柿葉黃酮抑制酪氨酸酶活性的研究.pdf

1、柿葉是柿的新鮮或干燥葉片，其味苦，具有止血、抗癌等多種醫(yī)療保健功能，柿葉的主要有效成分是黃酮類化合物。酪氨酸酶抑制劑（Tyrosinase Inhibitor，TI）通過抑制酪氨酸酶活性從而抑制黑色素的生成。因此，TI可以降低食品褐變程度從而可以作為保鮮劑。本文的目的是對柿葉中的黃酮類化合物的制備工藝進行優(yōu)化，并研究其對酪氨酸酶的抑制效果及其在果蔬保鮮中的應用。
　　本研究主要內容包括：⑴采用纖維素酶法提取柿葉黃酮(PLF)，在單

2、因素試驗基礎上選取試驗因素與水平，根據中心組合(Box-Benhnken)試驗設計原理，采用三因素三水平的響應面分析法，依據回歸分析各影響因素。以PLF得率為響應值作響應面和等高線，得出柿葉黃酮提取的最佳工藝條件為：加酶量9mg，酶解溫度52℃、pH4.8、酶解時間130min，在上述最優(yōu)條件下，柿葉黃酮得率達2.47％。⑵實驗表明AB-8樹脂的對柿葉黃酮分離效果最好，實驗所得的最佳工藝為：上柱液pH值6，上柱液流速2BV/h，樣液濃度

3、為3mg/mL，70%乙醇為洗脫液，洗脫液流速控制在2BV/h，洗脫液用量為3BV。經此條件純化后，PLF提取物中黃酮含量由9%提高到34%。AB-8大孔樹脂可以較好地分離純化PLF。⑶用L-酪氨酸為底物，用紫外分光光度法測定 PLF對酪氨酸酶的抑制作用。結果表明，PLF對酪氨酸酶的抑制效果明顯，其IC50值為2.38mg/mL，抑制作用屬于可逆過程，其抑制類型為混合型，KI為0.33，KIS為0.48。⑷對PLF進行了抗氧化實驗和絡合

4、Cu2+的實驗。實驗結果表明，PLF對DPPH?、超氧陰離子自由基(O2-)和羥自由基(OH)均有較好的清除率，對Cu2+有較強的絡合能力。說明PLF對酪氨酸酶的抑制與其較強的抗氧化能力及其絡合金屬離子的能力有關。⑸以Vc含量、TSS含量和褐變度三個指標綜合考察了PLF對鮮切蘋果的保鮮效果。結果表明：PLF對鮮切蘋果片具有一定的保鮮效果，當PLF濃度為0.1mg/mL，浸泡時間為5min時的保鮮效果最佳；PLF對鮮切蘋果片的保鮮作用與其