(guān)節(jié)炎虛寒證患者8例與8例正常人作基因表達(dá)譜的深入研究，又從中選出3例顯效患者作治療前后的基因芯片比較?；蛐酒瑢嶒灧椒槿⊙?0ML，提取MRNA，逆轉(zhuǎn)錄為CDNA，用CY3和CY5兩種熒光物質(zhì)分別標(biāo)記，制備成探針，在22000點的基因芯片上進(jìn)行雜交，通過計算機掃描后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。討論本研究從臨床和基礎(chǔ)角度對溫針灸治療骨關(guān)節(jié)炎虛寒證的療效進(jìn)行了分析和探討，溫針灸和針刺療法均能緩解膝關(guān)節(jié)炎的疼痛，改善膝關(guān)節(jié)的功能障礙，但溫針灸療效明顯優(yōu)于單純針刺，溫針灸是治療膝骨關(guān)節(jié)炎虛寒證的有效療法；生理學(xué)基礎(chǔ)研究提示了植物神經(jīng)與骨關(guān)節(jié)炎虛寒證有一定的相關(guān)性；從微觀的差異基因表達(dá)譜探討宏觀虛寒證證候及個案的分子療效分析，提示了溫針灸治療骨關(guān)節(jié)炎虛寒證與調(diào)節(jié)免疫、代謝相關(guān)基因的異常表達(dá)有關(guān)。

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文兩種宿主來源毛首線蟲形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)的分類研究姓名斯健申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病原生物學(xué)指導(dǎo)教師童新華20050501重慶醫(yī)科大學(xué)碩E研究生學(xué)位論文符號說明1符號列表毫升微升兄毫克納克兆帕分鐘秒毫克／毫升攝氏度毫米微米摩爾ISB毫摩爾／升毫摩爾／升吸光度值伏轉(zhuǎn)／分鐘質(zhì)量／體積分子量向Ⅲ。嘴唱‰疵L|咖℃一岬一一刪∞V呻州刪

簡介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAI封閉內(nèi)源性CMYC對鼻咽癌細(xì)胞58F生物學(xué)特性及分子機制影響的初步研究姓名牛朝霞申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李桂源20070501中文摘要CONTROL細(xì)胞系。通過RTPCR齊IWESTEMBLOT鑒定CMYC基因的封閉效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，I能有效抑制CMYC的高表達(dá)，效果達(dá)70％75％；II的效果不明顯。因此我們選擇抑制效果最佳的58F／SIRNACMYCI／C3口D性單克隆細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實驗。【抑制CMYC基因高表達(dá)對58F細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變】將58F、58F／SIRNACONTROL和58F／SIRNACMYCI／C3進(jìn)行透射電鏡掃描，結(jié)果顯示抑制CMYC表達(dá)的58F細(xì)胞表面微絨毛逐漸脫落，稀少；部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)趨于正?；麧{內(nèi)線粒體數(shù)量中等，結(jié)構(gòu)較清晰，少量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；部分細(xì)胞趨于靜止?fàn)顟B(tài)，胞漿內(nèi)線粒體嵴丟失或呈空泡變，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張。空白對照及未處理58F細(xì)胞表面微絨毛較豐富，胞漿內(nèi)線粒體數(shù)量較多，結(jié)構(gòu)較清晰，核漿比例嚴(yán)重失調(diào)。表明封閉CMYC的高表達(dá)有利于細(xì)胞間的緊密接觸，增強接觸抑制，不利于細(xì)胞的快速生長，從而逆轉(zhuǎn)58F細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為?！疽种艭MYC高表達(dá)對58F細(xì)胞生長的影響】將58F、58F／SIRNACONTROL和58F／SIRNACMYCI／C3細(xì)胞分別接種200個到平板中，靜止培養(yǎng)14天左右直至肉眼可見克隆形成，終止培養(yǎng)，觀察每組細(xì)胞的克隆形成數(shù)并計算克隆形成率；分別取O5104個細(xì)胞接種于96孔板，每種細(xì)胞接種8孔，連續(xù)6天在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔吸光度值，進(jìn)行MTT檢測；分別取IXL04個細(xì)胞接II

簡介：心肌肥厚是心臟對多種疾病包括高血壓、機械壓力負(fù)荷、心肌梗塞、心律失常、內(nèi)分泌機能紊亂以及心肌收縮蛋白基因突變而產(chǎn)生的適應(yīng)性病理反應(yīng)。在疾病早期，因心臟作功增加可引起代償性心肌肥厚反應(yīng)。持續(xù)性的心肌肥厚能夠引起擴張性心肌病、心律失常、心力衰竭甚至猝死。心肌肥厚是引起心血管疾病發(fā)病率和病死率的獨立危險因素。研究發(fā)現(xiàn)在心肌肥厚時左心室重量普遍增高，心血管事件發(fā)生率是無心肌肥厚者的24倍。心肌肥厚不僅是一個病理生理過程，而更是一個影響其短期和長期預(yù)后的失代償性變化。它的不可逆性進(jìn)展可以直接導(dǎo)致心力衰竭。目前臨床上用于治療心肌肥厚的治療藥物主要有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑和鈣離子通道阻滯劑，但皆因存在不同程度的副作用而使其臨床應(yīng)用受到一定限制。而心肌肥厚的治療是一個長期的過程，因此尋找一些療效好而毒副作用低的藥物顯得十分必要。丹參酮ⅡA是中藥丹參的主要脂溶性成分。目前已發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA可以減輕、逆轉(zhuǎn)高血壓左心室肥厚，但其具體作用機制尚未闡明。本研究擬在腹主動脈縮窄的高血壓大鼠上構(gòu)建心肌肥厚模型，將丹參酮ⅡA與經(jīng)典的抗心肌肥厚藥物血管緊張素1型受體拮抗劑纈沙坦比較，以探討丹參酮ⅡA逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的分子生物學(xué)機制。目的研究丹參酮ⅡA對腹主動脈縮窄術(shù)后大鼠左室心肌肥厚的作用。方法40只健康SD大鼠，行腹主動脈縮窄術(shù)建立高血壓左室心肌肥厚模型，另取8只大鼠行假手術(shù)。術(shù)后4周將手術(shù)大鼠隨機分為心肌肥厚組、丹參酮低劑量組10MGKGD腹腔注射、丹參酮高劑量組20MGKGD腹腔注射及纈沙坦組10MGKGD灌胃。用藥8周后通過超聲心動圖測定左室后壁、室間隔的厚度及左室射血分?jǐn)?shù)EF；取左心室組織檢測左心室質(zhì)量指數(shù)LEFTVENTRICULARMASSINDEX，LVMI、病理切片HE染色測量心肌纖維直徑MYOCARDIALFIBERDIMENSION，MFD。結(jié)果1心肌肥厚組、丹參酮組高、低劑量的血壓顯著高于假手術(shù)組及纈沙坦組P＜001，丹參酮高、低劑量組及心肌肥厚組之間無統(tǒng)計學(xué)差異P﹥005，纈沙坦組的血壓值降至正常、但仍明顯高于假手術(shù)組P＜005。2丹參酮高、低劑量組和纈沙坦組的室間隔厚度均高于假手術(shù)組P＜005，顯著低于心肌肥厚組P＜001；丹參酮兩組的室間隔厚度無差異P﹥005，但高于纈沙坦組P＜005。3丹參酮低劑量、高劑量組及纈沙坦組之間左室后壁值數(shù)據(jù)沒有顯著性差異P005，此三組左室后壁值均明顯低于心肌肥厚組P＜001，但尚未恢復(fù)至正常水平P＜005。4所有各組的EF值均在正常值范圍60％，尚未表現(xiàn)出心功能衰竭。但心肌肥厚組的EF值小于其他各組P＜005，丹參酮組的EF也小于纈沙坦組P＜005。5丹參酮低劑量和高劑量組間LVMI和MFD沒有顯著性差異P005，纈沙坦組和丹參酮各組的LVMI、MFD均高于假手術(shù)組P＜005，顯著低于心肌肥厚組P＜001；丹參酮兩組的LVMI、MFD均高于纈沙坦組P＜005。結(jié)論丹參酮ⅡA對心肌肥厚的逆轉(zhuǎn)作用是非血壓依從性的。丹參酮ⅡA與血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑纈沙坦均可阻止、逆轉(zhuǎn)高血壓心肌肥厚的發(fā)展，但其作用弱于纈沙坦。第二部分丹參酮ⅡA對腹主動脈縮窄大鼠肥厚心肌血管緊張素受體的影響目的通過研究丹參酮ⅡA對腹主動脈大鼠肥厚心肌血管緊張素受體及細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的影響，探討丹參酮ⅡA逆轉(zhuǎn)高血壓左心室肥厚的分子生物學(xué)機制。方法取各組大鼠的左心室組織，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR、免疫印記法WESTERNBLOTTING分別檢測AT1、AT2受體MRNA和蛋白的表達(dá)水平。利用激光共聚焦顯微鏡測定心肌細(xì)胞內(nèi)CA2濃度的變化。結(jié)果1心肌肥厚組的AT1MRNA和蛋白的表達(dá)顯著高于其他各組P＜001；丹參酮ⅡA高、低劑量組間無差異P﹥005，丹參酮ⅡA組高于纈沙坦組P＜005；丹參酮ⅡA組和纈沙坦組的AT1基因表達(dá)均未降至假手術(shù)組水平P＜005。2纈沙坦組的AT2MRNA和蛋白表達(dá)水平較其他各組升高P＜005，其他各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異P﹥005。3心肌肥厚組細(xì)胞內(nèi)CA2I明顯高于其他各組P＜001；丹參酮高劑量組與假手術(shù)組之間無統(tǒng)計學(xué)差異P﹥005；纈沙坦組和丹參酮低劑量組仍高于假手術(shù)組和丹參酮高劑量組P＜005；丹參酮低劑量組細(xì)胞內(nèi)鈣濃度與纈沙坦組之間無差異P﹥005。結(jié)論丹參酮ⅡA和纈沙坦均可通過下調(diào)AT1基因表達(dá)、阻止心肌細(xì)胞的鈣離子內(nèi)流發(fā)揮逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的作用，AT2有可能參與了纈沙坦降低血壓、逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的作用。第三部分丹參酮IIA對腹主動脈縮窄高血壓大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶的影響目的通過研究丹參酮ⅡA對腹主動脈縮窄大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶的影響，探討丹參酮ⅡA逆轉(zhuǎn)高血壓左心室肥厚的分子生物學(xué)機制。方法取各組大鼠的左心室組織，利用硝酸還原酶法測定心肌組織的NO含量，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR、免疫印記法WESTERNBLOTTING分別檢測ENOS的基因表達(dá)水平和蛋白激酶CPKC的活性。結(jié)果1假手術(shù)組的心肌組織NO含量明顯高于其他各組P＜001；丹參酮高、低劑量組與纈沙坦組之間無統(tǒng)計學(xué)差異P﹥005，但此三組的NO含量明顯高于心肌肥厚組P＜001。2心肌肥厚組的ENOSMRNA和蛋白表達(dá)水平明顯低于其他各組P＜001，纈沙坦組低于假手術(shù)組和丹參酮組P＜005，丹參酮高、低劑量組與假手術(shù)組之間無差異P﹥005。3心肌肥厚組的PKC蛋白水平明顯高于其他各組P＜001，纈沙坦組低于假手術(shù)組和丹參酮組P＜005，丹參酮高、低劑量組與假手術(shù)組之間無差異P﹥005。結(jié)論心肌局部的NONOS系統(tǒng)與心肌肥厚的病理過程密切相關(guān)。丹參酮ⅡA可能通過抑制PKC的蛋白活性、促進(jìn)心肌局部ENOS的基因表達(dá)和內(nèi)源性NO的產(chǎn)生，發(fā)揮其逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的藥理作用。

簡介：中圖分類號UIC學(xué)校代碼10055密級公開尚媳夫溪博士學(xué)位論文重要塾痘螢麥畫拉厘絲公王生塑堂丑究GENETICBASISOFBACTERIALSURFACEANTIGENSINSALMONEHNANDFEOLI論文作者塑逵申請學(xué)位堡堂擅±學(xué)科專業(yè)邀生絲堂．答辯委員會主席撻敦LS26521指導(dǎo)教師王墨熬握培養(yǎng)單位生金型堂堂瞳研究方向紲董基固組堂皇遂堡堂評閱人筮建亙毖玉蠱薟熟揚遄馥王亟南開大學(xué)研究生院二OO年四月南開大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本學(xué)位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻(xiàn)的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名胡遺2010年6月1日非公開學(xué)位論文標(biāo)注說明根據(jù)南開大學(xué)有關(guān)規(guī)定，非公開學(xué)位論文須經(jīng)指導(dǎo)教師同意、作者本人申請和相關(guān)部門批準(zhǔn)方能標(biāo)注。未經(jīng)批準(zhǔn)的均為公開學(xué)位論文，公開學(xué)位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制≤2年口秘密≤10年口機密420年保密期限20年月日至20年月日審批表編號批準(zhǔn)日期20年月日限制★2年最長2年，可少于2年秘密★10年最長5年，可少于5年機密★20年最長10年，可少于10年

簡介：目的探討臨床常見曲霉菌（煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、土曲霉、構(gòu)巢曲霉）對經(jīng)典的抗真菌藥物伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B和新的抗真菌藥物泊沙康唑、卡泊芬凈的體外敏感性建立應(yīng)用實時熒光PCR技術(shù)將臨床常見曲霉菌鑒定至種的水平。方法對所收集的真菌通過形態(tài)學(xué)和或分子生物學(xué)鑒定，采用濃度梯度法（ETEST）測定伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、兩性霉素B及卡泊芬凈對5種曲霉菌的最低抑菌濃度（MIC）；采用液氮研磨、試劑盒純化方法提取曲霉菌細(xì)胞核DNA，普通PCR方法擴增5種（47株）曲霉菌的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS），測序獲得ITS區(qū)序列，基于不同種曲霉菌的ITS區(qū)序列對種特異性探針進(jìn)行驗證和改進(jìn)，建立實時熒光PCR方法將常見曲霉菌通過特異性探針解鏈溫度（TM）的差異進(jìn)行區(qū)分并對該方法的靈敏度、特異性及重復(fù)性進(jìn)行評價。結(jié)果形態(tài)學(xué)觀察基本上能將臨床常見的5種曲霉菌鑒定到種，對于其他種屬形態(tài)學(xué)可以將其鑒定到屬的水平，但是較難鑒定到種。卡泊芬凈對煙曲霉、黃曲霉、構(gòu)巢曲霉的MIC90均為0094ΜGML，對黑曲霉的MIC90為019ΜGML，在5種藥物中最低；泊沙康唑?qū)ν燎沟腗IC90最低，為0094ΜGML；對于煙曲霉和黃曲霉，MIC90由低到高依次為卡泊芬凈、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B；土曲霉對兩性霉素B的MIC均32ΜGML。MASTERPURETMYEASTDNAPURIFICATIONKIT提取的DNA量很低，固體培養(yǎng)液氮研磨方法、液體培養(yǎng)液氮研磨方法以及固體培養(yǎng)液氮研磨試劑盒純化方法提取的DNAOD260OD280的均值分別為173、196和180。煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、構(gòu)巢曲霉種特異性探針TM值分別為614℃、574℃、677℃、658℃，土曲霉特異性探針的TM值為645℃和552℃。實時熒光PCR方法對煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、土曲霉、構(gòu)巢曲霉的檢測下限分別為568FG、1110FG、137FG、123FG、780FG。疣狀瓶霉和小孢根霉能與煙曲霉特異性探針發(fā)生交叉反應(yīng)。該方法在每次重復(fù)實驗中TM值的波動在05℃以內(nèi)。結(jié)論形態(tài)學(xué)結(jié)合RDNAITS區(qū)測序?qū)φ婢N的鑒定很有幫助。ETEST法體外藥敏結(jié)果顯示，新的棘白素類抗真菌藥物卡泊芬凈對五種曲霉具有很好的體外抗菌活性，唑類藥物對于曲霉菌的體外抗菌活性優(yōu)于兩性霉素B。采用固體培養(yǎng)液氮研磨法試劑盒純化法能獲得高純度的曲霉菌DNA。實時熒光PCR方法具有很好的靈敏度、特異性和重復(fù)性，能將臨床常見的5種曲霉鑒定到種的水平。

簡介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼學(xué)號L0023B2009003中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析及原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點的研究所院北京協(xié)和醫(yī)院似姓名孫健指導(dǎo)教師陳杰導(dǎo)師小組崔全才，盧朝輝學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)臨床型研究方向淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點完成日期2011年5月”圜醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文2中文摘要第一部分中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析為了研究中國地區(qū)淋巴組織腫瘤的分布特征，我們收集了4家大型醫(yī)院20042008年明確診斷為淋巴組織腫瘤的2371例病例，對其按WHO組織學(xué)類型、性別、年齡及發(fā)生部位進(jìn)行了詳細(xì)分類及分析。在這2371例病例中，成熟B細(xì)胞腫瘤占6820％，成熟T／NK細(xì)胞腫瘤占2117％，霍奇金淋巴瘤占742％，前驅(qū)淋巴組織腫瘤占321％。依據(jù)WHO分型，所收集的病例中最常見的組織學(xué)類型為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤3568％，其他常見的類型依次為結(jié)外邊緣區(qū)淋巴瘤9。62％，經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤72L％，B細(xì)胞淋巴瘤，未分類582％，外周T細(xì)胞淋巴瘤，非特殊類型553％，T／NK細(xì)胞淋巴瘤，未分類544％及結(jié)外N科T細(xì)胞淋巴瘤502％。在大多數(shù)組織學(xué)類型的腫瘤中，男性所占比例明顯較女性高。所有腫瘤總的男／女為162。大多數(shù)成熟非霍奇金淋巴瘤發(fā)生于成年人，平均年齡為522歲，而前驅(qū)淋巴組織淋巴瘤則多發(fā)生于年輕人，平均年齡為253歲。綜上，我們的結(jié)果顯示，中國地區(qū)的淋巴組織腫瘤有著獨特的分布特點，這些特點多與西方國家不同，但與遠(yuǎn)東地區(qū)其他國家的分布特點相類似。第二部分原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特點在西方國家，原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生多與乳糜瀉相關(guān)，稱為經(jīng)典型腸病相關(guān)T細(xì)胞淋巴瘤I型EATL。乳糜瀉在亞洲地區(qū)罕見，此地區(qū)原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤見諸報道的組織學(xué)類型多為II型EARI，、原發(fā)性腸道NK細(xì)胞淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤等。為了研究中國地區(qū)原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學(xué)特征，我們收集了北京協(xié)和醫(yī)院病理科19992009年間原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤病例38例，通過BIOMED2TCR基因重排、EBER原位雜交、免疫組化及對相關(guān)I臨床病理特點進(jìn)行評估的方法，將此38例原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤病例進(jìn)行詳細(xì)分型，并比較各類型間的臨床病理差異。基于BIOMED2TCR重排檢測結(jié)果及其他指標(biāo)，我們首先將38例原發(fā)性腸道T細(xì)胞及NK細(xì)胞淋巴瘤病例分為NK細(xì)胞淋巴瘤組N6及T細(xì)胞淋巴瘤組N_32。NK細(xì)胞淋巴瘤組病人的平均年齡為37歲，所有的NK細(xì)胞淋巴瘤的腫瘤細(xì)胞EBER原位雜交均彌漫陽性且BIOMED2TCR重排陰性。與T細(xì)胞淋巴瘤組病例相比，NK細(xì)胞淋巴瘤組病人總體預(yù)后明顯較差且具有統(tǒng)計學(xué)意義P00247。通過對乳糜瀉病史的采集及對腫物周邊腸黏膜是否存在腸病的組織形態(tài)的評估，32例T細(xì)胞淋巴瘤組病例被進(jìn)一步細(xì)分為II型EATL117，外周T

簡介：前言阿爾茨海默病ALZHCIMERSDISEASEAD是一種以進(jìn)行性癡呆為主要特征的神經(jīng)退行性疾病其主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶力減退、認(rèn)知功能下降和嚴(yán)重的精神障礙。老年斑SENILEPLAQUESP、神經(jīng)原纖維纏結(jié)NEUROFIBRILLARYTANGLESNFTS和神經(jīng)元缺失為其主要病理特征。SP主要出現(xiàn)在大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)域其核心成分是一種由39～43個氨基酸殘基構(gòu)成的小神經(jīng)肽AΒAMYLOIDBETAPEPTIDEAΒAΒ由淀粉樣前體蛋白AMYLOIDPRECURSPROTEINAPP等經(jīng)過Β分泌酶及Γ分泌酶水解產(chǎn)生并分泌至細(xì)胞外。在正常生理狀態(tài)下人腦內(nèi)存在極少量納摩爾級濃度的可溶性AΒ對神經(jīng)元具有神經(jīng)營養(yǎng)作用。但在AD時APP經(jīng)過異常剪切加工形成大量AΒ且AΒ從可溶狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗軤顟B(tài)最終在腦部形成淀粉樣沉積是AD發(fā)病機制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。TAU蛋白是一種微管相關(guān)蛋白能與成熟神經(jīng)元的微管結(jié)合起到促進(jìn)微管形成和穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu)的作用。TAU蛋白磷酸化對其與微管的結(jié)合至關(guān)重要。然而異常的TAU蛋白聚合成雙股螺旋絲PARIEDHELICALFILAMENTSPHFS不利于其與微管結(jié)合并導(dǎo)致微管網(wǎng)絡(luò)不穩(wěn)定和神經(jīng)元死亡。NFTS的形成與TAU蛋白過度磷酸化密切相關(guān)且NFTS的數(shù)量與患者的癡呆程度呈正相關(guān)。蛋白激酶如GSK3、CDK5和MAPK在TAU蛋白磷酸化過程中起重要作用。丙戊酸鈉VALPROATEVPA是一種廣泛用于治療癲癇和情感障礙的抗驚厥藥物和情緒穩(wěn)定劑。最近的研究顯示VPA也是一種預(yù)防和治療AD的潛在藥物。VPA通過抑制GSK3Β介導(dǎo)的APP的Γ位點剪切減少了AD轉(zhuǎn)基因小鼠AΒ產(chǎn)生和SP的形成改善學(xué)習(xí)記憶損傷。但是VPA是否影響TAU蛋白磷酸化及其潛在的機制尚不清楚。本研究首先給予APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠VPA治療后檢測SP形成、AΒ分泌情況、APP的代謝和對TAU蛋白磷酸化過程的作用途徑及作用效果進(jìn)而探討VPA對AD小鼠腦組織SP和NLFTS形成的影響為探討AD的發(fā)病機制、尋找治療AD的有效藥物提供理論依據(jù)。此外本研究通過檢測VPA對岡田酸OKADAICACIDOA刺激引起的SHSY5Y細(xì)胞TAU蛋白磷酸化的影響及相關(guān)蛋白激酶的變化進(jìn)一步在細(xì)胞水平探討VPA在AD中的神經(jīng)保護(hù)作用及其機制。實驗材料和方法APPPS1APPSWEPSEN1DE9轉(zhuǎn)基因小鼠購自美國JACKSON實驗室通過常規(guī)喂養(yǎng)2225℃50％濕度12H光照循環(huán)繁殖后經(jīng)PCR進(jìn)行基因型鑒定鑒定后的小鼠用于實驗。將20周齡的APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠隨機分為對照組和VPA治療組。VPA治療組小鼠腹腔注射VPA50MGKG每日1次對照組小鼠給予等量的生理鹽水。12周后小鼠經(jīng)麻醉處死取材腦組織兩側(cè)半球分開右側(cè)腦組織于4％多聚甲醛中固定后石蠟包埋用于免疫組化分析左側(cè)腦組織80℃低溫冷凍保存用于生化檢測、免疫印跡、ELISA分析等。對OA處理的SHSY5Y細(xì)胞給予VPA作用24H然后應(yīng)用免疫熒光和免疫印跡等方法檢測TAU蛋白磷酸化及其相關(guān)信號通路蛋白的變化。結(jié)果一、VPA對APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)AΒ老年斑形成的影響1、VPA減少APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)AΒ沉積和SP形成應(yīng)用免疫組化技術(shù)觀察各組小鼠腦內(nèi)SP的數(shù)量及大小結(jié)果表明VPA治療組小鼠的大腦皮層及海馬等區(qū)域出現(xiàn)的陽性SP數(shù)目與對照組相比分別顯著減少60％斑塊沉積也分別由055％降到026％、050％降到019％差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ELISA結(jié)果顯示VPA治療組小鼠腦內(nèi)可溶性AΒ的水平由89PGMG降到77PGMG具有統(tǒng)計學(xué)意義。2、VPA對APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)APP裂解酶蛋白表達(dá)的影響WESTERNBLOT結(jié)果分析表明與對照組相比VPA治療組APP695在蛋白水平?jīng)]有明顯變化P＞005。然后我們檢測了APP裂解酶的蛋白變化統(tǒng)計分析表明與對照組相比VPA治療組轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)APP裂解酶BACE1表達(dá)明顯減少11％P＜005而ADAM10和PS1的蛋白表達(dá)兩組比較沒有明顯差異P＞005。二、VPA對TAU蛋白磷酸化的影響一VPA對APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)TAU蛋白磷酸化的影響1、VPA抑制APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)TAU蛋白磷酸化應(yīng)用WESTERNBLOT檢測APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)TAU蛋白的幾個重要磷酸化位點THR205、THR231和SER396的磷酸化水平結(jié)果顯示在兩組實驗小鼠腦內(nèi)總TAU蛋白表達(dá)無顯著差異的情況下VPA治療組小鼠腦內(nèi)TAU蛋白的磷酸化程度明顯低于對照組降低幅度分別為65％THR205P＜00157％SER396P＜001和54％THR231P＜005。提示VPA抑制了APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)TAU蛋白的磷酸化。2、VPA抑制APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)CDK5和GSK3Β的活性用WESTERNBLOT檢測CDK5和GSK3磷酸化水平。與對照組相比VPA沒有明顯影響APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)CDK5的蛋白水平但顯著降低了PCDK5TYR15的水平。定量分析表明VPA治療組小鼠腦內(nèi)的PCDK5CDK5比值較對照組降低了34％P＜005。此外VPA治療組轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)PGSK3ΒSER9的表達(dá)水平明顯升高且PGSK3ΒGSK3Β比值增加了39％P＜005。但是PGSK3ΑGSK3Α比值未見明顯的變化P＞005。這些數(shù)據(jù)表明VPA治療明顯抑制了APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)CDK5和GSK313的活性。3、VPA對APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)P3525蛋白表達(dá)的影響由于CDK5的激活需要P35的存在P35裂解為P25可以持續(xù)激活CDK5因此我們進(jìn)一步采用WESTERNBLOT檢測了P3525的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示P35的蛋白表達(dá)沒有明顯變化P＞005但未檢測到P25的蛋白表達(dá)。二VPA對OA處理的SHSY5Y細(xì)胞TAU蛋白磷酸化的影響1、VPA抑制OA處理的SHSY5Y細(xì)胞TAU蛋白磷酸化為了進(jìn)一步在體外探討VPA對TAU蛋白磷酸化的影響我們用OA處理SHSY5Y細(xì)胞以誘導(dǎo)TAU蛋白磷酸化然后給予VPA作用24H觀察VPA對培養(yǎng)細(xì)胞的TAU蛋白磷酸化水平的影響。定量分析表明與對照組相比VPA處理組與對照組細(xì)胞總TAU蛋白的含量沒有明顯變化而VPA處理組細(xì)胞的TAU磷酸化水平分別降低40％THR205P＜00527％SER396P＜001和16％THR231P＜005。此外免疫熒光染色激光共聚焦掃描顯微鏡分析顯示VPA處理降低了磷酸化TAU蛋白THR231的熒光強度。上述結(jié)果表明VPA能抑制OA處理的SHSY5Y細(xì)胞TAU蛋白過度磷酸化。2、VPA抑制OA處理的SHSY5Y細(xì)胞CDK5和GSK313的活性激光共聚焦掃描顯微鏡分析結(jié)果顯示PCDK5免疫熒光強度在VPA處理的細(xì)胞中明顯降低。WESTERNBLOT結(jié)果表明與對照組相比VPA處理組PCDK5CDK5的比值顯著降低了38％。此外與OA處理的對照組細(xì)胞相比VPA處理組細(xì)胞PGSK3ΒGSK3Β的比值顯著增加了48％。CDK5的磷酸化水平與其活性成正相關(guān)而GSK3Β的磷酸化水平與其活性成負(fù)相關(guān)。因此以上數(shù)據(jù)表明VPA能抑制OA處理的SHSY5Y細(xì)胞CDK5和GSK3Β的活性。3、VPA對OA處理的SHSY5Y細(xì)胞P3525蛋白表達(dá)的影響激光共聚焦掃描顯微鏡分析結(jié)果表明VPA減少了P3525免疫熒光強度抗體可以識別P35和P25且同時伴有磷酸化TAU蛋白THR231免疫熒光強度的減弱。WESTERNBLOT結(jié)果顯示VPA處理并未改變OA處理的細(xì)胞中P35蛋白的表達(dá)水平而P25P35的比值顯著下降與對照組相比VPA處理使P25P35的比值下降了28％P＜005。結(jié)論1、VPA處理可以減少APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)SP的形成和Β分泌酶的蛋白表達(dá)水平抑制APP的淀粉樣蛋白途徑；2、VPA處理可以抑制APPPS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)及OA處理的SHSY5Y細(xì)胞的TAU蛋白磷酸化；3、VPA通過抑制CDK5和GSK3的活性減少TAU蛋白的磷酸化；4、VPA可能通過CDK5P25途徑參與對TAU蛋白磷酸化的抑制。