風濕性疾病的自身抗體

1、風濕性疾病的自身抗體北京協和醫(yī)院唐福林自身抗體是指自身細胞內、細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白，見于多種風濕性疾病，尤其在彌漫性結締組織病中更為常見。目前用于臨床的常見自身抗體有抗核抗體、抗中性粒細胞胞漿抗體、抗磷脂抗體、類風濕因子、抗線粒體抗體等。自身抗體有多種檢測方法，包括間接免疫熒光法（IF）、酶聯免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、被動血凝法（PHA）、顆粒凝集法（PA）、對流免疫電泳法（CIE）、免疫雙擴散法（ID

2、）等，針對可溶性成分（如ENA、DNA、凝血因子、補體）可采用ID、CIE、ELISA、RIA法測定；針對不溶性成分可采用間接免疫熒光法。不同檢測技術的敏感性和特異性存在差別。目前各單位已采用的多種自身抗體檢測方法尚未標準化，因此某一實驗室結果難與另一個實驗室所測結果進行比較從而造成了誤判、誤導。判斷某一診斷試驗應從四個特性（敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值）來評價其效用。對于自身抗體的檢測常常因為其存在精細復雜的免疫化學反應而出

3、現交叉反應。必須指出，少部分正常人有低滴度的自身抗體，故不能僅憑某一種自身抗體的存在而診斷為某一特定的疾病。如同分析任何檢測結果一樣，自身抗體的陽性或陰性不是診斷的唯一條件，必須分析檢測方法的可靠性，必要時多次重復檢測或多家實驗室檢測，只有密切結合臨床對檢驗結果進行分析才能得出正確的診斷?？购丝贵w（AutoantibodytoNuclearAntigenANA）一定義：傳統認為抗細胞核內成分的抗體稱為ANA，這一概念強調了細胞核的重要性

4、，因為細胞核內有DNA、RNA、堿性組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種蛋白酶等復雜的化學組成，決定了ANA存在不同的成分，因此，構成了抗核抗體譜（ANAs）。隨著免疫熒光技術的改進，先進的免疫學技術的應用和分子生物學的發(fā)展，目前對ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸（nucleicacid）和核蛋白（nucleoprotein）抗體的總稱。故現在對ANA靶抗原的理解已從傳統的細胞核擴大到整個細胞。ANA在許多風濕性疾病，如系統性紅斑狼

5、瘡、硬皮病、干燥綜合征、類風濕關節(jié)炎等均可陽性，因此是診斷彌漫性結締組織病的篩選抗體。健康老年人、感染性疾病和服用某些藥物（普魯卡因酰胺、肼苯噠嗪、苯妥英鈉、異煙肼等）的患者均可有ANA陽性。1954年Hargrave發(fā)現LE細胞奠定了當今ANAs的基礎。已知LE因子即是ANA，它是一種抗DNA組蛋白（DNP）復合物的抗體，目前已采用簡易和迅速的抗DNP抗體測定取代LE細胞的檢查。二測定原理和方法：常規(guī)檢測ANA的方法是以鼠肝和鼠腎為底

6、物的間接免疫熒光法。由于某些抗原如SSARO、Jo1、rRNP等在細胞漿內比核內含量多，因此，鼠肝或鼠腎作底物檢測常呈陰性反應，為彌補這一不足，國外以核質豐富的Hep2細胞（人喉癌上皮細胞）為底物提高了ANA檢測的陽性率。對于ANA陽性的標本，應排除實驗過程中血清洗脫不盡或標有熒光素的抗人免疫球蛋白濃度過高而造成的假陽性。必須強調指出，待測血清標本一定要稀釋，因為低滴度的ANA可在感染性疾病、腫瘤及正常人中出現。未加稀釋的正常人血清可有

7、13的呈陽性ANA反應。ANA作為自身免疫性結締組織病的篩選試驗必須強調高滴度。對于ANA陰性的標本，要考慮是否有底物保存不當或操作過程中造成的誤差，抑或藥物治療后病情緩解所致。ANAS的熒光染色型別有五種。（1）均質型：核質染色均勻一致，此型與抗組蛋白抗體和抗DNA抗體有關；（2）斑點型：核質染色呈斑點狀，核膜存在，此型多與可溶性核抗原（ENA）抗體有關；（3）核仁型：僅核仁著染熒光，與4—6SRNA抗體相關，在硬皮病中較多見；（4）

8、核周（核膜）型：熒光包繞在核膜周圍，多與抗雙鏈DNA抗體有關；（5）著絲點型：處于分裂時相的Hep2細胞為底物可出現依著絲點散在排列的特殊點狀圓形，與斑點型區(qū)別的重要之處在于前者核膜已消失，主要與雷諾現象有相關性。熒光染色核型可隨血清稀釋的改變白多肽較高特異性的為B和D帶。國際上通常用對流電泳和免疫雙擴散法檢測抗Sm抗體，其陽性率在SLE中為30%左右，抗Sm抗體對早期、不典型的SLE或經治療緩解后SLE回顧性診斷有很大幫助。必須強調指

9、出，Sm和nRNP是同一分子復合物（RNA蛋白顆粒）中的不同抗原位點，其中的RNA富含尿嘧啶核苷（u1、u2、u4u6），如前述，Sm含有u1、u2和u4u6，而nRNP(u1RNP)僅含u1RNA。從理論上講，測得抗Sm抗體的同時，也應測得抗u1RNP；而測得抗u1RNP則抗Sm抗體亦可為陰性。我院開展臨床檢測15年來，用電泳和雙擴散法，尚未有抗Sm抗體陽性而抗u1RNP抗體陰性，也即抗Sm抗體陽性均伴有抗u1RNP抗體，而抗u1RN

10、P抗體可以單獨存在?？箄2RNP抗體在系統性硬化癥伴多發(fā)性肌炎的重疊綜合征中陽性頻率較高。銀屑病及雷諾現象的病人也可呈陽性?？箄3RNP抗體常與系統性硬化相關，且常伴有原發(fā)性肺動脈高壓、骨骼肌和小腸受累。（3）抗SSARO抗體：由于該抗體與干燥綜合征（Sjogrensyndromess）相關，故取名為SSA，也有人取名于最早檢測到的病人名字Ro。SSA與Ro的抗原性、生化特點一致。SSARo是含有YYRNA的蛋白質，更多存在于胞漿內。在

11、以鼠肝為底物的ANA檢測中，抗SSA抗體常呈陰性反應，而以Hep2細胞為底物，則ANA為陽性。（4）抗SSBLa、Ha抗體：另外還有一種與干燥綜合征相關的抗體稱SSB，也有人將SSB抗體以病人名字La或Ha命名。SSBLa、Ha是RNA多聚酶轉錄中的小RNA磷酸蛋白質。臨床上常規(guī)采用對流電泳和免疫雙擴散法檢測抗SSA和抗SSB抗體。近年來發(fā)展的免疫印跡檢測中的抗SSA與分子量為60KD和52KD的兩條蛋白多肽發(fā)生反應。有人認為60KD的

12、多肽在SLE中較SS更為多見?？筍SB與分子量為48KD、47KD、45KD的三條蛋白多肽反應，但48KD更具有特異性。如上所述抗SSARo和抗SSBLa、Ha與SS有關。在原發(fā)性SS病人中，抗SSARo和抗SSBLa、Ha陽性率分別為60%和40%，但在其他結締組織病人中，這兩種抗體亦可存在。以Wil2細胞提取抗原，在原發(fā)SS、SLE、RA、SD、PMDM和非結締組織病中，抗SSARo陽性率分別為75%、39%、20%、19%、25%

13、和0%；而抗SSBLa、Ha陽性率分別為59%、10%、5%、2%、5%和0%。抗SSB抗體較抗SSA抗體診斷干燥綜合征更為特異。在臨床上所謂ANA陰性的SLE病人，大部分有抗SSA抗體。進一步的研究還表明，抗SSA和抗SSB抗體陽性可造成新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導阻滯等先天性心臟病?？筍SA和抗SSB抗體常與血管炎、淋巴結腫大、白細胞減少、光過敏、皮損、紫癜等臨床癥狀相關。（5）抗rRNP抗體：rRNP（ribosomeRNP）與nRN

14、P抗原性不同，它是主要在胞漿中的一種磷酸蛋白。免疫印跡法測得抗rRNP抗體主要有38KD、16KD、15KD三條蛋白多肽。國外報道近一半的SLE病人有抗rRNP抗體。我們檢測發(fā)現，抗rRNP抗體在SLE、RA、PMDM、SS、MCTD和SD中的陽性率分別為24%、1.7%、9%、4%、0%、和0%。我們以免疫雙擴散法測得的24例抗rRNP陽性的SLE病人中37.5%（924）伴有中樞神經癥狀，而在抗rRNP陰性SLE病人中，僅12.5%

15、（216）伴又中樞神經癥狀，兩者相比有顯著性差異。我們還發(fā)現，抗rRNP抗體不會隨病情的緩解立即消失，可持續(xù)12年后才轉陰。對于僅有rRNP抗體陽性，ANA陰性的病人，應密切隨訪，若干年后可能發(fā)展為典型的SLE。（6）抗PCNA（ProliferatingCellNuclearAntigen）抗體：抗增殖細胞的核抗原抗體。PCNA是分子量為35KD的DNA聚合酶δ副蛋白。用免疫雙擴散法測得在SLE病人中陽性率為35%，其他結締組織病人中