14-3-3ζ與肺癌轉(zhuǎn)移關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、抑制消減雜交和基因芯片技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用是克隆差異表型相關(guān)基因的有效途徑。作者利用該技術(shù)從人肺巨細(xì)胞癌高低轉(zhuǎn)移株中篩選出41條與低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株表型相關(guān)的序列。在本研究中對其中的64號序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)其與14-3-3ζ高度同源。目前有關(guān)14-3-3ζ與肺癌轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究尚未見報(bào)道，本研究將對14-3-3ζ在肺癌轉(zhuǎn)移中的作用進(jìn)行探討。 利用RT-PCR、Westernblot以及免疫細(xì)胞化學(xué)染色對14-3-3ζ在人肺巨細(xì)胞癌高

2、低轉(zhuǎn)移株中的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在低轉(zhuǎn)移株(PLA801C)的表達(dá)水平明顯高于高轉(zhuǎn)移株(PLA801D)。在此基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建了正反義真核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染到PLA801C和PLA801D中。對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中14-3-3ζ表達(dá)水平的檢測表明正反義載體分別促進(jìn)或抑制了14-3-3ζ的表達(dá)。 通過對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株進(jìn)行的細(xì)胞生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞生長曲線、細(xì)胞周期、細(xì)胞集落形成、細(xì)胞黏附與遷移的研究，發(fā)現(xiàn)14-3-3ζ的過表達(dá)可以

3、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制其集落形成，促進(jìn)細(xì)胞的黏附，抑制其遷移能力，14-3-3ζ的失活則導(dǎo)致細(xì)胞增殖加快，促進(jìn)集落形成，抑制細(xì)胞的黏附，促進(jìn)其遷移能力。由此推斷14-3-3ζ與肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性，14-3-3ζ的過表達(dá)可能抑制肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。 利用RNA干擾技術(shù)進(jìn)一步研究14-3-3ζ與肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)系，被干涉的細(xì)胞中14-3-3ζ的表達(dá)水平明顯降低，其黏附能力明顯下降，而集落形成、遷移和侵襲能力則明顯提高。