樹突狀細(xì)胞在布魯氏菌疫苗誘導(dǎo)免疫應(yīng)答中的作用研究.pdf

1、布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種人獸共患傳染病，主要經(jīng)消化道、呼吸道和泌尿生殖黏膜以及皮膚傷口感染，引起母畜流產(chǎn)和人的“波浪熱”等疾病。大量研究證明，巨噬細(xì)胞是布魯氏菌的易感細(xì)胞。巨噬細(xì)胞被布魯氏菌感染后，由于布魯氏菌在其胞內(nèi)生存并大量繁殖，使它的抗原提呈能力喪失，不能提呈布魯氏菌的抗原，從而使免疫功能遭到破壞，導(dǎo)致持續(xù)性感染的發(fā)生。因此，如何幫助患病動(dòng)物建立有效的免疫應(yīng)答機(jī)制是當(dāng)前一個(gè)重要的研究課題。 適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動(dòng)需要

2、樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)的抗原提呈，不僅如此，DCs還能交叉提呈非復(fù)制性抗原，故被稱為機(jī)體最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，但目前尚不清楚DCs是否提呈布魯氏菌抗原及其可能的機(jī)制。 為探明陰道黏膜DCs是否參與布魯氏菌抗原提呈，研究者模擬自然感染途徑給BALB/c小鼠陰道接種了布魯氏菌凍干疫苗，然后，比較不同時(shí)間內(nèi)陰道引流淋巴結(jié)內(nèi)DCs的動(dòng)力學(xué)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，接種布魯氏菌凍干疫苗12h后，小鼠髂內(nèi)淋

3、巴結(jié)中的DCs數(shù)量開始增多，散在分布于皮質(zhì)區(qū)；48h后陰道黏膜DCs向髂內(nèi)淋巴結(jié)的遷移達(dá)到頂峰，在淋巴結(jié)T細(xì)胞區(qū)聚集，此時(shí)細(xì)胞密度較大，多個(gè)細(xì)胞簇?fù)沓蓤F(tuán)；72h后雖然DCs分布區(qū)域加大，但細(xì)胞密度相對于48h降低，大量DCs呈單個(gè)分布。而對照組未見類似改變。同時(shí)，用ELISA法對陰道接種布魯氏菌凍干疫苗的小鼠血清中IFN-γ平進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示，接種疫苗12h后，小鼠血清內(nèi)的IFN-γ含量就開始升高，但與對照組相比差異不顯著(P>0.

4、05)，而48h后，接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的:IFN-γ含量明顯升高，與對照組相比，差異顯著(22.2140±2.3056pg/mL，P<0.05)。在接種72h后，接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的IFN-γ含量達(dá)到最高峰，與對照組相比，差異極顯著(23.6507±1.4727 pg/mL，P＜0.01)。以上結(jié)果表明，陰道黏膜DCs就是布魯氏菌抗原的提呈細(xì)胞。 由于巨噬細(xì)胞是野生型或疫苗布魯氏菌的主要吞噬細(xì)胞，所以，為了進(jìn)一步探討DCs提

5、呈布魯氏菌抗原的機(jī)制，研究者采取了清除BALB/c小鼠陰道巨噬細(xì)胞的處理方法，以便為樹突狀細(xì)胞提供更多捕獲布魯氏菌抗原的機(jī)會(huì)，并模擬自然感染途徑，陰道接種了布魯氏菌疫苗，然后，比較不同時(shí)間內(nèi)陰道引流淋巴結(jié)內(nèi)DCs的動(dòng)力學(xué)變化。對照組(即陰道滴注PBS-liposome組)接種布魯氏菌凍干疫苗12h后，小鼠髂內(nèi)淋巴結(jié)中DCs數(shù)量開始增加，散在分布于皮質(zhì)區(qū)。24h后淋巴結(jié)內(nèi)DCs散在分布于副皮質(zhì)區(qū)，在48h后，DCs向髂內(nèi)淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)的遷

6、移達(dá)到頂峰，至72h，髂內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)DCs的數(shù)量有所下降，在皮質(zhì)區(qū)和副皮質(zhì)區(qū)內(nèi)呈現(xiàn)散在分布狀。實(shí)驗(yàn)組(即陰道滴注Clodronate-liposome組)接種布魯氏菌凍干疫苗，髂內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)DCs的數(shù)量沒有明顯變化。同時(shí)，用ELISA法對陰道接種布魯氏菌凍干疫苗不同時(shí)間的小鼠血清IFN-γ和IL-4水平均進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示:對照組的小鼠接種疫苗12h后，血清內(nèi)的IFN-γ含量有所升高，但與PBS組相比其差異均不顯著(P>0.05)；而24

7、h后，接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的IFN-γ含量明顯升高，與PBS組相比，差異顯著(48.7508±2.4373 pg/mL,P<0.05)；48h后含量達(dá)到最大，差異極顯著(52.3050±2.3262pg/mL，P<0.01)；而在接種72h后，接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的IF-γ含量雖降低，但與PBS組相比，差異還是顯著(51.5511±2.0772 pg/mL，P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組小鼠接種疫苗12h、24h、48h和72h后，血清內(nèi)的IF

8、N-γ含量升高，但與PBS組相比其差異均不顯著(P>0.05)。在對照組和實(shí)驗(yàn)組中，接種疫苗12h-72h組小鼠血清內(nèi)的IL-4含量與PBS組相比，差異均不顯著(P>0.05)。以上結(jié)果說明，DCs雖然是布魯氏菌的抗原提呈細(xì)胞，但其抗原提呈過程具有巨噬細(xì)胞依賴性特征，并且主要引起Th1型免疫應(yīng)答。 為闡明DCs提呈布魯氏菌抗原對巨噬細(xì)胞的依賴本質(zhì)，研究者進(jìn)行了體外布魯氏菌疫苗荷載BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的試驗(yàn)(500CFU/