新型褪黑素受體激動(dòng)劑Neu-p11對(duì)2型糖尿病大鼠糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用及HPA軸相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察新型褪黑素受體激動(dòng)劑Neu-p11對(duì)2型糖尿病（T2DM）大鼠糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用，并探討其 HPA軸相關(guān)機(jī)制，研究治療 T2DM的新方法，為 T2DM治療開(kāi)辟新途徑。
　　方法：
　　Wistar雌性大鼠72只，隨機(jī)抽取9只（1只用于制作病理切片）設(shè)為正常對(duì)照組（Control）、給予正常飼料喂養(yǎng)，其余大鼠給予高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素進(jìn)行造模處理。選取血糖≥11.1mmol·L-1者為模型成功的2型

2、糖尿病大鼠，根據(jù)血糖和體重水平分成模型組（Model）、褪黑素對(duì)照組（MLT）及 Neu-p11高（Neu-H）、中（Neu-M）、低（Neu-L）三個(gè)劑量給藥組，每組8只。按照1ml·200g-1灌胃給藥體積分別給予正常對(duì)照組和模型組等量生理鹽水，MLT組20 mg·kg-1褪黑素，Neu-p113個(gè)給藥組（劑量分別為20 mg·kg-1、10 mg·kg-1和5 mg·kg-1）。每日記錄大鼠體重、攝食、飲水量，每周測(cè)定大鼠空腹血糖

3、（FBG）水平，第25天和第33天分別對(duì)大鼠進(jìn)行情緒喚醒試驗(yàn)和礦場(chǎng)試驗(yàn)，第7天、21天、35天測(cè)定大鼠血漿血脂四項(xiàng)水平：總膽固醇（TC）水平、甘油三酯（TG）水平、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，第21天測(cè)定大鼠腹腔糖耐量（IPGTT）水平、第28天測(cè)定大鼠胰島素耐量（ITT）水平，第35天測(cè)定大鼠胰島素（INS）水平，第7天、14天、35天測(cè)定大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、促腎上腺

4、皮質(zhì)激素（ACTH）、皮質(zhì)酮（CORT）水平，第35天，將各組用于制作病理切片的大鼠（用于制作病理切片的大鼠為在成功模型大鼠中挑取血糖值相近的5只大鼠，將其隨機(jī)分為模型組、MLT組、Neu-H、Neu-M、Neu-L組，給予相應(yīng)藥物，單獨(dú)飼養(yǎng)。）進(jìn)行灌注后，取大腦、肝臟、脂肪、胰腺、腎上腺、脾臟浸泡于4％多聚甲醛中用于制作病理切片。其余大鼠斷頭處死，摘取肝臟、雙側(cè)腎臟、脾臟及雙側(cè)腎上腺組織，稱(chēng)重并計(jì)算臟器指數(shù)，稱(chēng)取適量肝臟和肌肉組織用于

5、測(cè)定糖原含量，測(cè)定肝臟葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）活性，利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠肝臟組織糖皮質(zhì)激素受體（GR）、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-4（GLUT-4）、過(guò)氧化物酶增殖體活化受體-γ（PPAR-γ）mRNA，海馬組織GR、11β羥基類(lèi)固醇脫氫酶1（11β-HSD1）mRNA，腎上腺組織GR、MT1、MT2mRNA，脂肪組織GR、脂聯(lián)素（Adipo）、PPAR-γ、瘦素（Leptin）、GLUT-4mRNA表達(dá)；并利用Western

6、 Blot技術(shù)檢測(cè)大鼠肝臟、海馬、下丘腦、垂體及腎上腺組織GR、MT1、MT2蛋白表達(dá)。利用HE染色技術(shù)觀察大鼠胰腺、肝臟、海馬、腎上腺、脾臟組織的病理變化。
　　結(jié)果：
　　與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠攝食量和飲水量顯著增加（P<0.05），體重呈降低趨勢(shì)，F(xiàn)BG顯著升高（P<0.01），情緒喚醒得分降低，水平運(yùn)動(dòng)得分和垂直運(yùn)動(dòng)得分顯著降低，分別達(dá)56.76%（P<0.01）和57.24%（P<0.01），中央停留格時(shí)間顯

7、著延長(zhǎng)105.04%（P<0.05），糖耐量和胰島素耐量水平顯著降低（P<0.05），血漿TC、TG顯著升高（P<0.05，P<0.01），HDL-C顯著降低（P<0.05），LDL-C有升高趨勢(shì)，肝糖原含量顯著降低（P<0.01），肌糖原含量有升高趨勢(shì)，肝臟、腎臟、腎上腺指數(shù)顯著升高（P<0.01），脾臟指數(shù)也呈升高趨勢(shì)，肝臟G-6-Pase活性顯著升高（P<0.01），d35 INS水平呈升高趨勢(shì)，d7血漿ACTH和CORT水平均有

8、升高趨勢(shì)，d14和d35血漿ACTH和CORT水平均有降低趨勢(shì)，糖脂代謝及HPA軸相關(guān)基因和蛋白表達(dá)異常。與模型組相比，MLT和Neu-p11給藥組大鼠攝食量均有降低趨勢(shì)，且在給藥第一周和第三周時(shí)MLT和Neu-p11不同劑量組模型大鼠攝食量分別呈現(xiàn)顯著性；各給藥組大鼠飲水量均顯著降低；體重和行為學(xué)指標(biāo)均得到改善；Neu-p11各給藥組FBG呈降低趨勢(shì)，且在d14和d35分別表現(xiàn)出顯著性差異；糖耐量、胰島素耐量、血脂、臟器指數(shù)、肝臟G-

9、6-Pase活性及HPA軸相關(guān)激素水平均得以改善；肝臟、海馬和脂肪GR mRNA（P<0.05，P<0.01），腎上腺組織MT1和MT2 mRNA（P<0.05，P<0.01），脂肪PPAR-γ、GLUT-4和AdipomRNA（P<0.05，P<0.01）上調(diào)；海馬組織11β-HSD1 mRNA，脂肪組織leptin mRNA（P<0.05，P<0.01）下調(diào)，肝臟、海馬及HPA軸相關(guān)組織的GR蛋白表達(dá)（P<0.05，P<0.01）上