14-3-3ζ與肺癌轉移關系的實驗研究.pdf

1、抑制消減雜交和基因芯片技術的聯合應用是克隆差異表型相關基因的有效途徑。作者利用該技術從人肺巨細胞癌高低轉移株中篩選出41條與低轉移細胞株表型相關的序列。在本研究中對其中的64號序列進行生物信息學分析，發(fā)現其與14-3-3ζ高度同源。目前有關14-3-3ζ與肺癌轉移關系的研究尚未見報道，本研究將對14-3-3ζ在肺癌轉移中的作用進行探討。 利用RT-PCR、Westernblot以及免疫細胞化學染色對14-3-3ζ在人肺巨細胞癌高

2、低轉移株中的表達水平進行了檢測，結果發(fā)現在低轉移株(PLA801C)的表達水平明顯高于高轉移株(PLA801D)。在此基礎上，成功構建了正反義真核表達載體，并轉染到PLA801C和PLA801D中。對穩(wěn)定轉染細胞株中14-3-3ζ表達水平的檢測表明正反義載體分別促進或抑制了14-3-3ζ的表達。 通過對穩(wěn)定轉染株進行的細胞生物學功能實驗，如細胞生長曲線、細胞周期、細胞集落形成、細胞黏附與遷移的研究，發(fā)現14-3-3ζ的過表達可以

3、抑制腫瘤細胞的增殖，抑制其集落形成，促進細胞的黏附，抑制其遷移能力，14-3-3ζ的失活則導致細胞增殖加快，促進集落形成，抑制細胞的黏附，促進其遷移能力。由此推斷14-3-3ζ與肺癌細胞的轉移有一定的相關性，14-3-3ζ的過表達可能抑制肺癌細胞的轉移。 利用RNA干擾技術進一步研究14-3-3ζ與肺癌細胞轉移的關系，被干涉的細胞中14-3-3ζ的表達水平明顯降低，其黏附能力明顯下降，而集落形成、遷移和侵襲能力則明顯提高。