脂肪因子Vaspin改善2型糖尿病非酒精性脂肪肝機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.在整體水平，通過檢測2型糖尿病(T2DM)合并及不合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血漿內(nèi)臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制劑(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,Vaspin)水平，分析其與代謝及炎癥指標(biāo)的相關(guān)性，探討影響血漿vaspin水平的因素及vaspin水平與T2DM合并NAFLD的相關(guān)性。
　　2.在細(xì)胞水平，研究

2、vaspin對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的影響及其對(duì)Toll樣受體4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)表達(dá)的影響，為臨床應(yīng)用vaspin有效防治非酒精性脂肪性肝病提供初步理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.選取146例2型糖尿病患者，將其分為合并NAFLD組（A組）、不合并NAFLD組（B組），并選取60例正常人作為對(duì)照組（C組），測量研究對(duì)象的身高、體質(zhì)量、腰圍、臀圍，測定血糖、血脂、糖化血紅蛋白、胰島素、hs-CRP等生化及炎癥指

3、標(biāo)，計(jì)算腰臀比(WHR)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測研究對(duì)象的血漿vaspin和IL-6水平，采用間接測熱法檢測呼吸商(RQ)、靜息代謝率（REE）、碳水化合物氧化率(％CHO)、脂肪氧化率(％FAT)及蛋白質(zhì)氧化率(％PRO)等能量代謝指標(biāo)。
　　2.體外培養(yǎng)正常人肝細(xì)胞（L02細(xì)胞），將其隨機(jī)分為4組:A組（正常對(duì)照組），B組（20ug/ml油酸誘導(dǎo)脂肪

4、變性），C組(不同濃度vaspin干預(yù)96h，C1=200ng/ml，C2=400ng/ml，C3=800ng/ml)，D組(先用不同濃度vaspin(D1=200ng/ml，D2=400ng/ml，D3=800ng/ml)干預(yù)24h，再加油酸(20ug/ml)干預(yù)72h）。采用油紅O染色檢測肝細(xì)胞脂肪變性情況，采用MTT法檢測肝細(xì)胞增殖情況，采用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR技術(shù)分別檢測肝細(xì)胞膜上TLR4蛋白和mRNA的表達(dá)情況，采用Wes

5、tern blot和RT-PCR技術(shù)分別檢測肝細(xì)胞磷酸化核因子κB(pNF-κB p65)蛋白和NF-κB mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.在糖尿病患者中，合并NAFLD組血漿vaspin水平低于單純T2DM組（100.17±28.06vs115.90±28.18ng/ml，P＜0.05）。Pearson相關(guān)分析顯示，血漿vaspin水平與RQ、％CHO呈正相關(guān)（r分別為0.327、0.408，P＜0.01），與I

6、L-6、hsCRP、HOMA-IR、FFA、％FAT及FINS呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.508、-0.442、-0.360、-0.337、-0.336、-0.305，P＜0.01)。多元逐步回歸分析顯示，IL-6、hsCRP、HOMA-IR是血漿vaspin水平的獨(dú)立影響因素。Logistic回歸分析顯示，血漿vaspin水平降低和FFA水平升高是T2DM患者發(fā)生NAFLD的危險(xiǎn)因素。
　　2.油酸成功誘導(dǎo)L02細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，v

7、aspin預(yù)處理減輕了肝細(xì)胞脂肪變性程度。MTT法檢測L02細(xì)胞增殖情況顯示，C組和D組增殖率均高于A組和B組（P＜0.05），但C組與D組、A組與B組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。TLR4蛋白及mRNA表達(dá)情況一致，B組高于A組，D組低于B組，且D3組＜D2組＜D1組（P＜0.05），C組與A組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示vaspin能夠抑制脂肪變性肝細(xì)胞表面TLR4蛋白及mRNA的表達(dá)。各組肝細(xì)胞NF-κB

8、 mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但磷酸化NF-κB p65蛋白表達(dá)水平B組高于A組，D組低于B組，且D3組＜D2組＜D1組(P＜0.05)，C組與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明vaspin不能影響脂肪變性肝細(xì)胞NF-κB基因的表達(dá)，但能抑制其磷酸化。
　　結(jié)論：
　　1、血漿vaspin水平是T2DM患者發(fā)生NAFLD的影響因素，提示血漿vaspin水平下降可能是T2DM發(fā)生NAFLD的標(biāo)志物