中國多中心侵襲性酵母菌感染臨床相關(guān)科學(xué)研究方法體系的探索和建立.pdf

1、目的:分析中國醫(yī)院侵襲性真菌監(jiān)測(cè)網(wǎng)CHIF-NET2010-2014連續(xù)五年收集的侵襲性真菌感染分離的酵母菌的流行病學(xué)及抗真菌藥物敏感性，探索并完善真菌鑒定方法、藥敏方法、分子分型方法，耐藥機(jī)制研究，罕見真菌感染病例等相關(guān)模式研究，從而初步構(gòu)建一套關(guān)于臨床重要真菌相關(guān)的科學(xué)研究方法體系。
　　方法:CHIF-NET2010-2014五年參加單位共65家，所有收集的菌株在中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一使用分子生物學(xué)方法鑒定到種，使用紙片擴(kuò)散法測(cè)定對(duì)

2、氟康唑、伏立康唑的藥物敏感性;對(duì)Vitek MALDI-TOF MS和Bruker Biotyper MALDI-TOF MS兩套質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)研究;以羅倫隱球菌為例評(píng)價(jià)傳統(tǒng)酵母菌鑒定方法Vitek2Compact真菌鑒定卡和API20C AUX試劑條的鑒定準(zhǔn)確性;以微量肉湯稀釋法為金標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)商品化真菌藥敏試驗(yàn)試劑盒ATB(⑩)FUNGUS3的性能;以隱球菌為例研究ITS分型、MLST等分子分型技術(shù)的鑒別能力;以季也蒙念珠菌為例，研究

3、ERG11基因與唑類耐藥的關(guān)系;以橡樹念珠菌為例，對(duì)罕見真菌感染病例的臨床特點(diǎn)進(jìn)行首次報(bào)道。
　　結(jié)果:CHIF-NET2010-2014收集的9673株菌株共包含70個(gè)菌種，與分子鑒定結(jié)果相比，原始鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確率為85.9％。在所有菌種中，念珠菌屬最為常見（構(gòu)成比占91.3％），其次為隱球菌屬(6.8％)、毛孢子菌屬(0.8％)和其他少見菌屬(1.2％)。在念珠菌屬中，白念珠菌仍是最常見的菌種(44.9％)，非白念珠菌的比例超

4、過了50％。Vitek MS v2.0能將96.7％的菌株正確鑒定至種水平;而Bruker Biotyper MALDI-TOF MS鑒定酵母菌的準(zhǔn)確率可達(dá)98.8％，特別是念珠菌屬的鑒定能力更優(yōu)（準(zhǔn)確率達(dá)99.4％）。根據(jù)紙片法藥敏結(jié)果，念珠菌屬對(duì)氟康唑和伏立康唑總體耐藥率為8.8％和3.8％，白念珠菌最為敏感，耐藥率不到1％;近平滑念珠菌復(fù)合體敏感性也相對(duì)較高，達(dá)90.8％和97.5％;光滑念珠菌對(duì)氟康唑和伏立康唑的耐藥率（或非野生

5、型）分別為19.0％和18.7％，而熱帶念珠菌對(duì)兩種藥物的耐藥率五年間上升較為明顯，從5％左右均上升到20％以上。Vitek2Compact系統(tǒng)鑒定26株菌為羅倫隱球菌，通過ITS測(cè)序僅確認(rèn)兩株(7.7％)為羅倫隱球菌，API20C系統(tǒng)表現(xiàn)出相對(duì)更好的鑒定準(zhǔn)確度(83.3％)。對(duì)于氟康唑和伏立康唑，ATB(⑧)FUNGUS3肉眼判讀和微量肉湯稀釋法的總分類一致率(CA)分別是95.5％和95.4％，相比之下，ATB全自動(dòng)儀器判讀的準(zhǔn)確性

6、明顯下降，對(duì)氟康唑和伏立康唑的總CA分別為77.2％和73.3％。MLST分型可將303株菌新型隱球菌分為12個(gè)ST型別，89.8％為ST5型，ST31型是第二大型別;7株格特隱球菌基因變異較大，分為5個(gè)ST型別。對(duì)164株季也蒙念珠菌的ERG11基因進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，通過比較氨基酸序列型的多態(tài)性，共鑒定出16個(gè)基因型，其中一些型別與唑類藥物敏感性密切相關(guān)。對(duì)氟康唑耐藥的橡樹念珠菌（C.quercitrusa）作為人類致病菌進(jìn)行了首次報(bào)道

7、，并確認(rèn)這3例菌株是來自H1醫(yī)院ICU病房的院內(nèi)感染暴發(fā)。
　　結(jié)論:CHIF-NET2010-2014五年連續(xù)監(jiān)測(cè)積累了大量珍貴的菌株及臨床信息資源。本項(xiàng)研究是國內(nèi)真菌領(lǐng)域內(nèi)時(shí)間跨度最大、參與醫(yī)院最多、涉及菌株數(shù)量最多的流行病學(xué)和藥物敏感性研究，填補(bǔ)了國內(nèi)相關(guān)領(lǐng)域的空白，為中國侵襲性真菌感染診治提供重要參考。初步搭建了國內(nèi)關(guān)于真菌鑒定方法、藥敏方法、分子分型方法、耐藥機(jī)制研究、罕見感染病例報(bào)道等臨床重要真菌相關(guān)的科學(xué)研究方法體系