對一種來源于軟體動物的殼聚糖酶的初步純化.pdf

1、該論文從6036酶降解殼聚糖活性檢測手段入手,研究了影響酶活性的一系列因素,同時對現(xiàn)有的實驗方法進行了比較,確定了純化的條件,設(shè)計出一套合理而可行的實驗方案,對6036酶進行了初步的分離與純化,獲得了以下結(jié)果.1.考察了6036酶活性檢測方法,最終選擇PAHBAH還原糖測定方法作為酶活性的測定方法.2.研究了影響酶活的因素.降解殼聚糖的最佳介質(zhì)為醋酸溶液;底物濃度范圍在0-15g/l時6036酶酶活隨酶濃度增加而增大;6036酶最適反應(yīng)

2、溫度為40-50℃;反應(yīng)最適pH值為4-5;在金屬離子濃度為0-1M時,一價K<'+>、Na<'+>離子對6036酶酶活主要是促進作用;而二價Ca<'2+>離子對6036酶酶活影響在低于0.25M時促進,高于該濃度時抑制;但Mg<'2+>離子主要起抑制酶活的作用.3.通過實驗對現(xiàn)有的層析填料和層析柱套盒進行了篩選,選擇了DEAE-Sepharose,Superose12和HA層析填料作為6036酶初步純化的層析用料.4.設(shè)計出一套較為合

3、理而有效的純化6036酶的方案,首先采用DEAE-Sepharose離子交換層析,收集活性蛋白質(zhì)峰冷凍干燥后經(jīng)Superose12凝膠過濾層析除鹽同時轉(zhuǎn)換緩沖體系,將蛋白質(zhì)峰合并濃縮后上樣至HA層析柱進行分離,同時用電泳檢測分離與純化效果.分離前后條帶數(shù)目由原來的25條減少至8條,而比活性則增加了24倍.該論文為完全分離純化6036酶提供了基本實驗方案,為獲得高純度的降解酶打下了前期工作基礎(chǔ).可通過進一步純化酶,以酶蛋白測定蛋白質(zhì)順序,