HCV1b型NS4B對Huh7細胞Cdc25C、CyclinB1表達的影響.pdf

1、目的：
　　研究丙型肝炎病毒1b型(HCV1b)非結構蛋白4B（NS4B）對Huh7細胞中Cdc25C、CyclinB1表達的影響及可能的機制。
　　方法：
　　運用脂質體介導技術將 pcDNA3.1(-)HCV1b NS4B質粒和干擾HCV NS4B表達的質粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR NS4B轉染Huh7細胞，命名為 Huh7-NS4B和miR-NS4B細胞，另一組細胞為 Huh7細胞。運用RT-P

2、CR技術檢測三組細胞NS4B、Cdc25C和CyclinB1的mRNA表達水平的差異,通過Western Blot檢測三組細胞NS4B、Cdc25C、CyclinB1、p-ERK蛋白表達水平的差異；將p-ERK抑制劑U0126加入 Huh7-NS4B細胞，命名為 U0126細胞，以Huh7-NS4B細胞為對照，通過RT-PCR及Western Blot技術檢測Cdc25C、CyclinB1 mRNA及蛋白的表達水平的差異。
　　結

3、果：
　　1.轉染48小時后Huh7-NS4B組、miR-NS4B組兩組細胞的NS4B mRNA相對表達量為：0.763±0.012、0.554±0.012；蛋白的相對表達量為：0.798±0.010、0.442±0.125，Huh7-NS4B組均明顯高于miR-NS4B組(p<0.01)。
　　2.轉染48小時后三組細胞Cdc25C mRNA相對表達量為：0.595±0.007、0.726±0.011、0.503±0.01

4、2，CyclinB1mRNA相對表達量為：0.834±0.011、1.019±0.017、0.672±0.011，Cdc25C蛋白的相對表達量為：0.513±0.011、0.612±0.090、0.432±0.010，CyclinB1蛋白的相對表達量為：0.502±0.105、0.611±0.011、0.411±0.011，Huh7-NS4B組均高于Huh7組和miR-NS4B組(p<0.01)，miR-NS4B組mRNA與蛋白的相對表

5、達量低于Huh7組((p<0.01)；三組細胞p-ERK蛋白相對表達量為：1.238±0.009、1.349±0.012、1.051±0.012，Huh7-NS4B組高于Huh7組和miR-NS4B組(p<0.01)；miR-NS4B組p-ERK蛋白相對表達量低于Huh7組(p<0.01)。
　　3.加入p-ERK抑制劑U0126的Huh7-NS4B細胞與未加抑制劑組中 Cdc25C mRNA的相對表達量為：0.411±0.012

6、、0.612±0.013，CyclinB1 mRNA的相對表達量為：0.886±0.017、0.985±0.008，Cdc25C蛋白相對表達量為：0.626±0.019、0.805±0.007，CyclinB1蛋白相對表達量：0.464±0.008、0.914±0.027；Huh7-NS4B組的相對表達量高于U0126組(p<0.01)。
　　結論：
　　1. HCV1b型NS4B上調Huh7細胞中的Cdc25C、Cycli