LMO4的異位表達(dá)對(duì)NB4細(xì)胞增殖和分化的影響.pdf

1、背景和目的:
　　LMO4是LMO蛋白家族的成員之一，結(jié)構(gòu)與LMO2具有高度的同源性，都具有2個(gè)串聯(lián)的LIM結(jié)構(gòu)域。已知LMO2對(duì)造血和紅細(xì)胞分化成熟過程至關(guān)重要，LMO2和LMO4都能與共同的轉(zhuǎn)錄因子Lim結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白1（Lim domain binding protein1,LDB1）組成蛋白復(fù)合體共同調(diào)控調(diào)控造血，例如調(diào)控T細(xì)胞急性白血病，以及斑馬魚后期造血細(xì)胞發(fā)生，提示LMO4可能存在類似LMO2蛋白的功能，參與造血細(xì)胞

2、的發(fā)生、發(fā)育和分化。急性早幼粒白血?。╝cute promyelocytic leukemia，APL），是急性髓系白血?。╝cute myelocytic leukemia，AML）的亞型之一，主要癥狀就是在血液中和骨髓中早幼粒細(xì)胞的非正常積累，血纖維蛋白原缺乏和彌散性血管內(nèi)凝血的出現(xiàn)。特異性的染色體異位（t15:17）形成PML-RARα融合蛋白，是APL的主要病因。NB4細(xì)胞是早期從APL患者分離出來的永生化的細(xì)胞系，常常作為研究

3、造血細(xì)胞分化和增殖的細(xì)胞模型。因此本文主要探討LMO4對(duì)急性早幼粒白血病細(xì)胞（NB4）增殖和分化的影響，試圖說明LMO4是否參與APL的發(fā)病過程及其對(duì)臨床治療APL的影響。
　　方法:
　　利用熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)和Western blot(WB)檢測急性早幼粒白血病細(xì)胞系（NB4）中的LMO4表達(dá)；利用慢病毒介導(dǎo)lmo4的cDNA感染NB4細(xì)胞后，建立過量表達(dá)LMO4的NB4細(xì)胞株；采用MTT方法檢測細(xì)胞

4、增殖；使用全反式維甲酸（All trans retinoic acid,ATRA）誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化0～48h，瑞氏染色觀察分化的細(xì)胞特性；同時(shí)使用流式細(xì)胞分析技術(shù)分析NB4細(xì)胞分化后產(chǎn)生CD11b陽性的細(xì)胞比例。
　　結(jié)果:
　　qRT-PCR和WB結(jié)果均提示急性早幼粒白血病細(xì)胞中LMO4表達(dá)增加；ATRA誘導(dǎo)NB4分化時(shí)，LMO4的表達(dá)降低；MTT結(jié)果證實(shí)過量表達(dá)LMO4促進(jìn)NB4增殖；瑞氏染色和流式細(xì)胞分析等結(jié)果均顯示