噬菌體展示流感通用疫苗免疫原性及保護(hù)效果的初步評價.pdf

1、流行性感冒是一種非常嚴(yán)重的全球性的呼吸道傳染病,是人類常見的上呼吸道感染疾病之一。它的流行特點是速度快、危害性大、極易變異、難以控制等。流感病毒表面抗原能不斷的發(fā)生抗原漂移和轉(zhuǎn)換,使本來有效的疫苗對變異株失去保護(hù)效果,致使流感難以控制。在研究流感病毒的過程中,對病毒流行的預(yù)防和控制任重而道遠(yuǎn)。所以,研制具有廣譜保護(hù)特性的流感疫苗具有重要的社會意義和巨大的經(jīng)濟(jì)價值。同時,動物實驗對研究流感病毒和評價疫苗有效性起到重要的作用,因此,流感病毒

2、感染動物模型的合理建立顯得尤為重要。本論文以沙鼠、豚鼠、雪貂、樹鼩作為研究對象,分別評價四種動物作為流感病毒動物模型的敏感性、相似性、可重復(fù)性、安全性、易行性和經(jīng)濟(jì)性。選擇最適動物模型,評價基于A型流感病毒高度保守的M2e蛋白和B型流感病毒高度保守的BM2蛋白設(shè)計的新型A+B型廣譜流感緩控微球噬菌體展示疫苗的免疫原性和保護(hù)性效果。
　　 首先,采用三個型別的流感毒株A/威斯康星/67/2005(H3N2)、A/廣島/52/200

3、5(H1N1)和B/馬來西亞/2506/2004以滴鼻方式感染沙鼠、豚鼠、雪貂、樹鼩擬建立流感病毒動物模型。觀察四種動物被感染后的病理生理反應(yīng),采用血凝實驗、RT—PCR鑒定感染后鼻腔和肺部是否有病毒分布,利用細(xì)胞培養(yǎng)法檢測病毒載量的變化。通過流感病毒動物模型的建立,為疫苗免疫原性及保護(hù)效果的研究提供了一定的實驗依據(jù)。根據(jù)此結(jié)果,我們選擇豚鼠和雪貂作為模式動物進(jìn)行噬菌體展示流感通用疫苗的免疫原性和保護(hù)性效果評價。以滴鼻的方式用毒種攻擊豚

4、鼠(50μl/只)雪貂(200μl/只),每天觀察感染動物的臨床癥狀,并于感染后第1、3、5、7、9、11和13天,取鼻腔洗液和肺組織以細(xì)胞培養(yǎng)法檢測病毒效價。經(jīng)實驗確定,鼻腔中和肺組織中病毒滴度在3日時達(dá)到峰值。
　　 之后,將制備好的噬菌體微球疫苗以滴鼻的方式免疫豚鼠(50μl/只)和雪貂,(200μl/只),于第10天、第20天進(jìn)行加強(qiáng)免疫。分別于第三次免疫后第十四天和第三十天對動物進(jìn)行采血,用ELISA分別檢測血清中抗-