大腸桿菌EF-Tu多蛋白復合物誘導THP-1細胞免疫應答的研究.pdf

1、細菌延伸因子Tu(elongation factor Tu，EF—Tu)是一種高豐度蛋白，在蛋白質生物合成的延伸過程中起到了關鍵性的作用。近來研究發(fā)現(xiàn)EF—Tu可以作為一種新的病原相關分子模式(Pathogen—associated molecular patterns，PAMPs)分子而被宿主識別。作為一個具有高度保守性的細菌蛋白質，它是如何被宿主細胞所特異性地識別并進而引發(fā)宿主的哪些免疫應答反應。這無疑具有著非常重要的生物學意義。

2、 本實驗首先采用分子克隆和抗體制備技術，以模式生物大腸桿菌K12為實驗材料從其基因組中克隆出細菌延伸因子EF—Tu并制備其抗體。然后在本實驗室之前研究EF—Tu多蛋白復合物的基礎上表達并純化了EF—Tu多蛋白復合物中OmpA、EF—Tu和OmpF三個蛋白組份。接著采用Western blotting和激光共聚焦證明了OmpA、EF—Tu和OmpF三個蛋白與人單核巨噬細胞THP—1有相互作用并被細胞膜受體識別而定位于細胞膜上。最后運

3、用酶聯(lián)反應吸附試驗技術對EF—Tu多蛋白復合物所引發(fā)人單核巨噬細胞THP—1細胞的免疫反應進行研究，發(fā)現(xiàn)EF—Tu多蛋白復合物中各蛋白組份可以明顯促使THP—1細胞細胞因子IL-1β、IL—8、IL-10、IL-12和TNF—α分泌量的增多。同時應用流式細胞術發(fā)現(xiàn)EF—Tu多蛋白復合物中各蛋白組份可以顯著提高人單核巨噬細胞THP—1細胞的噬菌能力并具有劑量依賴效應。 上述研究首次發(fā)現(xiàn)了EF—Tu多蛋白復合體可以作為一種新型病原相