2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus HPV)能夠引起肛生殖器部位的多種良性及惡性病變。在HPV感染所致疾病中,尖銳濕疣是一種相當常見的性傳播疾病。雖然該疾病為良性病變,但是具有反復(fù)發(fā)作,不易痊愈的特點,往往會給患者帶來沉重的心理壓力及經(jīng)濟負擔。尖銳濕疣主要由HPV6及HPV11感染所引起,其中由HPV6感染所引起的占到了70%。因此,一種有效的HPV6疫苗能夠顯著減少尖銳濕疣的發(fā)生和傳播。
   研究表明HP

2、V L1蛋白在體外組裝而成的類病毒顆粒(Virus-Like Particle VLP)是一種良好的HPV疫苗形式,可以誘導(dǎo)高滴度的抗HPV中和抗體。目前,已有兩種HPV VLP疫苗上市,其安全性及有效性也得到了充份的證實。但是上述兩種疫苗均采用真核表達系統(tǒng),生產(chǎn)成本高,產(chǎn)品價格昂貴,難以在發(fā)展中國家推廣。而大腸桿菌表達系統(tǒng)具有培養(yǎng)條件簡單,生產(chǎn)成本低廉的突出優(yōu)點。若將其應(yīng)用于HPV6 VLP疫苗的研究中將能夠降低疫苗成本,促進該疫苗在

3、發(fā)展中國家的推廣。本研究嘗試利用大腸桿菌表達系統(tǒng)制備具有良好免疫原性及穩(wěn)定的HPV疫苗,并對該疫苗的結(jié)構(gòu)及表位進行分析。
   在本研究中并未以包涵體的形式在大腸桿菌中表達重組蛋白HPV6N5C-L1,而是將目的蛋白以非融合的形式可溶地表達于大腸桿菌中。所表達的HPV6N5C-L1蛋白在經(jīng)過鹽析沉淀,復(fù)溶,陽離子交換色譜,疏水相互作用色譜這一系列純化步驟之后,其純度能夠達到96%以上。經(jīng)純化的HPV6N5C-L1很好的保持了其天

4、然構(gòu)象,可以在緩沖液(10mmol/L PB pH6.0,150mmol/L NaCl)中組裝為半徑約為25nm左右的空心顆粒,具有典型的HPV6 VLP的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
   在上述HPV6VLP小量制備方法基礎(chǔ)上,本研究進一步進行了HPV6VLP疫苗的中試研究,以便建立高效,穩(wěn)定的HPV6 VLP中試工藝。研究結(jié)果顯示,該工藝不但具有25%左右的較高得率,而且對于目的蛋白具有良好的純化效果。經(jīng)過純化,目的蛋白的純度能夠達到96%

5、以上,而內(nèi)毒素,外源DNA含量均能夠符合藥典要求。此外,通過對三批次中試的觀察,證實了該工藝同時具有良好的穩(wěn)定性。
   中試研究所制備的HPV6VLP疫苗需要進一步進行免疫原性及穩(wěn)定性考察。實驗結(jié)果顯示,本研究制備的HPV6 VLP疫苗的ED50為0.009μg,低于對照組中Merck HPV疫苗Gardasil的0.016μg。在穩(wěn)定性研究中,HPV6 VLP疫苗原液在25℃放置7Day后,其平均水化半徑,HPLC保留時間,

6、沉降系數(shù),體外相對抗原含量均未發(fā)生明顯變化。在37℃放置7天后,HPV6 VLP的平均水化半徑有略微增大,而其余檢測指標也未見明顯變化。上述研究結(jié)果證實了本研究所制備的HPV6 VLP具有良好的免疫原性及穩(wěn)定性。
   由于HPV VLP具有復(fù)雜的空間構(gòu)象,而且HPV疫苗的效果也嚴格依賴于其正確的空間構(gòu)象的形成。因此本研究在成功制備HPV6 VLP疫苗的基礎(chǔ)上進一步對該疫苗的結(jié)構(gòu)及抗原表位進行研究,以闡明HPV6 VLP的結(jié)構(gòu)及

7、表位特征,為建立全面的疫苗質(zhì)控體系及進行疫苗設(shè)計奠定基礎(chǔ)。
   結(jié)構(gòu)分析顯示,組成大腸桿菌來源HPV6 VLP的五聚體在大小,分子量上均與理論值吻合,并且在一定條件下能夠形成晶體,具有正確的構(gòu)象。而HPV6 VLP為空心圓形顆粒,平均約半徑為25nm,表面可見殼粒,具有典型的HPV VLP的特征,與真核來源的HPV VLP無異。通過對多個中試批次樣品進行分析,可以發(fā)現(xiàn)所制備的HPV6VLP在顆粒半徑,保留時間,沉降系數(shù)等指標上

8、具有高度的一致性。
   在表位研究中,本研究篩選得到了HPV6優(yōu)勢中和單抗7A8,13H5,這兩株單抗同時還具有HPV6/11交叉中和活性。利用這兩株單抗模型與HPV6五聚體模型的分子對接,可以將HPV6的優(yōu)勢中和表位定位于HPV6VLP表面的DE,F(xiàn)G, HI三個環(huán)狀區(qū)域上。而后進一步通過同源掃描的方法驗證了上述對接結(jié)果,并且進一步將上述表位定位于HPV6VLP表面的三個區(qū)域:V138N139V140G141,E259V26

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