長鏈非編碼RNAMEG3對人膀胱癌細胞生物學行為的作用及分子機制研究.pdf

1、長鏈非編碼RNA(long non－coding RNA，LncRNA)原先在基因組中普遍被視為“轉錄垃圾”，是不含有任何功能作用的無效的核苷酸片段。最近研究得知，盡管lncRNA不編碼蛋白質，但它涉及生命活動與生理過程的很多環(huán)節(jié)，可通過若干信號通路間接地對基因的表達水平進行精細調控。膀胱癌的發(fā)病率在所有泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中名列榜首，是最常見的泌尿系腫瘤。其頻繁地發(fā)病與復發(fā)一直困擾著泌尿外科大夫與患者，且膀胱癌的病因機制皆不清楚。因此，研

2、究膀胱癌的發(fā)生與進展在分子生物學水平上的相關機制，探求明顯的標志物與可利用的治療靶點對患者的治療相當重要。當前l(fā)ncRNA與膀胱癌的聯(lián)系逐漸受到學術界的重視，尤其是LncRNA MEG3在很多腫瘤中表達水平明顯降低，于是被推測具有抑制癌癥的功效，包括抑制癌癥的生長、浸潤與轉移等，但是長鏈非編碼RNA MEG3對膀胱癌發(fā)生、發(fā)展的作用以及作用機制尚不清楚。
　　目的:
　　1.檢測MEG3在膀胱癌中的表達水平高低，并探討MEG

3、3的表達水平高低和臨床膀胱癌分級、分期之間的聯(lián)系；
　　2.研究長鏈非編碼RNA MEG3對人膀胱癌細胞增殖、凋亡、上皮向間質轉化、侵襲、遷移的作用及分子機制研究；
　　方法:
　　1.收集來協(xié)和醫(yī)院做膀胱全切手術的病例35個，再剪取標本中的癌組織以及毗鄰正常組織，然后提取RNA并接著逆轉錄，最后檢測MEG3的相對表達量，并且探討MEG3的表達水平和臨床分級、分期的聯(lián)系；
　　2.生物公司合成MEG3 siRNA

4、用以干擾MEG3的表達水平，人工構建MEG3過表達載體pCDNA-MEG3用以升高MEG3的表達水平，與lipol2000一起分別轉染到T24、EJ中；
　　3.MEG3對膀胱癌細胞增殖、凋亡、上皮向間質轉化、侵襲、遷移的作用：MTT檢測膀胱癌細胞的生存率，克隆形成實驗評估膀胱癌細胞增殖，流式細胞術檢測膀胱癌細胞凋亡率與周期，劃痕實驗與Transwell小室評估對膀胱癌細胞侵襲、遷移的影響。
　　4.以MEG3 siRNA與

5、pCDNA-MEG3為處理因素，Western Blot檢測不同處理因素對膀胱癌細胞Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Cyclin D1、Vimentin、Snail、E-cadherin蛋白表達的影響。
　　結果:
　　1.35例病例中27例MEG3低表達（77.14％）；非肌層浸潤性膀胱癌低表達的患者占總數(shù)的百分比為55.56%，肌層浸潤性膀胱癌中低表達的患者占總數(shù)的百分比為94.12%；無淋巴結轉移

6、中的低表達患者所占的百分比為72.73%，有淋巴結轉移中的低表達患者所占的百分數(shù)為75.00%；無遠處轉移中的低表達患者所占百分比為81.25%，有遠處轉移中的低表達患者所占百分比為66.67%。
　　2.干擾MEG3后膀胱癌細胞凋亡率下降，G0/G1期膀胱癌細胞數(shù)明顯減少，膀胱癌細胞侵襲、遷移能力增強，增值率上升；過表達 MEG3后膀胱癌細胞凋亡率升高，G0/G1期膀胱癌細胞數(shù)明顯增多，膀胱癌細胞侵襲、遷移能力下降，增值率下降。

7、
　　3.干擾MEG3后能上調膀胱癌細胞Bcl-2、Cyclin D1、Vimentin、Snail的表達水平，抑制Bax、Cleaved caspase3、E-cadherin的表達。
　　4.過表達MEG3后能上調膀胱癌細胞Bax、Cleaved caspase3、E-cadherin的表達水平，抑制Bcl-2、Cyclin D1、Vimentin、Snail的表達。
　　結論:
　　1.與毗鄰正常黏膜相比，

8、MEG3在癌組織中表達水平明顯降低，并且非肌層浸潤性膀胱癌中發(fā)生低表達的比例更低。此外，MEG3表達水平高低與膀胱癌細胞轉移之間的聯(lián)系沒有特殊意義；
　　2. MEG3誘導膀胱癌細胞EMT的發(fā)生，對人膀胱癌細胞的增殖、遷移、侵襲有抑制效應，而增加了膀胱癌細胞的凋亡。
　　3. MEG3可能介導Bax、Bcl-2、Cyclin D1、Cleaved caspase3調控膀胱癌細胞的增殖與凋亡，通過Vimentin、Snail、