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文檔簡介
1、研究背景: 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白(hnRNP)是mRNA加工成熟過程中重要的核酸結(jié)合蛋白,也是風(fēng)濕性疾病中免疫應(yīng)答的靶抗原??筯rIRNP抗體具有疾病特異性。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清中的抗hnRNP抗體主要是能與hnRNPA2特異性結(jié)合的抗體,該抗體又稱抗RA33抗體。抗hnRNPA2/RA33抗體不僅是風(fēng)濕性疾病有價(jià)值的診斷指標(biāo),而且在其發(fā)病機(jī)理的研究中也具有重要意義。 研究目的及方法:以Ehrlich腹水癌細(xì)胞核
2、提取物作粗抗原,采用肝素-瓊脂糖凝膠CL-6B層析柱對此粗抗原進(jìn)行分離半純化,并對hnRNPA2進(jìn)行了基因的克隆、重組蛋白的表達(dá)和純化。以此抗原對臨床上包括137例RA在內(nèi)的多種結(jié)締組織病患者血清進(jìn)行ELISA檢測,包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)48例,原發(fā)干燥綜合征(pSS)39例,混合性結(jié)締組織病(MCTD)24例,系統(tǒng)性硬化癥(SSc)25例,血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病(SPA)28例,其他彌漫性結(jié)締組織病(CTD)42例,正常對照40例。
3、同時(shí)應(yīng)用國外Anti-RA33 Ab試劑盒以ELISA法檢測并對比檢測結(jié)果。比較抗hnRNPA2/RA33抗體在各組人群中的陽性率,并進(jìn)一步評價(jià)該抗體與RA患者臨床指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)室檢查間的關(guān)系及在RA早期診斷中的價(jià)值。 結(jié)果:本研究應(yīng)用純化的重組hnRNPA2蛋白為抗原,以ELISA方法檢測RA 137例, SLE 48例, SS 39例, MCTD 24例, SSc 25例,SPA 28例,其他CTD 42例,正常對照40例,比較
4、抗hnRNPA2/RA33抗體在各組人群中的陽性率,并進(jìn)一步評價(jià)該抗體與RA患者臨床指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)室檢查間的關(guān)系及在RA早期診斷中的價(jià)值。結(jié)果表明,抗hnRNPA2/RA33抗體在RA患者中的敏感性為37.23%,特異性為85.44%,在SLE、SS、MCTD、SSc、SPA和其他CTD患者中陽性率分別為20.83%、20.51%、25%、8%、3.57%、7.14%,抗hnRNPA2/RA33抗體在RA患者中陽性率明顯高于其他疾病組(p<
5、0.05)。與應(yīng)用國外Anti-RA33 Ab試劑盒的ELISA法檢測抗hnRNP A2/RA33抗體陽性率比較無明顯差別(P>0.05),且總體符合率高達(dá)86.88%。RA患者的年齡、病程、晨僵時(shí)間、血沉、C反應(yīng)蛋白、關(guān)節(jié)功能及X-ray分期在抗hnRNPA2/RA33抗體陽性組與陰性組患者間無顯著性差異(P>0.05)。RA患者中抗hnRNP A2/RA33抗體與類風(fēng)濕因子(RF)、抗角蛋白抗體(AKA)、抗核周因子(APF)抗體及
6、抗環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)抗體無明顯相關(guān)性(P>0.05)。 結(jié)論: 綜上所述,我們初步純化了RA33抗原,對hnRNPA2進(jìn)行了基因的克隆、重組蛋白的表達(dá)和純化,并以其為抗原,用ELISA方法檢測的抗hnRNPA2/RA33抗體是早期診斷RA的可靠指標(biāo),并與國外的Anti-RA33 Ab試劑盒的檢測結(jié)果對比無明顯差異,說明我們自制的抗RA33抗體試劑盒可以可靠的應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。研究背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid
7、 arthritis,RA)是以關(guān)節(jié)炎癥和滑膜細(xì)胞增殖為特征的全身性自身免疫性疾病,最終造成關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的破壞。趨化因子(Chemokine)是一類可誘導(dǎo)的分泌型細(xì)胞因子,在RA患者中,趨化因子對炎性細(xì)胞在關(guān)節(jié)局部的浸潤過程中具有極其重要的作用,并與滑膜炎、組織破壞及血管新生密切相關(guān)。它們的這些生物學(xué)功能是通過配體與受體結(jié)合的方式來發(fā)揮的,而趨化因子受體3(chemokine receptor 3,CXCR3)是RA中趨化因子的標(biāo)志性受體。
8、 研究目的: 研究建立實(shí)時(shí)熒光定量(RFQ)-PCR法測定外周血單個(gè)核細(xì)胞CXCR3 mRNA含量的方法;檢測CXCR3在RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中的表達(dá)水平,并與其他結(jié)締組織病(CTD)患者和健康人群進(jìn)行對照,進(jìn)而探討CXCR3在RA疾病發(fā)生和發(fā)展過程中所發(fā)揮的作用;探討CXCR3的表達(dá)水平與其他臨床常用指標(biāo)的相關(guān)性,希望能為RA尋找到能判斷病情活動(dòng)和預(yù)測預(yù)后的簡便的參考指標(biāo)。 研究方法:
9、連續(xù)選取2006年12月-2007年3月在北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕科門診或住院的病歷資料完整的RA患者51例,并將其分為活動(dòng)期和緩解期(其中活動(dòng)期28例、緩解期23例),其他CTD患者29例,健康對照組為32例,均符合各自的納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)。設(shè)計(jì)特異性的引物,用反轉(zhuǎn)錄(RT)-PCR擴(kuò)增目的片段實(shí)時(shí)檢測產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度,用所建立的RFQ-PCR方法檢測113例人群中外周血CXCR3 mRNA表達(dá)。 結(jié)果:各組的外周血CXCR3 mRNA
10、表達(dá)水平3組比較差異具有顯著性(P<0.05);組間兩兩比較發(fā)現(xiàn):RA患者在外周血的CXCR3 mRNA的表達(dá)水平明顯高于其他CTD組和正常對照組(P<0.05)。在活動(dòng)期與緩解期RA組的比較中發(fā)現(xiàn),活動(dòng)期RA患者CXCR3 mRNA的表達(dá)水平也明顯高于緩解期RA患者(P<0.05)。緩解期RA患者組、其他CTD組和正常對照組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)沒有顯著性差異(P>0.05)。而且活動(dòng)期RA患者中外周血CXCR3 mRNA表達(dá)水平與血沉(er
11、ythrosedimentation,ESR)、C反應(yīng)蛋白(C reactive protein,CRP)有密切的相關(guān)性,且存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。RA患者中外周血CXCR3 mRNA表達(dá)水平與類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor,RF)、抗角蛋白抗體(antikeratin antibody,AKA)、抗核周因子(antiperinuclear factor,APF)抗體及抗環(huán)瓜氨酸多肽(cyclical citru
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