脂肪干細(xì)胞改善老齡大鼠勃起功能及其機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分大鼠脂肪干細(xì)胞體外培養(yǎng)分化與表型鑒定
　　【目的】探討大鼠脂肪干細(xì)胞(ADSCs)的體外培養(yǎng)方法、分化能力及免疫表型表達(dá)。
　　【方法】Ι型膠原酶消化后差速貼壁法培養(yǎng)ADSCs;CCK-8法測定ADSCs和骨髓干細(xì)胞(BMSCs)增殖率,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析;流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)鑒定免疫表型的表達(dá);特定條件下向多個方向誘導(dǎo)分化。
　　【結(jié)果】脂肪組織中含有具有多向分化能力的細(xì)胞,增殖速率明顯優(yōu)于BMSCs,表達(dá)C

2、D29、CD90,弱表達(dá)CD106,不表達(dá)CD31,CD34,CD45,CD49,CD73,CD105。
　　【結(jié)論】ADSCs具有多向分化能力,易于分離培養(yǎng),其增殖能力較BMSCs更快,并能長期穩(wěn)定增殖。
　　第二部分脂肪干細(xì)胞對老齡ED大鼠勃起功能的影響
　　【目的】探討陰莖海綿體內(nèi)注射脂肪干細(xì)胞(ADSCs)對老齡ED大鼠勃起功能的影響,以期尋找一種更理想的種子細(xì)胞來源。
　　【方法】篩選勃起功能正常的成年

3、大鼠(5月齡)及老齡ED大鼠(25月齡),分為成年對照組、未治療組、PBS組及ADSCs組,PBS組陰莖海綿體內(nèi)注射PBS,ADSCs組注射等體積含1×106個ADSCs的細(xì)胞懸液,另兩組不做任何處理。飼養(yǎng)2周后行海綿體測壓,分析ADSCs對老齡ED大鼠勃起功能的影響。
　　【結(jié)果】
　　1.未治療組及PBS組老齡大鼠MaxICP/MAP在2.5V、5V、7.5V三個電壓刺激下均顯著低于成年對照組(P<0.01);
　

4、　2.未治療組與PBS組相比MaxICP/MAP在三個電壓刺激下無顯著差異(P>0.05);
　　3.ADSCs組老齡大鼠MaxICP/MAP在三個電壓刺激下均顯著高于未治療組及PBS組(P<0.01),但也顯著低于成年對照組(P<0.01)。
　　【結(jié)論】ADSCs可顯著改善老齡ED大鼠的勃起功能,可能成為未來組織工程學(xué)領(lǐng)域內(nèi)治療年齡相關(guān)性ED更為理想的種子細(xì)胞。
　　第三部分脂肪干細(xì)胞改善老齡ED大鼠勃起功能的機(jī)制

5、研究
　　【目的】探討ADSCs是否通過逆轉(zhuǎn)陰莖海綿體結(jié)構(gòu)重構(gòu)改善老齡ED大鼠的勃起功能。
　　【方法】
　　1.CM-DiI標(biāo)記ADSCs后檢測細(xì)胞增殖率及14d內(nèi)細(xì)胞熒光強(qiáng)度變化,FCM分析其不同時間點的標(biāo)記率;
　　2.大鼠分組同第二部分,ADSCs組注射CM-DiI標(biāo)記的ADSCs的細(xì)胞懸液。飼養(yǎng)2周后取陰莖海綿體組織,免疫熒光法檢測vWF表達(dá),Masson三色染色法定性平滑肌、膠原纖維,Image-Pr

6、oPlus6.0定量分析內(nèi)皮細(xì)胞/總面積(VECs/grossarea)及平滑肌/膠原纖維面積(SM/collagen),分析ADSCs對老齡ED大鼠內(nèi)皮及平滑肌細(xì)胞的影響。
　　【結(jié)果】
　　1.CM-DiI標(biāo)記后熒光強(qiáng)度隨時間逐漸減弱,但至14d時仍清晰可見;1d、7d、14d標(biāo)記率分別為:99.22％、97.61%、93.11%;
　　2.CM-DiI標(biāo)記與未標(biāo)記的ADSCs在各時間點的增殖能力無統(tǒng)計學(xué)差異(P>

7、0.05);3.ADSCs注射2周后,陰莖海綿體組織內(nèi)僅觀察到極少量標(biāo)記后的細(xì)胞;
　　4.ADSCs治療組vWF表達(dá)增加,VECs/grossarea比例增大,雖顯著低于成年對照組(P<0.01),但也顯著高于未治療組和PBS組(P<0.01);
　　5.ADSCs治療組海綿體平滑肌細(xì)胞數(shù)量明顯增加,SM/collagen比例增大,顯著低于成年對照組(P<0.01),但也顯著高于未治療組和PBS組(P<0.01)。