脊髓P2X7受體在蜜蜂毒誘致的疼痛與炎癥中的作用研究.pdf

1、研究背景：既往三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate ATP)一直只被認(rèn)為是體內(nèi)的一種儲(chǔ)能和供能物質(zhì)。自“嘌呤能神經(jīng)學(xué)說”提出后，ATP被認(rèn)為是普遍存在于周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種神經(jīng)遞質(zhì)，而此類神經(jīng)遞質(zhì)結(jié)合的受體稱為嘌呤能受體(Purinergic receptors)，可分為離子通道型P2X受體和代謝型P2Y受體，P2X7受體是嘌呤能P2X受體家族成員之一。最初，P2X7受體被稱之為P2Z受體，屬于配體門控型非選擇性

2、離子通道，因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)、功能和分布特點(diǎn)，在炎癥(inflammation)和疼痛(pain)中發(fā)揮著作用。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)，利用蜜蜂毒致痛模型，我們可觀察到大鼠注射的后足有明顯的紅、腫、熱等炎癥反應(yīng)，并且產(chǎn)生了持續(xù)性自發(fā)痛反應(yīng)(persistent spontaneous nociception PSN)和機(jī)械痛敏反應(yīng)(mechanicalhyperalgesia)。近幾年來，有研究表明脊髓P2X7受體在炎癥和疼痛中扮演重要角色。<

3、br>　　 目的：我們目前的實(shí)驗(yàn)主要通過鞘內(nèi)預(yù)先給予P2X7受體拮抗劑A430789、膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸(fluorcitrate Flu)及同時(shí)給予兩種藥物，觀察這些處理對(duì)一側(cè)大鼠后肢足底皮下注射蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛反應(yīng)、機(jī)械性痛敏以及炎癥反應(yīng)的影響，用以探討脊髓水平P2X7受體在蜜蜂毒誘致的疼痛和炎癥中的作用，以及可能的機(jī)制。這些研究可能會(huì)為臨床的疼痛和炎癥治療提供新的作用靶點(diǎn)，為鎮(zhèn)痛和抗炎的藥物開發(fā)提供了新的思路。

4、
　　 材料和方法：應(yīng)用蜜蜂毒(bee venom BV)作為化學(xué)致痛劑足底皮下注射模型來研究P2X7受體拮抗劑A430789、膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸及同時(shí)給予兩種藥物在大鼠的持續(xù)自發(fā)痛反應(yīng)、機(jī)械性痛敏及炎癥反應(yīng)中的作用。實(shí)驗(yàn)采用雄性健康的SD大鼠，體重200-300克。本實(shí)驗(yàn)的給藥方式為鞘內(nèi)注射，實(shí)驗(yàn)組分別預(yù)先20分鐘在鞘內(nèi)置管大鼠的PE管中注入不同劑量的P2X7受體拮抗劑A430789、膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸及同

5、時(shí)給予兩種藥物。對(duì)照組為注射溶媒(10μl/只，DMSO:PBS=3:7)。蜜蜂毒注射后首先觀察大鼠在蜜蜂毒注射后1個(gè)小時(shí)內(nèi)的自發(fā)痛行為（縮足反射），每5分鐘為一個(gè)計(jì)時(shí)點(diǎn)。置PE管前、蜜蜂毒注射前及注射后2小時(shí)用electronic von Frey檢測(cè)注射側(cè)鼠爪的機(jī)械刺激反應(yīng)閾值(paw withdrawalmechanical threshold PWMT)以及應(yīng)用PU PAWVOLUM容積測(cè)量儀測(cè)量置PE管前、蜜蜂毒注射前及注射后

6、2小時(shí)注射側(cè)鼠爪體積。
　　 結(jié)果：
　　 (1)對(duì)自發(fā)痛的影響：與對(duì)照組相比，預(yù)先鞘內(nèi)給予P2X7受體拮抗劑A430789呈劑量依賴性地抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的自發(fā)縮足反應(yīng)；膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸也明顯抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的自發(fā)縮足反應(yīng)。然而同A430789組(10μg)相比，同時(shí)給予A430789(10μg)和氟代檸檬酸(10nmol)不但沒有進(jìn)一步增強(qiáng)A430789的抑制效應(yīng)，反而部分翻轉(zhuǎn)了其抑制效應(yīng)。
　　

7、(2)對(duì)痛敏的影響：與對(duì)照組相比，預(yù)先鞘內(nèi)給予P2X7受體拮抗劑A430789抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的機(jī)械性痛敏，且呈劑量依賴性。膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸也明顯抑制了蜜蜂毒誘發(fā)的機(jī)械性痛敏。然而同A430789組(10μg)相比，同時(shí)給予A430789(10μg)和氟代檸檬酸(10nmol)沒有進(jìn)一步增強(qiáng)A430789的抑制效應(yīng)。
　　 (3)對(duì)炎癥的影響：與對(duì)照組相比，預(yù)先鞘內(nèi)給予不同劑量的P2X7受體拮抗劑A430789對(duì)蜜蜂

8、毒誘發(fā)的鼠爪體積增加均沒有影響。膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸對(duì)蜜蜂毒誘發(fā)的鼠爪體積增加也沒有影響。進(jìn)一步同A430789組(10μg)相比，同時(shí)鞘內(nèi)給予A430789(10μg)和氟代檸檬酸(10nmol)對(duì)蜜蜂毒誘發(fā)的鼠爪體積增加也沒有影響。
　　 結(jié)論：
　　 (1)脊髓水平膠質(zhì)細(xì)胞的嘌呤能P2X7受體參與了蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛反應(yīng)。
　　 (2)脊髓水平膠質(zhì)細(xì)胞的嘌呤能P2X7受體在蜜蜂毒誘致的機(jī)械性痛