調(diào)控食管癌EC9706細(xì)胞DNA polβ表達(dá)的初步研究.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文調(diào)控食管癌EC9706細(xì)胞DNApolβ表達(dá)的初步研究姓名：王濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：董子明趙國強(qiáng)20070501鄭州大學(xué)2007屆碩卜畢業(yè)論文摘要生物學(xué)特性有何影響的研究報(bào)道尚不多。RNAi技術(shù)的出現(xiàn)就為探求這一問題提供了一個(gè)新的方法。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是一種由雙鏈RNA(doublestrandsRNA，dsRNA)引起的保守的生物學(xué)反應(yīng)，dsRN

2、A經(jīng)過RNA酶III核酸酶(Dicer)處理后，降解成2卜23個(gè)堿基的siRNA(smallinterferingRNA)。siRNA與RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA—inducedsilencingcomplex，RISC)結(jié)合后，siRNA解鏈，反義鏈引導(dǎo)RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物與同源mRNA結(jié)合，從而切割mRNA，使之喪失轉(zhuǎn)錄信息，達(dá)到特異性抑制目的基因表達(dá)的效果。研究目的本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建DNApolB靶向的siRNA表達(dá)載體，將siRN

3、A表達(dá)載體和野生型pol6轉(zhuǎn)染至食管癌EC9706細(xì)胞，調(diào)控polp的表達(dá)狀態(tài)。對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞在DNApo]B不同表達(dá)水平下的生物學(xué)特性進(jìn)行了探討。旨在揭示DNApolB基因在細(xì)胞內(nèi)的適宜表達(dá)和功能狀態(tài)，為食管癌的干預(yù)防治提供新的思路及治療的靶點(diǎn)。研究方法根據(jù)GenBank報(bào)道的DNA聚合酶6的核苷酸序列(M13140)，參照siRNA的設(shè)計(jì)策略，選取了RNAi的位點(diǎn)，設(shè)計(jì)合成針對(duì)其編碼區(qū)的DNA寡核苷酸單鏈，退火后形成雙鏈。

4、與攜帶hU6啟動(dòng)子的pSINsi—hU6質(zhì)粒構(gòu)建針對(duì)DNA聚合酶B的siRNA表達(dá)載體。在陽離子脂質(zhì)體的介導(dǎo)下，將siRNA表達(dá)載體和野生型polB轉(zhuǎn)染至食管癌EC9706細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)分為五組，分別為轉(zhuǎn)染siRNA表達(dá)載體的實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2、轉(zhuǎn)染野生型pol6的pol8高表達(dá)組、轉(zhuǎn)染空載體pSINsi—hU6的空載體組和未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組，G418篩選陽性克隆后建立穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系。通過流式細(xì)胞術(shù)觀察DNApolB不同表達(dá)水平下食管癌