BMP-,5-和BMP-,9-對(duì)C-,3-H10T-,1-2-干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、第一部分C3H10T1/2干細(xì)胞的培養(yǎng)、誘導(dǎo),293細(xì)胞的培養(yǎng),AdBMP5、AdBMP9重組腺病毒的擴(kuò)增 目的:利用細(xì)胞誘導(dǎo)技術(shù)完成AdBMP5. AdBMP9重組腺病毒質(zhì)粒對(duì)C3H10T1/2干細(xì)胞的誘導(dǎo),并通過293細(xì)胞對(duì)AdBMPs. AdBMP9重組腺病毒質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增,為進(jìn)一步闡明在BMP5. BMP9在C3H10T1/2干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過程中的影響奠定基礎(chǔ)。 方法:以293細(xì)胞為工具細(xì)胞,對(duì)AdBMP5.

2、 AdBMP9重組腺病毒質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增;以濃度為2.67 ml/LAdBMP9重組腺病毒感染C3H10T1/2干細(xì)胞,并濃度為3.75ml/LAdBMP5重組腺病毒感染C3H10T1/2干細(xì)胞。 結(jié)果:AdBMP5.AdBMP9重組腺病毒可被293細(xì)胞成功擴(kuò)增;AdBMP5.AdBMP9重組腺病毒感染C3H10T1/2干細(xì)胞的感染效率分別為36%和34%。 結(jié)論:通過293細(xì)胞對(duì)AdBMP5. AdBMP9重組腺病毒擴(kuò)增,

3、病毒滴度被提高;AdBMP5.AdBMP9重組腺病毒可成功感染C3H10T1/2干細(xì)胞。 第二部分 BMP5和BMP9對(duì)C3H10T1/2干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的影響 目的:研究骨形態(tài)形成蛋白5(bone morphogenetic proteins5,BMP5)和BMP9在C3H10T1/2干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過程中的影響。 方法:以濃度為3.75ml/L的AdBMP5重組腺病毒質(zhì)粒感染C3H10T1/2干細(xì)胞

4、,并以濃度為2.67 ml/L的AdBMP9重組腺病毒質(zhì)粒感染C3H10T1/2干細(xì)胞,誘導(dǎo)后1周和2周應(yīng)用RT-PCR方法及激光共聚焦方法分別檢測(cè)C3H10T1/2干細(xì)胞中心肌特異轉(zhuǎn)錄因子及特異性蛋白的表達(dá)變化。2周后應(yīng)用電子顯微鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果:C3H10T1/2干細(xì)胞經(jīng)AdBMP5. AdBMP9重組腺病毒誘導(dǎo)1、2周后,細(xì)胞體積明顯變大,排布走向趨于一致,細(xì)胞間連接緊密,折光性增強(qiáng)。細(xì)胞中開始出現(xiàn)心肌特異

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