HCV1b型NS4B對(duì)Huh7細(xì)胞Cdc25C、CyclinB1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究丙型肝炎病毒1b型(HCV1b)非結(jié)構(gòu)蛋白4B（NS4B）對(duì)Huh7細(xì)胞中Cdc25C、CyclinB1表達(dá)的影響及可能的機(jī)制。
　　方法：
　　運(yùn)用脂質(zhì)體介導(dǎo)技術(shù)將 pcDNA3.1(-)HCV1b NS4B質(zhì)粒和干擾HCV NS4B表達(dá)的質(zhì)粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR NS4B轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞，命名為 Huh7-NS4B和miR-NS4B細(xì)胞，另一組細(xì)胞為 Huh7細(xì)胞。運(yùn)用RT-P

2、CR技術(shù)檢測(cè)三組細(xì)胞NS4B、Cdc25C和CyclinB1的mRNA表達(dá)水平的差異,通過(guò)Western Blot檢測(cè)三組細(xì)胞NS4B、Cdc25C、CyclinB1、p-ERK蛋白表達(dá)水平的差異；將p-ERK抑制劑U0126加入 Huh7-NS4B細(xì)胞，命名為 U0126細(xì)胞，以Huh7-NS4B細(xì)胞為對(duì)照，通過(guò)RT-PCR及Western Blot技術(shù)檢測(cè)Cdc25C、CyclinB1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平的差異。
　　結(jié)

3、果：
　　1.轉(zhuǎn)染48小時(shí)后Huh7-NS4B組、miR-NS4B組兩組細(xì)胞的NS4B mRNA相對(duì)表達(dá)量為：0.763±0.012、0.554±0.012；蛋白的相對(duì)表達(dá)量為：0.798±0.010、0.442±0.125，Huh7-NS4B組均明顯高于miR-NS4B組(p<0.01)。
　　2.轉(zhuǎn)染48小時(shí)后三組細(xì)胞Cdc25C mRNA相對(duì)表達(dá)量為：0.595±0.007、0.726±0.011、0.503±0.01

4、2，CyclinB1mRNA相對(duì)表達(dá)量為：0.834±0.011、1.019±0.017、0.672±0.011，Cdc25C蛋白的相對(duì)表達(dá)量為：0.513±0.011、0.612±0.090、0.432±0.010，CyclinB1蛋白的相對(duì)表達(dá)量為：0.502±0.105、0.611±0.011、0.411±0.011，Huh7-NS4B組均高于Huh7組和miR-NS4B組(p<0.01)，miR-NS4B組mRNA與蛋白的相對(duì)表

5、達(dá)量低于Huh7組((p<0.01)；三組細(xì)胞p-ERK蛋白相對(duì)表達(dá)量為：1.238±0.009、1.349±0.012、1.051±0.012，Huh7-NS4B組高于Huh7組和miR-NS4B組(p<0.01)；miR-NS4B組p-ERK蛋白相對(duì)表達(dá)量低于Huh7組(p<0.01)。
　　3.加入p-ERK抑制劑U0126的Huh7-NS4B細(xì)胞與未加抑制劑組中 Cdc25C mRNA的相對(duì)表達(dá)量為：0.411±0.012

6、、0.612±0.013，CyclinB1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量為：0.886±0.017、0.985±0.008，Cdc25C蛋白相對(duì)表達(dá)量為：0.626±0.019、0.805±0.007，CyclinB1蛋白相對(duì)表達(dá)量：0.464±0.008、0.914±0.027；Huh7-NS4B組的相對(duì)表達(dá)量高于U0126組(p<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1. HCV1b型NS4B上調(diào)Huh7細(xì)胞中的Cdc25C、Cycli