長江江豚及蝙蝠B(yǎng)淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)的克隆、表達(dá)、及生物學(xué)功能研究.pdf

1、本論文共包括四個(gè)部分：
　　1.綜述近年來B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)的研究進(jìn)展。
　　2.江豚及蝙蝠的研究進(jìn)展。
　　3.本實(shí)驗(yàn)中，通過RT-PCR和RACE技術(shù)，從江豚(Neophocaena phocaenoides)血液中擴(kuò)增得到B淋巴細(xì)胞刺激因子(NpBAFF)的全長cDNA序列，并且鑒定了它的生物學(xué)活性。NpBAFF是從水生哺乳動(dòng)物中獲得的第一個(gè)BAFF基因。NpBAFF cDNA全長為1502 bp，包

2、括852bp的開放閱讀框(編碼283個(gè)氨基酸)。與其它物種已知BAFF相同，NpBAFF氨基酸序列中也含有一個(gè)預(yù)測的跨膜區(qū)，一個(gè)弗林酶切位點(diǎn)和一個(gè)典型的TNF結(jié)構(gòu)域。NpBAFF與其它已知哺乳動(dòng)物牛、豬、羊、狗在氨基酸水平上的同源性分別為87.68％，76.33％，87.68％，和82.19％。預(yù)測的NpBAFF三維結(jié)構(gòu)顯示與人的三維結(jié)構(gòu)非常類似。系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果顯示江豚與偶蹄目哺乳動(dòng)物在進(jìn)化上最接近。我們在大腸桿菌BL21(DE3)中高

3、效表達(dá)了重組可溶性SUMO-NpsBAFF蛋白，并對其進(jìn)行SDS-PAGE和western blot分析鑒定。激光共聚焦觀察顯示NpsBAFF可以結(jié)合到小鼠淋巴細(xì)胞表面。體外MTT檢測表明SUMO-NpsBAFF與anti-IgM共刺激促進(jìn)了小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的存活。這表明NpBAFF能夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞的存活，并且在鯨類與其它哺乳動(dòng)物之間存在功能交叉反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果可以為以后江豚免疫系統(tǒng)的研究提供一定的幫助。
　　4.通過RT-

4、PCR和RACE技術(shù)，從蝙蝠(Vespertilio superans Thomas)脾臟中擴(kuò)增得到B淋巴細(xì)胞刺激因子(bBAFF)的全長cDNA序列，并且鑒定了它的生物學(xué)活性。bBAFF的開放閱讀框?yàn)?73 bp，編碼290個(gè)氨基酸。序列比對顯示bBAFF含有一個(gè)TNF結(jié)構(gòu)域，一個(gè)跨膜區(qū)，一個(gè)推測的弗林酶切位點(diǎn)和三個(gè)保守的半胱氨酸殘基。實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)分析顯示bBAFF主要表達(dá)在蝙蝠的免疫器官脾臟中。SUM