膠乳微球式aAPC的制備及其誘導(dǎo)抗腫瘤主動(dòng)免疫反應(yīng)的初步研究.pdf

1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文膠乳微球式aAPC的制備及其誘導(dǎo)抗腫瘤主動(dòng)免疫反應(yīng)的初步研究姓名：程凱申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)；免疫學(xué)指導(dǎo)教師：沈傳來20110603東南人學(xué)碩Ij學(xué)位論文肽共孵育13天。期間于不同時(shí)間點(diǎn)取脾細(xì)胞進(jìn)行CD69和CD25熒光染色以檢測(cè)活化T細(xì)胞的比例、H2Kb，TRP2180188四聚體和H2Kb／OVA257—264四聚體熒光染色和細(xì)胞內(nèi)IFN吖的熒光染色以檢測(cè)TRP2抗原特異性T細(xì)胞的比例，并在體外與腫瘤細(xì)

2、胞株混合培養(yǎng)檢測(cè)特異性CTL的殺瘤細(xì)胞活性。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，aAPC的免疫接種使C57BL／6鼠脾細(xì)胞群中CD69／CD8細(xì)胞頻率增高至3O倍；CD25／CD8細(xì)胞頻率增高至38倍；TRP2tetr鋤er／CD8細(xì)胞頻率增高至72倍；分泌IFN丫的CD8細(xì)胞比例增高至62倍；對(duì)黑色素瘤B16細(xì)胞的特異性殺傷能力比對(duì)照組平均提高了1092％(50：1)、1155％(25：1)和903％(125：1)。據(jù)此可以認(rèn)為aAPC能夠在Na

3、ive小鼠體內(nèi)有效誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的活化和增殖并增強(qiáng)其殺瘤細(xì)胞活性。3、建立靶抗原預(yù)刺激小鼠模型并aAPC接種：皮下多點(diǎn)注射B16黑色素瘤細(xì)胞兩次，3000個(gè)／鼠／次，間隔10天。第二次注射B16后第10天開始進(jìn)行aAPC接種，方案與Na_jc_ve鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕臃N方案相同。在末次接種aAPC后5天殺鼠取脾臟，與TRP2肽共孵育后同上進(jìn)行各項(xiàng)免疫指標(biāo)的檢測(cè)。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，aAPC的免疫接種使C57BL／6鼠脾細(xì)胞群中C

4、D69／CD8細(xì)胞頻率增高至36倍；CD25／CD8細(xì)胞頻率增高至52倍；TRP2tetr鋤er／CD8細(xì)胞頻率增高至67倍；分泌IFN吖的CD8細(xì)胞比例增高至70倍；對(duì)黑色素瘤B16細(xì)胞的特異性殺傷能力比對(duì)照組提高了1885％(50：1)、2110％(25：1)和2275％(125：1)。與aAPC接種Nave鼠相比，nPC接種抗原預(yù)刺激鼠激發(fā)的CD69／CD8細(xì)胞比例是前者的3O倍；CD25／CD8細(xì)胞比例是前者的2O倍；TI沖2t

5、e仃鋤礦／CD8細(xì)胞比例是前者的18倍；IFN吖／CD8細(xì)胞比例是前者的36倍；在不同的效靶比例下，特異性殺瘤細(xì)胞活性的增強(qiáng)程度也由N柳e鼠實(shí)驗(yàn)組的1092％、1155％和903％顯著提升為l885％、211O％和2275％。這些結(jié)果顯示：利用稀釋法成功地制備了具有正確空間構(gòu)象的H一2Kb／肽復(fù)合單體及四聚體；aAPc在NaiVe小鼠和抗原預(yù)刺激小鼠體內(nèi)均能有效誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的活化和增殖并能增強(qiáng)特異性CTL的殺瘤細(xì)胞活性，其中