雷公藤甲素通過抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒HERV-K Np9基因轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)人K562和Jurkat白血病細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的:
　　1、明確HERV-K Np9病毒基因在白血病細(xì)胞系和原代白血病細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平。
　　2、探討雷公藤甲素(TPL)對(duì)人K562和Jurkat白血病細(xì)胞HERV-K Np9基因轉(zhuǎn)錄及其下游信號(hào)分子影響。
　　3、探討雷公藤甲素誘導(dǎo)K562和Jurkat白血病細(xì)胞凋亡與其抑制Np9轉(zhuǎn)錄相關(guān)性。
　　方法:
　　1、以(0.5-64nmol/L)濃度雷公藤甲素(TPL)分別處理Jurkat, K562

2、，K562/ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1，KCL-22細(xì)胞72h和臨床白血病病人樣本48h，然后用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率并計(jì)算出相應(yīng)的半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)值。
　　2、半定量RT-PCR檢測(cè)12種血液腫瘤細(xì)胞系和臨床樣本中HERV-K Np9的表達(dá)情況。
　　3、按照0，2，4，8，16nmol/L濃度雷公藤甲素處理Jurkat和K562細(xì)胞48h

3、，流式細(xì)胞儀檢測(cè)它們凋亡細(xì)胞的變化。
　　4、半定量RT-PCR檢測(cè)加雷公藤甲素處理Jurkat和K562細(xì)胞以及原代病人樣本后，各組Np9基因mRNA的表達(dá)水平變化，并用Kodak1D3.6軟件進(jìn)行定量分析。
　　5、采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0分析雷公藤甲素對(duì)Np9基因轉(zhuǎn)錄抑制與細(xì)胞凋亡之間的相關(guān)性。
　　6、應(yīng)用Western blot檢測(cè)加雷公藤甲素后Jurakt和K562細(xì)胞中Np9下游信號(hào)分子c-myc，β

4、-catenin，p-ERK，p-Akt和Notch1蛋白水平的變化情況。
　　7、應(yīng)用Western blot檢測(cè)經(jīng)雷公藤甲素處理后Jurakt和K562細(xì)胞中凋亡相關(guān)分子PARP，caspase-3表達(dá)水平變化
　　結(jié)果:
　　1、雷公藤甲素呈劑量依賴方式抑制Jurkat，K562，K562/ADR，Raji，NB4，KM3，CML-BC，KU812，KG-1，THP-1，Kasumi-1和KCL-2212種血液系

5、統(tǒng)腫瘤細(xì)胞的增殖，其半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)在1.4 nmol/L到27.1 nmol/L之間。雷公藤甲素對(duì)于5例臨床白血病病人樣本原代白血病細(xì)胞也有明顯的增殖抑制作用，其半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)在9.13-29.2nmol/L之間。
　　2、在12種血液系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞系中，Jurkat，K562，K562/ADR, KM3細(xì)胞和臨床樣本中高表達(dá)Np9基因mRNA。
　　3、雷公藤甲素能顯著誘導(dǎo)Jurkat和K562細(xì)

6、胞凋亡，并呈劑量依賴性。
　　4、雷公藤甲素處理Jurakt和K562細(xì)胞后，Np9轉(zhuǎn)錄水平隨著雷公藤甲素作用濃度的增高而下降。雷公藤甲素也下調(diào)臨床病人樣本中Np9轉(zhuǎn)錄水平。
　　5、經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素對(duì)白血病細(xì)胞Np9基因轉(zhuǎn)錄抑制水平與其誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡之間具有顯著相關(guān)性。其中Jurkat細(xì)胞R2=0.907，K562細(xì)胞R2=0.987。兩組p值均＜0.05。
　　6、雷公藤甲素抑制白血病細(xì)胞Np9基因轉(zhuǎn)錄水平

7、的同時(shí)，平行下調(diào)其下游與白血病細(xì)胞增殖相關(guān)的信號(hào)分子c-myc，β-catenin，p-ERK, p-AKT和Notch1的蛋白水平。
　　7、雷公藤甲素呈劑量依賴方式誘導(dǎo)Jurkat和K562細(xì)胞活化的PARP和活化的caspase-3表達(dá)上升。
　　結(jié)論:
　　1、雷公藤甲素呈劑量依賴方式抑制多種血液腫瘤細(xì)胞系和原代白血病細(xì)胞的增殖。
　　2、HERV-K Np9基因mRNA在一些白血病細(xì)胞系和原代白血病細(xì)胞

8、樣本中呈高表達(dá)狀態(tài)。
　　3、雷公藤甲素抑制白血病細(xì)胞Np9基因轉(zhuǎn)錄與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡之間具有顯著相關(guān)性，提示抑制Np9轉(zhuǎn)錄可能是雷公藤甲素誘導(dǎo)Jurkat和K562細(xì)胞凋亡的重要分子機(jī)制之一。
　　4、雷公藤甲素抑制白血病細(xì)胞Np9基因轉(zhuǎn)錄同時(shí)，平行下調(diào)其下游多個(gè)與白血病細(xì)胞增殖相關(guān)的信號(hào)分子，如c-myc，β-catenin，p-ERK，p-Akt和Notch1蛋白。
　　5、HERV-K Np9可能是一個(gè)新的白血病