簡介：碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼10023登革病毒在人胚肺二倍體細(xì)胞KMBL7中的適應(yīng)性及生物學(xué)特性研究ADAPTABILITYOFDENGUEVIRUSINHUMANEMBRYONICLUNGDIPLOIDCELLSKMB17ANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFADAPTEDSTRAIN所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所趙玉嬌孫強(qiáng)明李琦涵馬紹輝潘弱生物化學(xué)與分子生物學(xué)病毒疫苗腫瘤2012年5月1病毒適應(yīng)株的噬斑純化282病毒的抗原性檢測283病毒的純化和電鏡檢測29三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果29一中緬邊境登革熱流行病學(xué)調(diào)查及病毒分離29二四型登革病毒的擴(kuò)增及鑒定311四型登革病毒中國株的毒種擴(kuò)增312收獲病毒液的滴度測定323登革病毒的型別鑒定33三四型登革病毒在人胚肺二倍體細(xì)胞KMBL7上的適應(yīng)性研究341登革病毒在KMBL7細(xì)胞上適應(yīng)株的選育342登革病毒在KMBL7細(xì)胞上培養(yǎng)條件優(yōu)化353適應(yīng)株在KMBL7細(xì)胞中增殖動力學(xué)檢測354登革病毒的傳代適應(yīng)和感染性滴度測定365登革病毒在KMBL7細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制及細(xì)胞的病理變化觀察37四四型登革病毒適應(yīng)株的噬斑純化及生物學(xué)特性研究391病毒適應(yīng)株的噬斑純化392病毒的抗原性檢測403病毒的純化和電鏡檢測40討論41小結(jié)與展望45參考文獻(xiàn)49附錄I55附錄II56附錄Ⅲ57致謝59個(gè)人簡介60獨(dú)創(chuàng)性聲明62

簡介：獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文，是在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下，通過我的努力取得的成果，井且是自己撰寫的。盡我所知除了文中怍了標(biāo)注目1致謝中已經(jīng)作丁答謝的地方外論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果也不包含在讓西農(nóng)業(yè)大學(xué)域其它教育機(jī)構(gòu)獲得學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同對本研究做出貢獻(xiàn)的同志都在論文中作了明確的說明井表示了謝意。如被查有嚴(yán)重侵犯他人知識產(chǎn)權(quán)的行為由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。學(xué)位論文作者親筆簽名攤論文使用授權(quán)的說明日期坦』縫碰罵本人完全了解江西農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定即學(xué)校有權(quán)送交論文的復(fù)印件，允許論文披查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。保密，在年后解密可適J蟠本授權(quán)M口不保秘本學(xué)位論文屬于不保密，／請?jiān)诜娇騼?nèi)打“巾學(xué)位論文作者親筆簽名指導(dǎo)教師親筆簽口IIIJ趁避』目侈。期型7摘要摘要豬痘SWINEPOX是由豬痘病毒SWINEPOXVIRUSSWPV引起豬的一種溫和或急性傳染病以皮膚發(fā)生紅斑、丘疹、膿皰和結(jié)痂為特征，主要危害3月齡以內(nèi)的豬，成年豬很少發(fā)生或癥狀輕微，也有關(guān)于豬痘病毒胎盤蘑染導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎或初生仔豬發(fā)病的報(bào)道呈世界性分布。豬痘可通過豬虱等的叮咬機(jī)械傳播T與豬的飼養(yǎng)衛(wèi)生條件差相關(guān)。由于豬痘給養(yǎng)豬業(yè)造成的直接損失較小，通常被忽視。本試驗(yàn)通過豬痘病毒的分離及其分子流行病學(xué)和血清學(xué)調(diào)查，旨在了解江西地區(qū)豬群中豬痘病毒的感染情況，為今后開展豬痘的流行病學(xué)、病毒的生物學(xué)特性、豬痘病毒作為表達(dá)載體等的研究打下基礎(chǔ)。1豬痘病毒PCR檢測方法的建立與應(yīng)用根據(jù)GENBANK上登錄的豬痘病毒登錄號AF4101531P35基因序列，設(shè)計(jì)并合成1對引物，擴(kuò)增目的片段為975BP。虬疑似豬痘的皮膚痘痂提取DNA，通過對反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了檢測豬痘病毒PCR方法。特異性、重復(fù)性和敏感性試驗(yàn)表明，該方法特異性高、重復(fù)性良好、對模板的最低檢測量為27X10一GG。以建立的PCR檢測方法對收集自江西地區(qū)的55份疑似豬痘保育豬皮膚痘痂進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果有44份為豬痘病毒陽性，陽性率為80％，表明江西省豬群存在豬痘病毒感染。2豬痘病毒分離及P35基因的同源性分析以PCR檢測為豬痘病毒陽性的保育豬皮膚痘痂為病毒分離材料，采用PKL5細(xì)胞盲傳方式進(jìn)行豬痘病毒的分離。通過對PKL5細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行豬痘病毒P35基因的PCR擴(kuò)增和測序確定病毒分離的成功。從江西省分離到15株豬痘病毒，分別命名為SWPVJX01～SWPVJXL5。所有分離毒株在PKL5細(xì)胞上均不產(chǎn)生明顯的CPE，感染的PKL5細(xì)胞均能連續(xù)傳代僅造成死細(xì)胞偏多、胰酶消化時(shí)間縮短。以分離株SWPVJX07人工感染兔和小鼠試驗(yàn)，表明能在兔體內(nèi)增殖，不能在小鼠體內(nèi)增殖。通過對分離毒株P(guān)35基因核昔酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行同源性比較分析，結(jié)果表明1分離毒株問的核苷酸序列同源性為981％～100％，推導(dǎo)氨基酸序列同源性為982％～100％；2分離毒株與豬痘病毒AF410153I的P35基因核苷酸序列同源性為966％～982％，氨基酸序列同源性為875％～885％。3豬痘病毒P35基因的原核表達(dá)將豬痘病毒P35基因克隆至原棱表達(dá)載體PGEX4TI，構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒PGEX4TP35，轉(zhuǎn)化入大腸1菌BL21DE3，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，SDSPAGE分析表明，表達(dá)產(chǎn)物分子量約為64KIAGST蛋白26KDA，P35蛋白約38KDA，與預(yù)期大小一致通過蛋白純化和濃

簡介：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文我國豬瘟病毒流行株致病性分析及流行病學(xué)信息系統(tǒng)的建立與應(yīng)用姓名王琴申請學(xué)位級別博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)指導(dǎo)教師楊漢春張仲秋20060301ABSTRACTCLASSICALSWINEFEVEFFCSFISAHIGHLYCONTAGIOUSINFECTIOUSDISEASECAUSEDBYTHEAGENTOFCLASSICALSWINEFEVERVIRUSCSFVTHATBELONGSTOPESTIVIRUSGENUSINFLAVIVIRIDAEFAMILYTHEDIVERSITIESOFPATHOGENICITYANDANTIGENICITYOFTHEFIELDISOLATESWERESYSTEMATICALLYINVESTIGATEDANDCLASSICALSWINEFEVEREPIDEMIOLOGYINFORMATIONSYSTEMOFCHINACALLEDCSFINFOWASESTABLISHEDINTHESTUDYFIRSTOFALL，THEIDENTIFICATIONOF9FIELDISOLATESOFCSFVSHOWINGHIGH，MODERATEANDLOWPATHOGENICITYWASCONDUCTEDBYFLUORESCENTANTIBODYTESTFA，ELECTROMICROSCOPYANDSEQUENCINGOFTHEIRE2GENESINADDITION，TCIDS0INPK一15CELLSANDMLDINPIGSFORTHESEISOLATESWEREALSODETERMINEDTHEISOLATESWEREPASSAGEDTHREETIMESINPKL5CELLSANDTHEIRPATHOGENICITYWASANALYZEDBYCONTINUOUSPASSAGESEPARATELYINPIGLETSFOR7OR8TIMES，THERESULTSSHOWEDTHATTHEVIRULENCEOFEACHISOLATEWASSIGNIFICANTLYENHANCEDAFTER35PASSAGESANDREACHEDASTABLEHIGHLEVELATPASSAGE7OR8INPIGSWITHHIGHERVIRULENCETHANREFERENCESTRAINSHIMENATPASSAGE7OR8ALTHOUGHTHEYSHAREDDIFFERENTLEVELOFVIRULENCEBEFOREPASSAGESTHEIRPATHOGENICEFFECTWERESTRONGERTHANSHIMEN，THECSFVSTANDARDVIRUSALLPIGSINFECTEDWITHPASSAGEDISOALTESPRESENTEDACUTECSFWITHSIGNSOFTYPICALCSFANDVARIOUSTISSUESOFTHEINFECTEDPIGSSHOWEDSTRONGPOSITIVEFLUORESCENCEINFAINDICATINGTHATTHEVIRULENCEOFTHEISOLATESINCREASEDBYPASSAGEINPIGSTHEPARTIALE2GENESEQUENCEANALYSISOF7ISOLATESATDIFFERENTPASSAGESEXHIBITEDNODIFFERENENCEINNUELEOTIDEFROMVIRALPASSAGE，INDICATINGTHATTHEE2GENESOFDIFFERENTISOLATESWERESTABLEINPASSAGETHEREALTIMERTPCRWASUSEDTOMONITORTHEVIRALREPLICATIONOFEACHPASSAGEINBLOODOFTHEANIMALSTHERESNITSREVEALEDTHATTHEVIRUSTITERSWERELOWAFTERI一3PASSAGES，BUTINCREASEDAFTERFURTHERPASSAGEANDREACHED8STABLEHIGHLEVELAFTER58PASSAGESTHISRESULTSWERECONSISTENTWITHTHEPATHOGENICRESULTS，VERIFYINGTHATTHEENHANCEDVIRULENCEAFTERPASSAGESWASRELATEDTOTHEINCREASEOFTHEVIRUSLOADPERSISTENTINFECTIONOFCSFWASESTABLISHEDBYARTIFICIMLYINFECTINGADULTPIGSWITHTWOISOLATES，JLL／94ANDOXBHL／98，WHICHWEREOFMODERATEVIRULENCEOFTHOSEPIGSASOWANDABOARTOLERATEDTHEINFECTIONANDWERELETTOMATENATURALLYINCONSEQUENCE，THESOWSUFFEREDALIFE10NGINFECTIONWITHOUTCLINICALSIGNSUNTILBEINGSLAUGHTEREDFORRESEARCHAT750DAYSPOSTINFECTION，WHEREASSHOWEDREPRODUCTIVEFAILURESTHISSOWHADAPERSISTENTVIRUSSHIELDINGDURINGHERLIFEANDTRANSMITTEDTHEVIRUSNOTONLYHORIZONTALLYBUTALSOVERTICALLYITWASSUGGESTEDTHATTHEPERSISTENTINFECTIONINTHEBREEDINGPIGSWITHOUTCLINICALSIGNSISTHEMOSTDANGEROUSSOARCEINTRANSMISSIONOFTHEDISEASE33CSFFIELDISOLATESCOLLECTEDFROM17PROVINCESWERETYPEDBYUSINGTWOMONOCLONALANTIBODIESMAB56SPECIFICALLYRECOGNIZEDVIRULENTVIRUSESANDMABLISPECIFICALLYRECOGNIZEDATTENUATEDVIRUSHCLVTHREEOF33FIELDISOLATESCOULDBERECOGNIZEDBYMAHLLWHILETHERESTNOTTHEISOLATESCOULDBECLASSFIEDINTOTOWGROUPSACCORDINGTOTHEREACTIVITYOFTHEMWITHMAB56，NAMELYSTRONGREACTIVITYSRGROUPANDWEAKREACTIVITYWRGROUPE2GENEALIGNMENTOFTHESEISOLATESLEVEAIEDTHATTHEREWERE2UNIQUEMUTATIONSFOUNDIN2GROUPS761GAND764LINSRGROUP，WHILE761RAND764PINWRGROUPITSEEMEDTHAT761GAND764LWERETHERESIDUESDETERMININGTHEBINDINGOFTHEVIRUSESWILHMAB56HOWEVER’FURTHERINVESTIGATIONSISNEEDEDTOVEDFYTHEROLEOFSINGLEORDOUBLEMUTATIONATSITES761GAND764LINDETERMINATIONOFTHEVIRUSREACTIVITYWITHMAB56

簡介：分類號密級河南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)碩士學(xué)位論文導(dǎo)領(lǐng)論文提交日期學(xué)位授予日期致謝本文是在我尊敬的導(dǎo)師王川慶教授的悉心指導(dǎo)下完成的。一直以來，恩師在學(xué)習(xí)、生活、科研和工作等各方面無微不至的關(guān)懷，令我感激不盡，恩師的教誨和鼓勵(lì)時(shí)刻激勵(lì)著我前進(jìn)，沒有恩師的鼓勵(lì)也不會成就今天的我。恩師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、敏銳的科學(xué)思維、博大精深的學(xué)識、兢兢業(yè)業(yè)的工作作風(fēng)，吃苦耐勞的工作精神，剛正不阿的品德以及愛生如子的高尚情操使我由衷敬佩，是我人生的風(fēng)向標(biāo)。在論文即將付梓之際特向恩師致以最崇高的敬意和最衷心的感謝衷心感謝傳染病學(xué)教研室的趙軍教授、陳陸副教授、楊霞副教授、王新衛(wèi)副教授、劉紅英老師、常洪濤老師、姚慧霞老師、左新桐老師等對我實(shí)驗(yàn)工作的指導(dǎo)和幫助。感謝鄭鹿平、高冬生、王永生、李鴻雁、趙小麗、鄭逢梅、霍金耀、王帥濤、師潤、李偉豪、姬郭彪、高金良、牛貝貝、魏亞鵬、郭龍飛、周峰、余秋穎、李歡、燕賀、王曉夢、郭占達(dá)、張美玲等同學(xué)給予的無私幫助感謝同窗張曉東、李楊、李廷文、尤曉楠、葛賓、陶夢杰、高培濱等在我學(xué)習(xí)和生活方面的關(guān)心和幫助。向哺育和培養(yǎng)我的母校和傳授我知識的全體老師致以崇高的敬意，向校研究生處、院黨總支部、院行政的領(lǐng)導(dǎo)和老師們表示衷心的感謝特別感謝我的父母、我愛人以及我可愛的女兒，感謝他們?yōu)槲业那髮W(xué)之路做出的巨大犧牲和最無私的奉獻(xiàn)最后，向所有關(guān)心、支持和幫助過我的人們表示崇高的敬意和衷心的感謝，我所取得的一切進(jìn)步都?xì)w功于你們

簡介：分類號河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文密級英文題目工H星MQL旦￡墮L△區(qū)旦￡Q曼叢QLQGYQE旦旦ISOLATESOFINFECTL0USBURSALDISEASEVIRUSFROMSOMEPARTSOFHENANPROVINCES導(dǎo)專論文提交日期學(xué)位授予日期河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)學(xué)位論河南省部分地區(qū)傳染性法氏囊病病毒分學(xué)位文題目離株的分子流行病學(xué)研究級別碩士學(xué)生張宇耕學(xué)科預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師崔保安姓名專業(yè)姓名學(xué)位論文是如需保密，解密時(shí)陽J2014年6月30R是否保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人呈交論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得河南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。特此聲明。研究生簽名刪導(dǎo)師簽名么亍藝形二立7L同期刀住年嘲03同同期／，夕年∥月弓同學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意河南農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)辦法的有關(guān)規(guī)定，在畢業(yè)離開河南農(nóng)業(yè)大學(xué)后，就在校期間從事的科研工作發(fā)表的所有論文，第一署名單位為河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河南農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書?！灻麆h翩簽名穆一印長I日期臘擁乃同同期P年歹月弓同同期年

簡介：分類號密級學(xué)號2010408007單位代碼10759石河子大學(xué)石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文北疆部分地區(qū)豬2型圓環(huán)病毒病血清學(xué)及分子流行病學(xué)調(diào)查學(xué)位申請人莫敏指導(dǎo)教師剡根強(qiáng)教授教授張力高級獸醫(yī)師高級獸醫(yī)師申請學(xué)位門類級別專業(yè)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱獸醫(yī)碩士研究方向獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)所在學(xué)院動物科技學(xué)院中國新疆石河子2012年6月THESEROLOGICALMOLECULAREPIDEMIOLOGICALSURVEYOFPCINECIRCOVIRUSDISEASESOFTYPE2INPARTAREAINTHENTHOFXINJIANGADISSERTATIONSUBMITTEDTOSHIHEZIUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFVETERINARYBYMOMINMASTEROFTHEVETERINARYPROFESSIONDISSERTATIONSUPERVISPROFYANGENQIANGSENIVETERINARYOFFICERZHANGLIJUNE2012

簡介：分類號S858．28UDC碩士學(xué)位論文密級公玨廣西豬瘟病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及、單克隆抗體的制備毛燕論文答辯日期2012．5．24學(xué)位授予日期2012．6．28答辯委員會主席矍廷苤論文評閱人超到主黃夏廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同事對本論文的研究工作所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬廣西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即學(xué)校有權(quán)保存并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于口保密，在年解密后適用授權(quán)。口不保密。請?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”論文作者簽名乏／絲指導(dǎo)教癰簽名嫩作者聯(lián)系電話I}夕I睜6“盱日期辦／2，占療日期洳『26，巧電子郵箱胗江五’州④∥似M

簡介：黃劍南中山大學(xué)搏士學(xué)位論文摘要魚類神經(jīng)壞死病毒流行病學(xué)調(diào)查、組織病理觀察及其衣殼蛋白基因在鳥類細(xì)胞中的表達(dá)專業(yè)水生生物學(xué)博士生黃劍南導(dǎo)師何建國教授摘要石斑魚是我國南方種苗繁育和網(wǎng)箱養(yǎng)殖的熏要經(jīng)濟(jì)品種，病毒性神經(jīng)壞死癥VNN的爆發(fā)流行給石斑魚養(yǎng)殖造成重大損失，因此有必要對引發(fā)該病的神經(jīng)壞死病毒NNV進(jìn)行深入研究。本文采用半套式和套式逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR，對大亞灣野生和網(wǎng)箱養(yǎng)殖海水魚類、人工繁育的斜帶石斑〔印INEPHELUSEOIOIDES神經(jīng)壞死病毒的感染進(jìn)行季節(jié)性調(diào)查。共采集到5目20科69種883尾野生海水魚，1目3科11種381尾網(wǎng)箱養(yǎng)殖海水魚，斜帶石斑受精卵和人工繁殖魚苗180批。半套式RTPCR對野生和網(wǎng)箱養(yǎng)殖海水魚樣品的檢測結(jié)果，僅在巧種野生魚和8種養(yǎng)殖魚中檢測到病毒，野生和養(yǎng)殖種類的病毒檢出率分別為217和727套式RTPCR檢測的結(jié)果，38種野生魚2003年1月中有32種檢出病毒，種類的病毒檢出率為842S9種養(yǎng)殖魚2003年16月全部檢出病毒，種類的病毒檢出率為100。用半套式RTPCR方法檢測斜帶石斑受精卵和人工繁殖魚苗樣品106批，斜帶石斑魚卵9批，7批樣品陽性，陽性率778孵化后1242C1斜帶石斑魚苗97批，53批樣品陽性，陽性率546A序列測定和系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，所感染的神經(jīng)壞死病毒均為赤點(diǎn)石斑神經(jīng)壞死病毒基因型RGNNT。根據(jù)本文的調(diào)查和分析結(jié)果，4目14科25種野生海水魚和1目2科3種網(wǎng)箱養(yǎng)殖海水魚為神經(jīng)壞死病毒的新宿主。木文對赤點(diǎn)石斑EAKAARA病毒性神經(jīng)壞死癥的病理學(xué)進(jìn)行了研究。在光學(xué)顯微鏡下，在病魚的腦部、脊髓、視網(wǎng)膜可見明顯的空泡，腸的上皮層也觀察到空泡，其它器官，如鰓、心臟、肝臟、腎臟、脾臟、胰臟、皮膚、肌肉等沒有黃劍南中山大學(xué)博士學(xué)位論文摘要3’非翻譯區(qū)，因此本文推測它們在LMH中表達(dá)的差異與非翻譯區(qū)序列對蛋白表達(dá)的調(diào)控有關(guān)。本文通過改變卜一疏基乙醇濃度，觀察RGCN衣殼蛋白在SDSPAGE中移動速度的變化。WESTERNBLOT分析表明，氯化艷純化的衣殼蛋白在1234P一琉基乙醇濃度下，都有37和31KDA2條蛋白帶，在5疏基乙醇濃度下只有31KDA的小帶。PCDNA3CP7和PCDNA3FL3轉(zhuǎn)染LMH所表達(dá)的衣殼蛋白經(jīng)不同濃度的P一疏基乙醇處理后，進(jìn)行WESTERNBLOT檢測，結(jié)果沒有影響?？梢钥闯觯兓囊職さ鞍缀椭亟M蛋白經(jīng)不同濃度的卜一疏基乙醇處理后所得的結(jié)果不同。本文認(rèn)為，氯化艷純化的衣殼蛋白中非病毒蛋白含量很小，對疏基乙醇較敏感而轉(zhuǎn)染LMH所表達(dá)的衣殼蛋白中含有較多的非病毒蛋白，對疏基乙醇相對不敏感。根據(jù)以上結(jié)果，本文初步推測RGCN衣殼蛋白中不存在分子內(nèi)二硫鍵。為了確定半眺氨酸殘基縮寫為C是否參與形成衣殼蛋白分子內(nèi)二硫鍵，將病毒衣殼蛋白氨基酸序列第187和201位C都突變成甘氨酸殘基縮寫為G，即將PCDNA3CP7中187位、201位C都突變?yōu)镚，分別構(gòu)建突變重組質(zhì)粒PCDNA3CP7MUTT和PCDNA3CP7MUT3，將PCDNA3FL3中187位C突變?yōu)镚，構(gòu)建突變重組質(zhì)粒PCDNA3FL3MUTT。經(jīng)WESTERNBLOT檢測，PCDNA3CP7MUTT和PCDNA3CP7MUT3所表達(dá)的蛋白與PCDNA3CP7所表達(dá)蛋白的分子量相同，都只有31KDA一條帶。PCDNA3FL3MUT2所表達(dá)的蛋白與PCDNA3FL3所表達(dá)蛋白的分子量相同，都是40KDA。因此本文認(rèn)為衣殼蛋白第187和201位的C都沒有參與形成分子內(nèi)二硫鍵，也進(jìn)一步說明了RGCN衣殼蛋白中不存在分子內(nèi)二硫鍵。關(guān)鍵詞神經(jīng)壞死病毒赤點(diǎn)石斑流行病學(xué)調(diào)查組織病理觀察衣殼蛋白LMH表達(dá)

簡介：EPIDEMIOLOGICALSI瓜VEYOFSWINEINFLUENZAVIRUSH1N1ANDH3N2INSWINEBYZHUXIANGLEISUPERVISEDBYPROF．LUCHENGPINGPROF．ZHANGZHENLANADISSERTATIONSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEMASTEROFPROFESSIONALDEGREEINVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINJUNE2012COMMENCEMENTINJUNE2012目錄目錄摘耍．?．．．????????．．?．．???．??．．?．．????????．?．．．．．?????????????IABSTRACT????????????????????????????????????????III英文縮寫詞表??????????????????????????????????????．V第一篇文獻(xiàn)綜述???????????????????????????????????。1第一章豬流感的研究概況?????????????????1豬流感流行情況與流行特征?????????????????????．11．1流行情況???????????????????????????11．2流行特征???????????????????????????22臨床癥狀??????????????．???????????????33發(fā)病機(jī)理及病理變化????????????????????????。44免疫機(jī)制?????????????????????????????．45診斷方法??????????????????????????????45．1血清學(xué)診斷??????????????????????????55．1．1血凝抑制試驗(yàn)??????????????????????．．55．1。2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)????????????????????。55．2分子生物學(xué)診斷????????????????????????55．2．1實(shí)時(shí)熒光定量PCR????????????????????65．2．2依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)NASBA?????????????．65．2．3基因芯片????????????????????????．6參考文獻(xiàn)??????????????????????????????。8第二章豬流感病毒概述?????????????????????????????。1L1病毒結(jié)構(gòu)?????????????????????????????112理化性質(zhì)?????????????????????????????123生物學(xué)特性????????????????????????????123．1血凝性???????????????????????????．．123．2抗原性???????????????????????????．．12

簡介：ANHHIAGRICLLLTHR饒LUNIVERSITYDISSERTATIONFORTHEMASTERATEISOLATIONANDINDENTIFICATIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFCANDIDATESUPERVISORDUCKDERIVEDFLAVIVIRUSINANHUIZHAOYUANYUANPROFWANGGUIJUNACADEMICDEGREEAPPLIEDFORMASTEROFAGRICULTURESPECIALITYPREVENTIVEVETERINARYSCIENCERESEARCHFIELDINFECTIOUSDISEASESOFDOMESTICANIMALSCOLLEGEANIMALSCIENCEANDTECHNOLOGYCOLLEGEJUNE，2012獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名聲奪固圓時(shí)間2。／2年鄉(xiāng)月7日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議研究生簽名第一導(dǎo)師簽名趙固凰時(shí)間衛(wèi)口／文年／月7日時(shí)間A。／久年∥月7日

簡介：MOLECULAREPIDEⅧOLOGICALSURVEYANDGENETICVFUUATIONOFPORCINECIRCOⅥRUSTYPE2INEASTERNCHINAXIAOQISUPERVISORPROFYANGQIANPROFHEKONGWANGATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFDLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEMASTERDEGREEOFVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINJUNE2012COMMENCEMENTINJUNE2012目錄目錄符號說明I摘要ⅢABSTRACTV第一篇文獻(xiàn)綜述1第一章豬圓環(huán)病毒2型的研究進(jìn)展11病原學(xué)211病毒分類212病毒結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性213病毒的細(xì)胞培養(yǎng)特性。314PCV2的基因組結(jié)構(gòu)315PCV2的基因型42流行病學(xué)421PCV2的流行情況422PCV2的傳染源、傳播途徑及易感動物53PCV2感染的臨床表現(xiàn)及病理變化54PCV2致病機(jī)理65PCV2的檢測方法66PCV2的防治7參考文獻(xiàn)8第二篇試驗(yàn)研究13第二章華東地區(qū)PCV2流行病學(xué)調(diào)查131材料和方法1411病料1412病毒毒株1413主要儀器1414主要試劑及配制1415病料處理1516血清與病料組織中PCV2核酸的提取1517引物15

簡介：崔楊鴆包涵體肝炎肉毒DNA探針的制備及』C流行病學(xué)調(diào)金雞包涵體肝炎病毒部分血清型DNA探針的制備及其流行病學(xué)調(diào)查摘要雞包涵體肝炎CHICKENINCLUSIONBODYHEPATITIS，IBH是由禽腺病毒引起的一種世界范圍內(nèi)的急性傳染病。主要發(fā)生于37周齡的肉雞，是由多種不同血清型的禽腺病毒引起的，可與其它的細(xì)菌病毒繼發(fā)或并發(fā)感染。禽腺病毒屬于禽腺病毒科禽腺病毒屬的成員，目前為止，人們發(fā)現(xiàn)有12個(gè)血清型的禽腺病毒與雞包涵體肝炎相關(guān)。其中與自然爆發(fā)的包涵體肝炎相關(guān)的血清型至少有10個(gè)。2型、3型、4型、5型、6型、7型和8型為引起雞IBH的主要血清型。自然爆發(fā)的雞包涵體肝炎的特點(diǎn)為病雞突然死亡，感染后34天為高峰期，5天后恢復(fù)正常，但有時(shí)會持續(xù)23周。主要表現(xiàn)為嚴(yán)重貧血、肝臟腫大出血和壞死灶、黃疸、肝細(xì)胞核內(nèi)可見包涵體。我國于1976年首先在臺灣省發(fā)現(xiàn)該病，此后在江蘇省、湖南省、吉林省、遼寧省、河南省和內(nèi)蒙古都相繼發(fā)生，呈R益蔓延趨勢。雞包涵體肝炎給世界范圍內(nèi)的養(yǎng)禽業(yè)帶來了重大的損失。斑點(diǎn)雜交技術(shù)簡單的操作以及較低的成本是檢測此病理想的選擇。雞禽腺病毒的最佳分離培養(yǎng)物是雞胚，經(jīng)由卵黃囊接種后，胚胎可于2～7天內(nèi)死亡，在肝細(xì)胞中?？梢娛葔A性核內(nèi)包涵體，其細(xì)胞核可較正常大2～3倍。將各血清型標(biāo)準(zhǔn)毒株通過雞胚卵黃囊接種對其進(jìn)行增殖培養(yǎng)，從NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫中禽腺病毒血清型3、5、6、7、9、10、11六鄰體蛋白基因的標(biāo)準(zhǔn)序列里，找出保守性序列和血清型之間同源性低的序列，用此段序列來設(shè)計(jì)7對引物。分別提取增殖的病毒的DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到相應(yīng)大小的目的產(chǎn)物，目的條帶經(jīng)切膠回收定量后，用地高辛標(biāo)記即為包涵體肝炎病毒核酸探針，將探針進(jìn)行靈敏度檢測后，可以得出探針的最小檢出量均達(dá)到5PG。通過特異性檢測可知各血清型探針之間不存在交叉反應(yīng)。建立斑點(diǎn)雜交的檢測方法，并用于檢測山東、江蘇、河南部分地區(qū)采集的病料，上述各地區(qū)均檢出陽性病雞。通過實(shí)驗(yàn)，并結(jié)合師兄師姐前面所監(jiān)測的其他5種血清型，表明了雞包涵體肝炎病的普遍流行，其中以血清2、3、4、5、6、7、8型腺病毒的流行較為普遍，同之前的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果是一致的。本實(shí)驗(yàn)建立的斑點(diǎn)雜交診斷方法有較高的靈敏度和良好的特異性，通過建立的斑點(diǎn)雜交診斷方法可以對陽性病料進(jìn)行檢測，可用于生產(chǎn)中實(shí)驗(yàn)室的診斷以及檢測。關(guān)鍵詞包涵體肝炎，SPF雞胚，六鄰體蛋白，斑點(diǎn)雜交，地高辛諾楊雞包涵體肝炎倆毒DNA探針的制備及L￡流行病學(xué)訓(xùn)盤38THESYSTEMOFTHEDOTBLOTHYBRIDIZATIONBYTHEDIGOXINLABELEDPROBEISSHOWINGWELLAVAILABILITYITISLIKELYTOBEUSEDINTHEBREEDINDUSTRYANDLABORATORYDIAGNOSISKEYWORDSINCLUSIONBODYHEPATITIS，SPFCHICKEMBRYO，HEXON，DOTBLOTHYBRIDIZATION，DIGOXIN

簡介：MOLECULAREPIDEMIOLOGYANDDEVELOPMENTOFINDIRECTELISAMETHODOFPORCINEEPIDEMICDIARRHEAⅥRUSWANGMINGSUPERVISEDBYPROF．YAOHUOCHUNADISSERTATIONSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYINVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINMAY2013COMMENCEMENTINJUNE2013目錄目錄摘要???????????????????????????????????????????????????IABSTRACT??????????????????????????????????????????????．．III第一篇文獻(xiàn)綜述?????????????????????????????????．．1豬流行性腹瀉研究進(jìn)展???????????????????????????????11PED簡JN?????????????????????????????????????????????．．12PEDV概述????????????????????????????????????????????．．12．1PEDV粒子結(jié)構(gòu)?????????????????????????????12．2PEDV理化與培養(yǎng)特性??????????????????????????42．3PEDV生物學(xué)分類地位??????????????????????????53PED流行特點(diǎn)和流行情況???????????????????????????．54PED發(fā)病機(jī)理?????????????????????????????????85PED診斷技術(shù)????????????????????????????????．86PED的防治?????????????????????????????????1L參考文獻(xiàn)??????????????????????????????????．．13第二篇研究內(nèi)容?????????????????????????????????2L第一章豬流行性腹瀉病毒RT．PCR檢測方法的建立與流行病學(xué)調(diào)查???????????2L1材料???????????????????????????????????????????????一221．1毒株及被檢樣本????????????????????????????221．2主要儀器設(shè)備?????????????????????????????221．3主要試劑???????????????????????????????222方J法???????????????????????????????????????????????．．222．1引物設(shè)計(jì)???????????????????????????????222．2病毒RNA的提取???????????????????????????．222．3反轉(zhuǎn)錄制備CDNA???????????????????????????232．4PCR條件的優(yōu)化????????????????????????????232．5敏感性實(shí)驗(yàn)??????????????????????????????242．6特異性實(shí)驗(yàn)??????????????????????????????242．7病料的采集與RT．PCR方法的臨床應(yīng)用??????????????????243結(jié)果???????????????????????????????????????????????。25

簡介：ESTABLISHMENTANDAPPLICATIONOFAFLUORESCENTQUANTITATIVEPCRFORPORCINEBOCAⅥRUSANDITSMOLECULAREPⅡEMIOLOGⅥNPARTLU。REGIONSOFCH礬ABYHONGBIAOZHANGSUPERVISEDBYASSOCIATEPROFYONGJIELIUPROFSHISHANYUANSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINJUNE2012COMMENCEMENTINJUNE2012目錄目錄摘要IABSTRACTIII符號說明V第一篇文獻(xiàn)綜述1第一章豬博卡病毒研究進(jìn)展LL博卡病毒屬由來一L2病毒的發(fā)現(xiàn)及分類23病毒基本特征64流行病學(xué)85病毒分離及檢測方法LO6病毒致病性L17展望12參考文獻(xiàn)13第二篇試驗(yàn)研究19第二章豬博卡病毒遺傳分析及其在我國部分地區(qū)流行病學(xué)研究191材料與方法202結(jié)果273討念38參考文獻(xiàn)39第三章豬博卡病毒NPL基因的原核表達(dá)及多抗制各43L材料與方法432結(jié)果483討論SL參考文獻(xiàn)53第四章豬博卡病毒熒光定量PCR方法的建立與應(yīng)用57L材料與方法S82結(jié)果6L3討論65

簡介：中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文急性病毒性壞死病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及奧爾森帕金蟲環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立姓名曲朋申請學(xué)位級別碩士專業(yè)水生生物學(xué)指導(dǎo)教師王崇明；潘魯青201206急性病毒性壞死病毒A、RNV分子流行病學(xué)調(diào)查及奧爾森帕金蟲環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立用。兩個(gè)養(yǎng)殖海區(qū)中紫貽貝、麥稈蟲和長牡蠣樣品均檢出AVNV陽性，青島流清河灣養(yǎng)殖海區(qū)的東方縫棲蛤未檢出有AⅥ叮V陽性，表明紫貽貝、麥稈蟲和長牡蠣可攜帶AⅥW，為AⅥ小，的宿主，東方縫棲蛤與柄海鞘未檢出AⅥ呵V陽性，可能不是A、仆『、R的宿主。自2010年5月至2011年12月問，從中國沿海6省14個(gè)養(yǎng)殖海區(qū)共采集24批次390份樣品，其中包括9種主要海水養(yǎng)殖貝類，包括雙殼綱貝類7種，腹足綱2種。使用PCR方法檢測這些貝類樣品越仆『、，攜帶情況，有5種貝類樣品可攜帶越剛V，說明筒烈V在養(yǎng)殖貝類中宿主范圍分布較廣泛，包括近江牡蠣、長牡蠣、蝦夷扇貝、翡翠貽貝和紫貽貝等；共有3種貝類樣品未檢測出A、忡，陽性，包括海灣扇貝、皺紋盤鮑和黑鮑，但是受采樣地點(diǎn)、時(shí)間和樣品數(shù)量的限制，這些種類能否攜帶刪還需要進(jìn)一步研究。奧爾森帕金蟲心廊凇船D西繃F，PD艮P櫛F是重要的貝類病原性寄生蟲之一，為建立快速、準(zhǔn)確、靈敏和使用簡便的檢測方法，本文根據(jù)PD厶E萬F58SRDINA中的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)缸N鋤A1咖SC曲EDSPACER，ITS序列，使用在線設(shè)計(jì)軟件PRIMEFEXPLORERV4設(shè)計(jì)一套PD艮P，LFL州P引物，建立了環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增100PMEDIATEDISO也EMALAMPLI丘C撕ON，LAMP檢測方法，并對反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，最終確立PD西E川的25ULL√蝴P反應(yīng)體系，且最佳反應(yīng)溫度為64℃，最佳反應(yīng)時(shí)間為60MIIL。本文根據(jù)PD西繃F58SRDNAITS序列構(gòu)建陽性質(zhì)粒，驗(yàn)證了該方法檢測靈敏度約為30拷貝，且特異性良好，與海水帕金蟲N以加S淞M口砌Z淞、包納米蟲曰D，Z口M砌謝“∞口、波豆蟲砌歷爐6D面印及AⅥ蝦，等病原均無交叉反應(yīng)。使用LAMP法對2批共20個(gè)菲律賓蛤仔R”歷卻鯽卻嘲窄F玎口MM樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果表明I，AMP檢測與傳統(tǒng)PCR檢測相比，靈敏度更高，檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，同時(shí)也表明尸D厶E以F在北方貝類養(yǎng)殖區(qū)的主要養(yǎng)殖貝類中有較為廣泛的分布。本文所建立的奧爾森帕金蟲I，AMP檢測方法具有簡單、快速、靈敏且特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，可以在沿海貝類養(yǎng)殖廠及條件簡陋的實(shí)驗(yàn)室使用。關(guān)鍵詞櫛孔扇貝；PCR；A、郵7；宿主范圍；附著生物；奧爾森帕金蟲；LAMPII