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    • 簡介:浙江大學(xué)博士學(xué)位論文分子伴侶相關(guān)基因ST13和HSP70對乳腺癌生物學(xué)特性影響的研究姓名王曉稼申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師鄭樹吳金民200251研究背景乳腺癌是歐美國家女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,大約每10位婦女中有一位最終死于乳腺癌。我國盡管不是乳腺癌的高發(fā)地區(qū),但也呈逐漸上升的趨勢,并己成為婦女常見惡性腫瘤的第二位,約占全身惡性腫瘤的7%~8%,近年來,在我國一些大城市己成為女性健康的頭號殺手。此外,值得熏視的是,我國乳腺癌有著與歐美不同的特點(diǎn)①我國乳腺癌發(fā)病年輕化,高峰年齡較歐美提早10~15年;②我國乳腺癌ⅡI期病例比例偏高;③生活方式的西化改變了遺傳背景在我國乳腺癌發(fā)病的地位。因此,應(yīng)該按照國情重視對我國乳腺癌的預(yù)防、診斷、治療以及研究。在乳腺癌L臨床治療中,內(nèi)分泌治療和化療有著與手術(shù)和放療同等重要的地位,對于一些老年和晚期病例的治療,更有其特殊的作用。多年來,隨著對乳腺癌生物學(xué)特性的深入研究,乳腺癌作為實(shí)體瘤且是一種全身性疾病的慨念被廣泛接受,更確立了內(nèi)分泌治療和化療的地位。隨后開展了雌激素受體ER、孕激素受體PR等常規(guī)檢測以外的腫瘤標(biāo)志物CERBB2/NEU、PS2等幫助指導(dǎo)乳腺癌化學(xué)內(nèi)分泌治療和預(yù)測預(yù)后等,使內(nèi)分泌治療療效和選擇性更高,進(jìn)一步鞏固了化學(xué)內(nèi)分泌治療的地位。但隨后被乳腺癌臨床治療中出現(xiàn)的一些新問題所困擾,如甾體受體基因的突變與變異、化學(xué)內(nèi)分泌治療的耐受以及如何對乳腺癌預(yù)后和療效預(yù)測中的“多聯(lián)”檢測項(xiàng)目進(jìn)一步優(yōu)化等,促使我們深入到基因水平對乳腺癌生物學(xué)特性作進(jìn)一步的研究。近年來,圍繞著甾體激素及其受體和相關(guān)蛋白等方面是乳腺癌研究中活躍的領(lǐng)域,特別是對雌激素受體基因調(diào)控的研究,它是目前研究較成熟、應(yīng)用價(jià)值較大的基因調(diào)控模型。在對雌激素受體基因調(diào)控研究中,已有一系列的雌激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)蛋白雌激素誘發(fā)蛋白發(fā)現(xiàn)并研究,它們在臨床指導(dǎo)乳腺癌內(nèi)分泌治療方面有重要的價(jià)值,在臨床療效及預(yù)后預(yù)測上也有獨(dú)特的作用,這些分子標(biāo)記主要是PR、PS2、CATHD、24K蛋白等,并陸續(xù)有新的雌激素相關(guān)蛋白被發(fā)現(xiàn)和研究。臨床研究已經(jīng)證實(shí)以TAM為代表的SERM及以降低內(nèi)源性雌激素為目的的藥物去勢治療芳香化酶抑制劑是過去、現(xiàn)在以及將來一段時(shí)期內(nèi)乳腺癌的首選治療,其地位和療效均不亞于化療,且耐受性好,并逐步形3
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    • 簡介:中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白激酶C與錨蛋白、CD44分子生物學(xué)特性之間關(guān)系的研究姓名郝一文申請學(xué)位級別博士專業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師李亞明20050301臣垂囊晤血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白激酶C與錨蛋白、CD44分子生物學(xué)特性之間關(guān)系的研究前言CD44分子是廣泛分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等細(xì)胞的重要粘附分子,與配體透明質(zhì)酸、膠原蛋白、纖維連接素等結(jié)合后介導(dǎo)了淋巴細(xì)胞“歸巢”和轉(zhuǎn)化、腫瘤轉(zhuǎn)移、信號傳導(dǎo)等生理或病理過程。其分子胞漿側(cè)與細(xì)胞骨架蛋白錨蛋白相連接,并存在一個(gè)高度特異性結(jié)合區(qū)域,此區(qū)域內(nèi)含有PKC磷酸化位點(diǎn)。研究證實(shí)PKC對此位點(diǎn)的磷酸化能顯著增強(qiáng)二者結(jié)合力。研究還發(fā)現(xiàn),PKC活化對CD44變構(gòu)體及ICAML、VCAM一1等粘附分子的表達(dá)有調(diào)節(jié)作用。因此,我們利用PMA活化HUVECSPKC來觀察PKC活性對血管內(nèi)皮細(xì)胞CD44的表達(dá)及粘附性有無影響。錨蛋白是連接CD44跨膜糖蛋白與細(xì)胞內(nèi)骨架網(wǎng)絡(luò)的橋梁。在淋巴細(xì)胞上,研究發(fā)現(xiàn)PKC活化可引起細(xì)胞內(nèi)錨蛋白的重新分布。那么,在血管內(nèi)皮細(xì)胞上會不會也出現(xiàn)這種情況呢并由此改變細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)的立體結(jié)構(gòu)而造成細(xì)胞的形態(tài)及細(xì)胞之間連接關(guān)系的變化,從而影響內(nèi)皮細(xì)胞通透性呢由于錨蛋白與CD44相連,如果有錨蛋白的移位,會不會同時(shí)牽動CD44的移位我們利用免疫熒光標(biāo)記法觀察PKC活化后HUVECSCD44、錨蛋白的分布情況。PKC是一種信使傳遞酶,CD44分子與配體結(jié)合后胞內(nèi)CA2升高,而PKC是第二信使CA2及DAG的靶蛋白,CA“升高必然會引發(fā)PKC活化,通過其磷酸化作用將刺激信號傳遞下去。那么,信號傳導(dǎo)的實(shí)際途徑如何呢RAF一1激酶是細(xì)胞內(nèi)許多生物學(xué)信號傳導(dǎo)第一步,可以接受酪氨酸激酶家族或PKC的活化,并進(jìn)而引起酶鏈反應(yīng)RAF一1一MEKERK。我們利用PKC激活劑及抑制劑來觀察HUVECSCD44基因的表達(dá)及CD44分子磷酸化情況,對RAF一1激酶活性進(jìn)行分析,并比較了RAF一1激酶、MEK、ERK抑制劑對HUVECSCD44基因表達(dá)的影響,觀察PKC能否直接活化上述途徑,據(jù)此探討PKC對CD44分子表達(dá)的信號調(diào)控1
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    • 簡介:山東大學(xué)博士學(xué)位論文胰腺腫瘤分子生物學(xué)的相關(guān)性研究姓名李勝申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師李占元20030315論文一CO自殺基因和免疫因子基因IL18、GHICSF重組表達(dá)的研究研究生李勝導(dǎo)師李占元教授中文摘要目的利用基因重組技術(shù)構(gòu)建人IL一18RHLL18的真核表達(dá)載體PORF5一HLL~18、PVITR02一IL一18、PVITR02CDIL一18及PVITR02一CDGMCSF,并在大腸桿菌中表達(dá),以檢測其生物學(xué)作用以及特點(diǎn),初步探討其對腫瘤防治的作用。方法從外周血細(xì)胞提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄得到IL18的EDNA,利用分子克隆的方法依次構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒PORF5HLL一18、PVITR02一IL一18、PVITR02一CD、PVITR02CDIL一18及PVITR02CD書MCSF利用IPTG誘導(dǎo)成功轉(zhuǎn)染PORF5一HIL18質(zhì)粒的大腸桿菌JML09表達(dá)RHLL一18;利用SDSPAGE法鑒定,同時(shí)利用NIS04飽和的HISBINDRESIN純化RHIL一18的蛋白產(chǎn)物;采用ELISA測定RHLL,一18以及RHLL一2對正常人外周血單核細(xì)胞PBMC表達(dá)粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子GMCSF的刺激作用利用共培養(yǎng)方法檢測RHLL18及對NI細(xì)胞細(xì)胞毒活性的影響。結(jié)果真核表達(dá)質(zhì)粒PORF5HLL一18、PVITR02IL18、PVITR02一CD、PVITR02一CDIL18及PVITR02_CD黼一CSF構(gòu)建成功;真核表達(dá)質(zhì)粒PORF5HLL18在大腸桿菌塒109中的表達(dá)產(chǎn)物RHIL18與RHLL2一起可以誘導(dǎo)外周血單核細(xì)胞PBMC合成粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子GMCSF,并且增強(qiáng)NL細(xì)胞細(xì)胞毒作用,而單獨(dú)應(yīng)用RHLL一18則無以上兩項(xiàng)功能。結(jié)論重組表達(dá)的RHIL18具有誘導(dǎo)外周血單核細(xì)胞PBMC合成粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子6MCSF、增強(qiáng)NI細(xì)胞細(xì)胞毒作用的生物學(xué)活性,并且需要RHLL一2的協(xié)同作用;構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)糖再用于進(jìn)一步的功能研究。
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    • 簡介:山東大學(xué)博士學(xué)位論文食管鱗狀細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子生物學(xué)研究姓名呂英義申請學(xué)位級別博士專業(yè)胸外科指導(dǎo)教師陳景寒20060416山東大學(xué)博士學(xué)位論文食管鱗狀細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子生物學(xué)研究博士研究生博士生導(dǎo)師呂英義陳景寒教授中文摘要第一部分VEGF和MMP2在食管鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)與侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間關(guān)系的研究目的研究血管內(nèi)皮生長因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR,VEGF和基質(zhì)金屬蛋白酶一2MATRIXMETALLOPROTEINASE一2,MMP一2在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與食管癌侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系,探討它們在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的分子生物學(xué)作用,以及檢測此兩項(xiàng)指標(biāo)對臨床的指導(dǎo)意義。方法采用免疫組化SP法檢測76例食管鱗癌組織中VEGF和MMP一2的表達(dá)水平,并結(jié)合術(shù)后臨床資料和隨訪資料分析。用X2檢驗(yàn)分析比較兩組間差別,用KAPLANMEIER生存曲線計(jì)算術(shù)后生存時(shí)間,LOGRANK檢驗(yàn)比較組間生存時(shí)間的差別。結(jié)果176例食管鱗癌組織中,VEGF表達(dá)率為579%44/76。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF表達(dá)高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組PO叭。T1期VEGF表達(dá)的陽性率為214%3/14,T2T3期661%41/62,T1期與T2T3期之間差別顯著P001。術(shù)后轉(zhuǎn)移組VEGF表達(dá)高于無轉(zhuǎn)移組PO01。VEGF陽性表達(dá)患者術(shù)后轉(zhuǎn)移率高于陰性患者術(shù)后的轉(zhuǎn)移率JP001。VEGF陽性表達(dá)的患者5年生存率低于VEGF陰性表達(dá)患者PO01。276例食管鱗癌患者組織中,MMP一2表達(dá)率為5658%43/76。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MMP一2表達(dá)率高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組PO05。T1期食管癌中MMP。2的陽性率為286%4/14,T2T3期陽性率
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    • 簡介:南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高分化/去分化脂肪肉瘤的臨床病理學(xué)和分子生物學(xué)研究姓名鄒玨申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)指導(dǎo)教師范欽和20070420南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文高分化/去分化脂肪肉瘤的臨床病理學(xué)和分子生物學(xué)研究研究生鄒玨導(dǎo)師范欽和中文摘要脂肪肉瘤是成人最常見的軟組織腫瘤之一,占軟組織肉瘤的9.8%一16%,全身各部位都可發(fā)生,但主要見于四肢和腹膜后。它在組織學(xué)上分為高分化WELLDIFFERENTIATEDLIPOSARCOMA,去分化DEDIFFERENTIATEDLIPOSARCOMA,黏液樣MYXOIDLIPOSARCOMA,圓形細(xì)胞ROUNDCELLLIPOSARCOMA和多形性PLEOMORPHICLIPOSARCOMA五型,而根據(jù)其細(xì)胞和分子生物學(xué)特征將其分為三大類高分化,去分化型,黏;痍/圓細(xì)胞型,多形性型脂肪肉瘤。高分化型在脂肪肉瘤中約占到4045%,易復(fù)發(fā)不轉(zhuǎn)移,惡性程度低可進(jìn)展為高度惡性的去分化型.在去分化型約占脂肪肉瘤的LO一15%可發(fā)生轉(zhuǎn)移并能致死。它們在組織學(xué)上特征不是很明顯,高分化與良性脂肪性腫瘤以及去分化與惡性梭形/多形未分化腫瘤的鑒別仍是一個(gè)難題。目前細(xì)胞和分子生物學(xué)研究高分化/去分化型的環(huán)狀和,或巨大標(biāo)記染色體都有12Q13.15區(qū)域的擴(kuò)增,該區(qū)域包括好幾種導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的基因如MDM2HUMANHOMOLOGUEOFTHEMURINEDOUBLEMINUTETYPE2、CDK4CYCLINDEPENDENTKINASE4等,其中最恒定的擴(kuò)增子是MDM2基因,它除可致腫瘤發(fā)生外還可作用于P53基因而使腫瘤發(fā)生。我們研究觀察高分化/去分化脂肪肉瘤的組織病理學(xué)特征,免疫標(biāo)
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    • 簡介:GL50分子是新近發(fā)現(xiàn)的B7家族成員,為一個(gè)由309個(gè)氨基酸組成的I型跨膜糖蛋白,約45~72KDA,胞外區(qū)與B7家族其它分子相似。人GL50分子最早是1999年,由SWALOWMM等分別從經(jīng)TNF活化的小鼠胚胎母細(xì)胞系和3T3細(xì)胞中克隆得到的。因?yàn)樗cAPC上B7分子同源,故命名為B7H。隨后LING等在基因組數(shù)據(jù)庫中篩選與B7家族基因相似的基因,獲得了KIAA0653ACCESSIONNUMBERAB014553,REFL2的CDNA。該CDNA分子約34KG,定位于21號染色體上。人GL50可持續(xù)表達(dá)在B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面和心臟、骨骼肌、肺等組織上。GL50分子與其特異性受體ICOSINDUCIBLEC0STIMULAT的相互作用,在機(jī)體再次免疫應(yīng)答過程中T細(xì)胞的增殖、活化、分化、細(xì)胞因子的分泌以及B細(xì)胞的增殖、分化、抗體分泌等方面發(fā)揮著重要的作用。目前的研究證明GL50/ICOS信號途徑在機(jī)體炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤和移植排斥等免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。對該信號途徑的有效調(diào)節(jié)將不僅為理解人體復(fù)雜、精細(xì)的免疫應(yīng)答提供新的視角,而且還具有潛在的臨床應(yīng)用前景。本研究擬在已經(jīng)成功構(gòu)建一株ICOS轉(zhuǎn)基因細(xì)胞ICOSL929,并制備獲得了一株能穩(wěn)定分泌功能型鼠抗人GL50單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株NC4的工作基礎(chǔ)上,進(jìn)行如下研究1GL50分子在活化T細(xì)胞上的表達(dá)將人外周血T細(xì)胞用PHA或聯(lián)合抗CD3和抗CD28單抗激發(fā)后,分別于0H、24H、48H、72H、96H用免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞術(shù)分析,檢測細(xì)胞表面GL50分子和ICOS分子的動態(tài)表達(dá),結(jié)果顯示GL50分子的表達(dá)在T細(xì)胞活化后24H即開始上調(diào),72H時(shí)達(dá)到高峰;而ICOS分子的表達(dá)在T細(xì)胞活化48H時(shí)達(dá)到高峰,由此表明GL50和ICOS分子共表達(dá)于活化T細(xì)胞表面,并且兩者的表達(dá)在時(shí)相上存在差異性。在此基礎(chǔ)上,本研究進(jìn)一步用WESTERNBLOT以及REALTIMEPCR等方法從蛋白和基因水平證實(shí)了上述結(jié)果。2GL50/ICOS信號對T細(xì)胞的共刺激作用將T細(xì)胞用抗人CD3激發(fā)型單抗或聯(lián)合抗CD3和抗CD28單抗激發(fā),同時(shí)加入絲裂霉素處理的刺激細(xì)胞ICOSL929或MOOKL929,共培養(yǎng)3D后,經(jīng)MTT摻入法顯示,ICOSL929細(xì)胞能有效地促進(jìn)T細(xì)胞增殖,而聯(lián)合抗CD28單抗,促增殖效應(yīng)則更為顯著。在ICOSL929細(xì)胞處理的活化T細(xì)胞組中加入不同濃度特異性抗GL50單抗11C4后發(fā)現(xiàn),阻斷GL50信號能夠有效地抑制活化T細(xì)胞的體外增殖效應(yīng)。細(xì)胞表型分析ICOSL929細(xì)胞能促進(jìn)CD8T細(xì)胞活化。同樣,細(xì)胞凋亡檢測表明,該轉(zhuǎn)基因細(xì)胞介導(dǎo)的GL50信號能促進(jìn)T細(xì)胞的抗凋亡能力。EUSA法檢測培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子也表明,ICOSL929細(xì)胞能明顯促進(jìn)T細(xì)胞對IL一10的分泌,而阻斷GL50信號能夠明顯的降低ILLO的分泌,對IL2的分泌沒有顯著影響,上述結(jié)果顯示,活化T細(xì)胞誘導(dǎo)性表達(dá)的GL50分子具有增強(qiáng)活化T細(xì)胞的功能效應(yīng)。3阻斷GL50信號對體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的增殖抑制將T細(xì)胞1105/孔和體外誘導(dǎo)的絲裂霉素處理單向MLR或未處理的雙向MLR成熟DC以20L比例加入96孔板,加入不同濃度5ΜGML和10ΜG/MD的GL50單克隆抗體11C4,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,同時(shí)設(shè)小鼠IGG同型對照。MTT法檢測T細(xì)胞的增殖,結(jié)果顯示GL50單克隆抗體NC4能有效地抑制個(gè)體間混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的增殖PO05,且隨著劑量的增加,抑制作用更加明顯。4不成熟№一DC上調(diào)表達(dá)GL50分子外周血單核細(xì)胞經(jīng)GMCSFIL4TNF一Α或者GMCSFIL4CD40MAB常規(guī)方法誘導(dǎo)MODC,繼而分別取不同時(shí)相3,6,8,10DMODC,用商品化GL50單抗MIⅢ2PE或本所自行研制的GL50單抗11C4標(biāo)記,F(xiàn)ACS分析結(jié)果顯示不成熟的MODC上調(diào)表達(dá)GL50分子,而隨著MODC的誘導(dǎo)成熟,GL50的表達(dá)明顯下降。5GL50介導(dǎo)的逆向信號體外促進(jìn)人MODC的分化與成熟經(jīng)流式細(xì)胞儀對DC表型分析,在TNFΑ激發(fā)的基礎(chǔ)上,ICOSL929細(xì)胞能進(jìn)一步上調(diào)DC表達(dá)CD80、CD86、CD83等分子,由此提示GL50信號具有促進(jìn)DC進(jìn)一步分化成熟的作用。隨后的M0DC攝取FITCDEXTMN能力分析實(shí)驗(yàn)也證實(shí),聯(lián)合ICOSL929細(xì)胞和TNF一Α激發(fā)的MODC的攝取能力較TNFΑ激發(fā)的MODC明顯減弱PO05。上述結(jié)果表明,通過GL50介導(dǎo)的逆向信號能促進(jìn)MODC的進(jìn)一步分化成熟。而且EUSA法分析顯示,聯(lián)合ICOSL929細(xì)胞和1NFΑ刺激的M0一DC能促進(jìn)T細(xì)胞分泌更多IL10,而對IL2的產(chǎn)生則無明顯作用。由此提示聯(lián)合ICOSL929細(xì)胞和TNFΑ刺激的DC能進(jìn)一步促進(jìn)T細(xì)胞向N2分化。綜上所述,本研究首次發(fā)現(xiàn)了GL50在活化T細(xì)胞上的表達(dá),并且發(fā)現(xiàn)GL50信號能夠有效地促進(jìn)體外T淋巴細(xì)胞的增殖,GL50抗體11C4能夠有效地阻斷GL50信號,抑制T淋巴細(xì)胞的增殖,并能抑制體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。活化T細(xì)胞誘導(dǎo)性表達(dá)的GL50分子在活化T細(xì)胞的功能介導(dǎo)中具有正性促進(jìn)作用,這為進(jìn)一步研究效應(yīng)性T細(xì)胞精細(xì)調(diào)節(jié)提供新的思路。上述研究結(jié)果具有一定的創(chuàng)新性。另外,本研究還發(fā)現(xiàn)GL50分子在不成熟MODC表面呈現(xiàn)上調(diào)性表達(dá),ICOSL929細(xì)胞介導(dǎo)的GL50逆向信號能有效地促進(jìn)M0一DC的分化成熟,并且ICOSL929細(xì)胞激發(fā)的MODC能顯著地促進(jìn)體外T細(xì)胞的增殖,介導(dǎo)T細(xì)胞向TH2分化,但確切的機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
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      上傳時(shí)間:2024-03-12
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    • 簡介:目的探討氯沙坦對快速心房起搏所致房顫家兔的心房有效不應(yīng)期ATRIALEFFECTIVEREFRACTYTIME,AERP的影響,及氯沙坦對家兔心房組織縫隙連接蛋白45、40CONNEXIN,CX45、CX40MRNA表達(dá)的影響。材料和方法28只新西蘭大耳白兔,隨機(jī)分為氯沙坦組和對照組,前者灌胃法喂以氯沙坦15MGKGD,后者鹽水灌胃,兩組均喂養(yǎng)4周。4周后,頸內(nèi)靜脈切開置入4F電極導(dǎo)管,心房快速起搏1H后,記錄起搏前后的心房有效不應(yīng)期ATRIALEFFECTIVEREFRACTYTIME,AERP;然后猝發(fā)SS起搏刺激誘發(fā)房顫,觀察房顫的誘發(fā)率、房顫周長ATRIALFIBRILLATIONCYCLELENGTH,AFCL和房顫的持續(xù)時(shí)間。實(shí)時(shí)熒光定量PCRFLUESCENTQUANTITATIVERTPOLYMERASECHAINREACTION檢測CX45、CX40和GAPDH的拷貝數(shù)THRESHOLDCYCLEVALUE,比較CX45、CX40的MRNA表達(dá)水平。結(jié)果①起搏前后AERP縮短值,氯沙坦組明顯小于對照組1643±556MSVS3071±886MS,P001。②房顫的誘發(fā)率,氯沙坦組少于對照組414VS1214,P0006。③房顫發(fā)作的持續(xù)時(shí)間,氯沙坦組短于對照組475±96SVS1150±80S,P0001。④房顫周長,氯沙坦組長于對照組850±100MSVS450±80MS,P0001。⑤氯沙坦組CX45GAPDH為08762±00393與對照組06299±00228相比,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0001。⑥氯沙坦組CX40GAPDH為07623±00364與對照組05134±00394相比,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0008。結(jié)論氯沙坦可有效預(yù)防兔快速心房起搏所致房顫的發(fā)生,其機(jī)制可能是①減少快速起搏所致AERP的縮短;②減少房顫的誘發(fā)率;③延長房顫的周長;④促進(jìn)縫隙連接蛋白CX45、CX40的MRNA表達(dá)。
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      上傳時(shí)間:2024-03-11
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    • 簡介:蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名藝勵(lì)日蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬方數(shù)據(jù)電子出版社、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文,可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文曲論文作者簽名移彪曰期∥2夕廣,艫導(dǎo)師簽名緇日勛I蘭三生上
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    • 簡介:金黃色葡萄球菌是分布最廣泛的致病菌之一它分泌多種毒力因子1可導(dǎo)致肺炎傷口感染及食物中毒等嚴(yán)重疾病占醫(yī)院感染病例的10%。近年來隨著抗生素的廣泛應(yīng)用導(dǎo)致了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA的大量出現(xiàn)使其成為與艾滋病、乙型肝炎并列的世界三大感染頑疾。傳統(tǒng)的檢測方法具有操作簡便所需設(shè)備簡單的優(yōu)點(diǎn)但都存在耗時(shí)長、靈敏性差的缺點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)和蛋白組學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用對金黃色葡萄球菌的檢測也從傳統(tǒng)方法過渡到以PCR、雜交探針、基因芯片和MS為主的現(xiàn)代技術(shù)上從基因和蛋白質(zhì)水平更準(zhǔn)確、更靈敏的檢測病原菌的存在。本研究首先采用PCRRFLP聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性分析鑒定了臨床常見的葡萄球菌然后利用差異蛋白組學(xué)的方法運(yùn)用SELDITOFMS質(zhì)譜技術(shù)檢測金黃色葡萄球菌以及其他對照組細(xì)菌的蛋白指紋圖譜并篩選出金黃色葡萄球菌的特異表達(dá)蛋白標(biāo)志物建立決策樹預(yù)測模型探討其用于金黃色葡萄球菌實(shí)驗(yàn)室診斷的臨床價(jià)值。目的細(xì)菌分子水平的鑒定是目前臨床實(shí)驗(yàn)室微生物領(lǐng)域研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本研究利用聚合酶鏈反應(yīng)限制片段長度多態(tài)性分析技術(shù)和差異蛋白組學(xué)技術(shù)快速鑒定臨床常見的金黃色葡萄球菌為臨床微生物鑒定方法的研究奠定了基礎(chǔ)。方法1采用四種DNA提取方法提取金黃色葡萄球菌DNA篩選適宜的DNA提取方案。2PCR擴(kuò)增金黃色葡萄球菌的16SRDNA產(chǎn)物測序結(jié)果與GENBANK比對進(jìn)行鑒定。3獲取葡萄球菌TUF基因序列通過軟件分析TUF基因的酶切位點(diǎn)和酶切模式。優(yōu)化PCR檢測TUF基因的反應(yīng)條件采用PCR擴(kuò)增葡萄球菌TUF基因產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶ALUIHINFI酶切后瓊脂糖凝膠電泳分析酶切產(chǎn)物根據(jù)酶切模式對葡萄球菌進(jìn)行鑒定。4選擇不同激光強(qiáng)度探討并建立SELDITOFMS檢測細(xì)菌蛋白指紋圖譜的條件。5收集培養(yǎng)24H、48H、72H的金黃色葡萄球菌SELDITOFMS檢測其蛋白指紋圖譜分析培養(yǎng)時(shí)間對蛋白指紋檢測的影響。6將3株金黃色葡萄球菌均重復(fù)檢測20次分析SELDITOFMS檢測細(xì)菌蛋白指紋的重復(fù)性。7選取60株金黃色葡萄球菌和84株對照細(xì)菌為訓(xùn)練集56株金黃色葡萄細(xì)菌和75株對照細(xì)菌為驗(yàn)證集采用SELDITOFMS檢測訓(xùn)練集和驗(yàn)證集細(xì)菌蛋白指紋圖譜。利用BIOMARKERWIZARD軟件篩選金黃色葡萄球菌特征性蛋白通過BIOMARKERPATTEMS軟件建立金黃色葡萄球菌決策樹診斷模型。8利用驗(yàn)證集中56株金黃色葡萄球菌和75株對照細(xì)菌蛋白指紋圖對建立的診斷模型進(jìn)行盲法驗(yàn)證。結(jié)果1四種DNA提取方法中只有改良NAOH方法能成功提取金黃色葡萄球菌DNA。2所有金黃色葡萄球菌均能擴(kuò)增出16SRDNAPCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序結(jié)果與GENBANK的金黃色葡萄球菌序列比對相似性均大于995%。3軟件分析發(fā)現(xiàn)葡萄球菌TUF基因具有ALUIHINFI等多個(gè)酶切位點(diǎn)TUF基因經(jīng)過ALUIHINFI酶切的產(chǎn)物具有特征性可將不同的葡萄球菌區(qū)分開。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在優(yōu)化的PCR反應(yīng)條件下不同的葡萄球菌均能擴(kuò)增出668BP的產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物經(jīng)過ALUIHINFI酶切后瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示酶切結(jié)果與理論相符并能區(qū)分金黃色葡萄球菌。4不同激光強(qiáng)度下細(xì)菌蛋白指紋圖譜略有差異以激光強(qiáng)度為190檢測結(jié)果最佳。5金黃色葡萄球菌經(jīng)培養(yǎng)24H、48H、72H后SELDITOFMS質(zhì)譜檢測發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)時(shí)間對于細(xì)菌蛋白的表達(dá)有一定影響同時(shí)也發(fā)現(xiàn)有多個(gè)蛋白標(biāo)志物在不同時(shí)間均穩(wěn)定表達(dá)。6金黃色葡萄球菌重復(fù)檢測20次6個(gè)特征蛋白峰的分子量變異系數(shù)均≤005%提示SELDITOFMS檢測葡萄球菌特征性蛋白具有很好的重復(fù)性。7SEILDITOFMS檢測結(jié)果顯示所有金黃色葡萄球菌均具有相似的蛋白指紋圖譜在分子量300020000DA范圍內(nèi)共檢測到75個(gè)蛋白質(zhì)峰其中47個(gè)蛋白質(zhì)峰差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P結(jié)論本研究成功建立了一種可區(qū)分不同葡萄球菌的PCRRFLP方法。同時(shí)采用SELDITOFMS技術(shù)構(gòu)建了多種細(xì)菌的蛋白指紋圖譜利用BIOMARKERPATTERNS軟件建立了一種金黃色葡萄球菌的蛋白決策樹分類鑒定模型開創(chuàng)了一種分子水平上的新模式為金黃色葡萄球菌的快速診斷鑒定了基礎(chǔ)。
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      上傳時(shí)間:2024-03-13
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    • 簡介:河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文小鼠血管性癡呆細(xì)胞分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制及石杉堿甲的影響姓名呂佩源申請學(xué)位級別博士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師李文斌20040401中文摘要記憶機(jī)制的細(xì)胞內(nèi)第二信使;而神經(jīng)細(xì)胞膜N一甲基一D一天門冬氨酸NMETHYLDASPARTATE,NMDA受體及細(xì)胞內(nèi)CA”I、CAM及CAMPKII、CAMP水平的變化對學(xué)習(xí)和記憶的影響,也逐漸成為了多數(shù)學(xué)者研究的熱點(diǎn)。也有學(xué)者對老年性癡呆ALZHEIMERSDEMENTIA,AD動物模型進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)AD模型腦組織內(nèi)鈣離子超載、CAMP、腺苷環(huán)化酶ADENYLYLCYCLASE,AC水平和谷氨酸受體水平降低。這些研究結(jié)果為我們探討VD動物模型腦組織內(nèi)NMDA受體、鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及CAMP改變提供了線索。此外,二氫麥角環(huán)肽在治療VD方面具有明顯的療效,成為治療癡呆的一線藥物而石杉堿甲為治療癡呆的一種新藥,療效及藥理學(xué)機(jī)制尚在研究中。因此,我們以二藥作為藥物治療組,觀察了其對VD小鼠上述指標(biāo)的影響,探討其治療癡呆的新藥理學(xué)機(jī)制。本研究采用反復(fù)缺血一再灌注誘發(fā)小鼠VD動物模型,觀察VD時(shí)海馬CAL區(qū)組織病理學(xué)改變及第三腦室正中隆起、第四腦室外側(cè)隱窩掃描電鏡特征,檢測海馬組織NMDA受體的表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平、CA2】J、CAM及CAMPKII、CAMP水平,以探討VD的細(xì)胞分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制。1小鼠VD模型的建立及海馬組織病理學(xué)特征小鼠331只,分為正常對照組N66、假手術(shù)對照組N66、VD模型組N67、二氫麥角環(huán)肽組N66、石杉堿甲組I366。采用頸總動脈結(jié)扎,經(jīng)過連續(xù)三次腦組織缺血20MIN一再灌注10RAIN,建立VD小鼠模型。同時(shí)設(shè)立正常對照組、假手術(shù)對照組、二氫麥角環(huán)肽組、石杉堿甲組;制造VD模型的第29天、30天,各組小鼠分別進(jìn)行跳臺試驗(yàn)和水迷宮試驗(yàn),對其學(xué)習(xí)和記憶成績測試;HE和硫堇染色下觀察海馬組織形態(tài)學(xué)變化,超薄切片透射電鏡觀察海馬細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。11學(xué)習(xí)成績術(shù)后第29天,分別進(jìn)行跳臺試驗(yàn)和水迷宮試驗(yàn),測試跳臺試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間SEC和錯(cuò)誤次數(shù)NUMBER/5MIN作為學(xué)習(xí)成績,水迷宮試驗(yàn)游完全程時(shí)間SEC和錯(cuò)誤次數(shù)NUMBER/3MIN作為學(xué)習(xí)成績。跳臺試驗(yàn)結(jié)果顯示1與正常對照組的反應(yīng)時(shí)間49861124
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