14-3-3β基因與卡波氏肉瘤相關性的研究.pdf

1、目的：本研究旨在利用分子生物學和細胞生物學方法初步探討14-3-3β，基因在卡波氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma，KS)發(fā)生發(fā)展中的作用以及在KS發(fā)病中的可能機制。 方法：收集21例新疆KS患者腫瘤組織、瘤旁正常皮膚組織樣本以及12例非KS患者的正常皮膚組織樣本作為對照，分別采用Real-time PCR利免疫組化技術，從mRNA和蛋白水平檢測樣本中14-3-3 β表達情況；利用基因重組技術構建14-3-3 β真核表達載

2、體，通過脂質體分別轉染人臍靜脈內皮細胞(ECV-304)與BC-3細胞，用western-blot鑒定轉染48小時后含外源性14-3-3 β的細胞株，并觀察細胞的形態(tài)結構，用 Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒檢測轉染后細胞的增殖率等生物學特征變化；應用免疫組織化學Envision二步法和原位細胞凋亡標記技術(TUNEL)對KS患者腫瘤組織及正常皮膚組織進行細胞增殖指數(shù)(proliferation index，P

3、I)及細胞凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)的檢測。 結果：(1)7例KS患者腫瘤組織中14-3-3 β基岡的mRNA表達值為3.60±2.62×10<'-1>，最低值為0.78×10<'-1>，最高值為6.83×10<'-1>； 7例KS患者止常皮膚組織中的mRNA表達值為0.95±0.50×10<'-1>，最低值為0.22×10<'-1>，最高值為1.82×10<'-1>。經配對t檢驗，KS腫瘤組織中14-3-

4、3 β的mRNA表達高于自身對照的正常皮膚組織，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.554，P<0.05)。(2)14-3-3 β蛋白在KS組織中的陽性表達率顯著高于在正常皮膚組織中的表達(x<'2>=18.958，P<0.01)，其陽性反應程度在兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=15.136，P<0.01)。(3)成功構建了14-3-3 β基因的真核表達載體，將構建的重組體分別轉染人臍靜脈內皮細胞ECV-304利BC-3細胞48h后，均有不同程度外

5、源性14-3-3 β蛋白的表達，增殖率檢測結果顯示轉染10μg/μl，20μg/μl，40μg/μl，80μg/μl重組體后，ECV-304細胞增殖率分別為19.22±19.90％、36.44±17.84％、41.51+32.52％、46.36±19.89： BC-3細胞增殖率分別為42.58±24.27％、47.26±26.99％、51.35±13.63％、81.83±20.37％，與陰性對照組及未轉染組比較，均有顯著性差異(p<0.

6、05)。(4)KS組織中PI和AI均明顯高于正常皮膚組織(t=6.914、3.183，P<0.01);KS組織中t4-3-3 β蛋白與PI呈正相關(r=0.671，P<0.01)，與AI呈正相關(r=0.649，P<0.05)。 結論：(1)14-3-3 β基因在KS組織中mRNA和蛋白表達水平均增高：(2)14-3-3 β基因過表達與KS腫瘤細胞的惡性增殖有關；(3)14-3-3 β基因在HHV-8感染的細胞中對腫瘤細胞的促增