右美托咪定通過PI3K-AKT途徑抑制線粒體凋亡信號改善急性肺損傷.pdf

1、目的：
　　急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是膿毒癥最常見的嚴(yán)重并發(fā)癥。細胞凋亡是ALI發(fā)病的重要機制。線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔(mPTP)開放后線粒體膜電位丟失，細胞色素C(Cyt c)等蛋白釋放進入細胞質(zhì)，并啟動caspase級聯(lián)反應(yīng)，引起細胞凋亡。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路是細胞內(nèi)一條重要的信號通路，可以上調(diào)Bcl-2等抗凋亡蛋白表達，下調(diào)Bax等促凋亡蛋白表達，從而抑制細胞凋

2、亡。有人證實右美托咪定(Dexmedetomidine，Dex)可以改善脂多糖(LPS)介導(dǎo)的ALI，但機制不確切。研究證實DEX可以激活PI3K/AKT信號。我們假設(shè)DEX可以激活PI3K/AKT信號通路，調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白表達，抑制凋亡，改善膿毒癥肺損傷。
　　方法：
　　通過LPS氣管內(nèi)注射建立ALI動物模型;LPS刺激A549細胞建立細胞模型。以高低兩個濃度DEX預(yù)處理，在動物及細胞水平檢測DEX對氧化應(yīng)激(試劑

3、盒檢測血清過氧化脂質(zhì)(LPO)，DCFH-DA法檢測細胞活性氧(ROS)含量），細胞凋亡（動物:TUNEI染色，細胞:AnnexinⅤPI雙染法）、線粒體凋亡信號(JC-1法檢測線粒體膜電位(MMP)，試劑盒檢測細胞ATP含量，westernblot法檢測Bcl-2及Bax蛋白表達，細胞色素C(Cyt C)釋放，caspase3活性）及肺損傷(HE染色，干濕重比法檢測肺水腫，伊文思藍法檢測肺微血管通透性)的影響;在細胞水平通過PI3K/

4、AKT特異性抑制劑LY294002處理，檢測PI3K/AKT信號在DEX抑制細胞線粒體凋亡信號中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.DEX抑制氧化應(yīng)激，線粒體凋亡信號，改善肺損傷
　　在動物水平，高劑量DEX顯著抑制LPS介導(dǎo)的肺損傷，肺水腫，肺微血管通透性增加，細胞凋亡，Bcl-2表達下降，Bax表達增加，Cyt C釋放，caspase3激活及血清LPO增加。
　　在細胞水平，高劑量DEX顯著抑制LPS介導(dǎo)的細胞凋亡

5、，MMP，ATP含量下降，Bcl-2表達下降，Bax表達增加，Cyt C釋放，caspase3激活及ROS增加。提示DEX通過濃度依賴性顯著抑制LPS介導(dǎo)的氧化應(yīng)激，線粒體凋亡信號及細胞凋亡，改善ALI。
　　2.DEX通過激活PI3K/AKT抑制線粒體凋亡信號激活
　　在細胞水平，LY294002可以顯著DEX對LPS引起的氧化應(yīng)激(ROS)，線粒體凋亡信號（MMP、ATP、CytC釋放，caspase3激活）及細胞凋亡的