豬UBXNI基因啟動子區(qū)突變鑒定及其與系水力相關性的研究.pdf

1、肌肉細胞的形態(tài)與結構主要是由細胞骨架維持，對系水力的維持有著相當重要的作用。RhoA(Ras同源蛋白家族成員A)基因可以通過RhoA-ROCK信號途徑影響應力纖維的形成過程和維持其穩(wěn)態(tài)，影響肌動蛋白細胞骨架重組，使得細胞形態(tài)發(fā)生變化，蛋白結合水平升高，促進骨架蛋白收縮，對系水力(water holdingcapacity，WHC)具有潛在調節(jié)作用。另外有研究表明，UBXN1(UBX結構域包含蛋白1)作為一種泛素修飾調控蛋白，可以通過促進

2、肌纖維蛋白質的降解進而影響到系水力。UBXN1除了包含一個UBA結構域以外，其C端還包含一個UBX結構域，此結構域與泛素具有一定的同源相似性，它可以與泛素鏈結合，參與介導泛素蛋白酶體途徑，從而可以調節(jié)肌纖維蛋白質的降解。肌纖維蛋白的降解一方面可以減少胴體屠宰后肌肉細胞的收縮，防止過多的水分流失，另一方面降解的蛋白提供了水分儲存的空間，對于系水力水平都有提高。因此本實驗將RhoA和UBXN1作為候選基因，研究這兩個基因啟動子區(qū)域的單核苷酸

3、多態(tài)性(Singlenucleotide polymorphism，SNP)對基因表達水平以及肌肉系水力水平的影響。
　　本實驗首先選取高低組WHC樣品各16個，用熒光定量PCR檢測兩個候選基因在系水力高低組中的表達水平，發(fā)現(xiàn)兩個基因在系水力高低組的表達水平均有差異。再將高低組樣品分別進行DNA混池，將RhoA基因和UBXN1基因啟動子區(qū)2000bp序列測序，進行高低組序列對比。結果在UBXN1基因啟動子區(qū)得到了在WHC高組和低組

4、中等位基因分布模式有差異的SNP位點c.-379T＞G。采用PCR-SSCP技術對170頭杜長大三元雜交豬的c.-379T＞G位點進行大群基因分型，經過性狀關聯(lián)分析后發(fā)現(xiàn)TT型的系水力顯著高于GG型(p＜0.01)，隨后對兩組基因型各9個個體的UBXN1表達水平進行定量分析，結果發(fā)現(xiàn)TT基因型的UBXN1基因表達水平顯著高于GG型(p＜0.05)。
　　用雙熒光素酶活性分析兩種不同基因型的啟動子活性差異，報告結果顯示TT型啟動子活