尤氏泰勒蟲TuIP、Tu88蛋白特性分析及其應(yīng)用.pdf

1、羊泰勒蟲病是由泰勒蟲屬病原經(jīng)硬蜱傳播感染綿羊或山羊而引起的血液原蟲病。尤氏泰勒蟲（Theileria uilenbergi）和呂氏泰勒蟲（T.luwenshuni）是引起我國羊泰勒蟲病的主要病原。在本課題組前期的研究中，從尤氏泰勒蟲裂殖子cDNA文庫中篩選到了TuIP和Tu88兩個基因，重組表達(dá)的TuIP和Tu88蛋白都能和尤氏泰勒蟲的陽性血清發(fā)生反應(yīng)，表現(xiàn)出了較好的抗原性。本研究進(jìn)一步分析了這兩種蛋白的功能特征，并分別以TuIP重組蛋

2、白為抗原和以TuIP基因為靶標(biāo)建立了兩種用于我國羊泰勒蟲檢測的快速診斷技術(shù)。
　　本研究利用間接免疫熒光試驗(IFA)和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)研究了TuIP和Tu88蛋白在尤氏泰勒蟲裂殖子中的表達(dá)和分布情況。結(jié)果表明，制備的抗rTuIP和抗rTu88兔血清均能與尤氏泰勒蟲裂殖子中的天然蛋白反應(yīng)，同時發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白都分布在尤氏泰勒蟲裂殖子胞質(zhì)中。
　　利用TuIP重組蛋白完成了羊泰勒蟲病免疫膠體金試紙條的研制。在硝酸纖維素膜上分

3、別包被rTuIP抗原和抗rTuIP多克隆抗體作為檢測線和質(zhì)控線，膠體金-rTuIP標(biāo)記物噴涂于玻璃纖維紙上制成膠體金墊。將試紙條各組成成分（樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水墊）按順序組裝在PVC墊上，制成了羊泰勒蟲病免疫膠體金試紙條。該試紙條能夠在15min內(nèi)完成血清樣品檢測。通過用該試紙條對6只尤氏泰勒蟲感染的實驗羊不同時間點采集的血清進(jìn)行檢測，結(jié)果表明該試紙條能夠檢測到感染后14到85天內(nèi)血清中的抗體，即感染早期和后期病例均能被

4、檢測出。
　　根據(jù)TuIP基因序列設(shè)計出一對特異性引物，建立了尤氏泰勒蟲實時熒光定量PCR。該方法的檢測靈敏度為102拷貝/μL。與呂氏泰勒蟲、羊無漿體和羊巴貝斯蟲沒有交叉反應(yīng)，說明具有較好的特異性。組內(nèi)重復(fù)性和組間重復(fù)性結(jié)果顯示組內(nèi)變異系數(shù)(CV)在0.93％和3.25％范圍內(nèi)，小于5％;組間變異系數(shù)(CV)在1.55％和4.32％范圍內(nèi)，小于10％;表明該方法具有較好的穩(wěn)定性。
　　結(jié)論，本研究建立的羊泰勒蟲病免疫膠體金